1、ICS 67050X 04 瘩雪中华人民共和国国家标准GBT 22966-2008牛奶和奶粉中1 6种磺胺类药物残留量的测定 液相色谱一串联质谱法Determination of sixteen sulfonamide residues in milk and milk powderLCMSMS method2008-12-31发布 2009050 1实施牛瞀粥紫瓣警矬瞥星发布中国国家标准化管理委员会促19刖 昌GBT 22966-2008本标准的附录A、附录B为资料性附录。本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局、中华人民共和国河北出入
2、境检验检疫局。本标准主要起草人：吕红英、段文仲、陈瑞春、郭春海、艾连峰、贾海涛、窦彩云、马育松、庞国芳。1范围牛奶和奶粉中16种磺胺类药物残留量的测定液相色谱一串联质谱法GBT 22966-2008本标准规定了牛奶和奶粉中16种磺胺类药物(见表2)残留量液相色谱一质谱质谱测定方法。本标准适用于牛奶和奶粉中16种磺胺类药物残留量的测定。本标准的方法检出限：牛奶中磺胺醋酰、磺胺甲基嘧啶、磺胺吡啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺氯哒囔、磺胺甲基异嚼唑、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺一6一甲氧嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺喹曝琳、磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺甲噻二唑、甲氧苄氨嘧啶和磺胺二甲异嚼唑等16种磺胺类药物残
3、留量的方法检出限均为10 Pgkg；奶粉中磺胺醋酰、磺胺甲基嘧啶、磺胺吡啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲基异嘿唑、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺一6一甲氧嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺喹嘿啉、磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺甲噻二唑、甲氧苄氨嘧啶和磺胺二甲异唔唑等16种磺胺类药物残留量的方法检出限均为40 Pgkg。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 637
4、91测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分：总则与定义(GBT 63791-2004，IS0 57251：1994，IDT)GBT 63792测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第z部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GBT 637922004，IsO 5725 2：1994，IDT)GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法(GBT 6682 2008，ISO 3696：1987，MOD)3原理用高氯酸溶液提取试样中磺胺类药物残留，Oasis HLB固相萃取柱”净化，甲醇洗脱，液相色谱一质谱质谱仪测定，外标法定量。4试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为优级纯，水
5、为GBT 6682规定的一级水。41高氯酸。42甲醇：色谱纯。43乙酸：色谱纯。44高氯酸溶液：pH一2，1 000 mL水中加入1 mL高氯酸，再用水调至pH=2。45 01乙酸溶液：100 mL水中加入01 mL乙酸(43)。46 甲醇一乙酸溶液(1+19)：量取50 mL甲醇(42)与950 mL乙酸溶液(45)混合。47磺胺醋酰、磺胺甲基嘧啶、磺胺吡啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲基异嘿1)Oasis HLB固相萃取柱是Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品
6、。1GBT 22966-2008唑、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺一6一甲氧嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺喹噫啉、磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺甲噻二唑、甲氧苄氨嘧啶和磺胺二甲异嘿唑标准物质：纯度95。48 01 mgmL 16种磺胺类药物标准储备溶液：准确称取适量的每种磺胺标准物质，用甲醇配成01 mgmL的标准储备溶液。该溶液在4保存。49 1 pgmL磺胺类药物混合标准中间溶液：分别吸取1mL标准储备溶液(48)移至100mL容量瓶中，用甲醇(42)定容至刻度。该溶液在4保存。410基质混合标准工作溶液：根据每种磺胺类药物的灵敏度和仪器线性范围用空白样品提取液配成不同浓度(ngmL)的基质混合标准工作溶液。
7、基质混合标准工作溶液在4保存。411 Oasis HLB固相萃取柱或相当者：60 mg，3 mL。使用前在柱上塞上-j,块脱脂棉，再分别用3 mL甲醇和5 mL高氯酸溶液(44)活化；保持柱体湿润。412滤膜：02 ktm。5仪器51液相色谱一串联四极杆质谱仪，配有电喷雾离子源。52分析天平：感量01 mg和001 g。53超声波萃取仪。54涡旋振荡器。55固相萃取装置。56氮气吹干仪。57真空泵。58 pH计：测量精度002 pH单位。59贮液器：通过转接头连接于Oasis HLB固相萃取柱上。510 10 mL具刻度离心管。6试样的制备与保存61试样的制备将牛奶从冰箱中取出，放置至室温，摇
8、匀，备用。62试样保存牛奶置于4冰箱中避光保存，奶粉常温避光保存。7测定步骤71提取711牛奶称取2 g试样，精确到001 g，置于50 mL具塞塑料离心管中，加入25 mL高氯酸溶液(44)，涡旋振荡器振荡提取1 rain，超声波萃取10 rain。712奶粉称取05 g试样，精确到001 g，置于50 mL具塞塑料离心管中，加入25 mL高氯酸溶液(44)，于涡旋振荡器振荡提取1 rain，超声波萃取10 min。72净化将71的溶液全部转移到储液器中，再用5 mL高氯酸溶液(44)洗离心管，洗液合并到贮液器，以约l mLmin的流速全部过HLB固相萃取柱(411)，待样液完全流出后，用5
9、 mL水淋洗柱，抽干，用3 mL甲醇洗脱于10 mL具刻度离心管中，洗脱液于40用氮气吹至约02 mL时停止浓缩，用甲醇一乙酸溶液(46)补至1 mL。旋涡混匀，过02,um滤膜，供液相色谱串联质谱分析。73空白基质溶液的制备取牛奶阴性样品2 g，奶粉阴性样品05 g，按71和72操作。74测定条件741液相色谱参考条件a)色谱柱：C5 pm，150 mmX 21 ram(内径)或相当者；b)色谱柱温度：30；c) 进样量：10 pL；d) 流动相梯度及流速见表1。表1 液相色谱梯度洗脱条件GBT 22966-2008时间rain 流速QzLmin) 0I乙酸水溶液 甲醇0 00 200 75
10、 25500 200 55 45800 200 20 80i000 200 20 801010 200 75 251300 200 7S 25742质谱参考条件a) 离子化模式：电喷雾正离子模式(ESI+)；b)质谱扫描方式：多反应监测(MRM)；c)鞘气压力：104 kPa；d)辅助气压力：138 kPa；e) 正离子模式电喷雾电压(IS)：4 000 V；f)毛细管温度：320；g)源内诱导解离电压：10 v；h)Q1，Q3分辨率：Q1为02，Q3为07；i) 碰撞气：高纯氩气；j)碰撞气压力：02 Pa；k)其他质谱参数及16种磺胺类药物的CAS编号、保留时间见表2。表2 16种磺胺类药
11、物的cAs编号、定性离子对、定量离子对和碰撞能量保留时间 定性离子对 定量离子对 碰撞能量化合物中文名称 化合物英文名称 CAS编号 (m止)(mz) eV2150515591 10磺胺醋酰 sulfacetamide374 144-80-9 25105155912150510798 222911422994 25甲氧苄氨嘧啶trimethoprim 4 66 23256-420 29114229942911426090 212510515596 18磺胺嘧啶sulfadiazine 456 68 35 9 25105155962510510797 252560215599 16磺胺噻唑su“
12、athlaz01e 484 72-14-o 25602155992560210805 22GBT 22966-2008表2(续)保留时间 定性离子对 定量离子对 碰撞能量化合物中文名称化合物英文名称 cAS编号(mz) (m：) eV2500715598 16磺胺吡啶 sulfapyridine 509 144832 250071SS982500718401 1926506115591 18磺胺甲基嘧啶 sulfamerazine 5 61 127797 26506155912650617194 142810615590 17磺胺对甲氧嘧啶 sulfamethoxydiazine 662 65
13、1-069 28106155902810610791 272710215586 12磺胺甲噻二唑 sulamethizDle660 148Z一1 Z71 02155862710210796 2127908185 98 16磺胺二甲嘧啶sulfamethazine 667 57 681 2790818598279 0815599 182810715598 17磺胺甲氧哒嚷sulfamethoxypyridazine 7 26 80-35-3 281 07155982810710798 222540515599 l 6磺胺甲基异嘿唑sulfamethoxazole 749 127695 2540S
14、155992540510791 242810615594 19磺胺6一甲氧嘧啶 sulfamonomethoxine 7 68 1220 83-3 281 06155942810610790 2826806155 92 12磺胺二甲异晦唑 sufisoxazole 793 127695 268061559226806107 94 26285021500 16磺胺氯哒嗪 sulfachloropyridazine 8 03 80 3Z 0 28502156002850210797 253110815596 20磺胺邻二甲氧嘧啶 sulfadimoxine 913 2447 576 3110815
15、5963110810798 3230107115599 17磺胺喹曝啉 sulfaquinoxaline 940 967806 301071559930107110791 20743液相色谱一串联质谱测定7431定性测定每种被测组分选择1个母离子，2个以上子离子，在相同试验条件下，样品中待测物质的保留时间，与混合基质标准校准溶液中对应的保留时间偏差在土25之内；且样品谱图中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的混合基质标准校准溶液谱图中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表3规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。表3 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 以表示相对离子丰度K K
16、50 20K50 10K20 K10允许最大偏差 土20 士25 士30 士507432定量测定在仪器最佳工作条件下，对棍合基质标准校准溶液进样，以峰面积为纵坐标，混合基质校准溶液浓4GBT 22966-2008度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。上述色谱和质谱条件下，标准品多反应监测色谱图参见附录A中的表A1。75平行试验按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。76空白试验除不称取样品外，均按上述步骤进行。77回收率试验吸取适量混合标准工作溶液，用空白基质溶液(73)稀释成所需浓度的标准校准溶液。阴性样品中添加标准溶液
17、，按71和72操作，测定后计算样品添加的回收率。样品添加回收率试验数据参见附录B中的表B1。8结果计算每种磺胺类药物残留量按式(1)计算：x。一羔獬 (1)式中：x。试样中被测组分残留量，单位为微克每千克(pgkg)；c，从标准工作曲线上得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升(ngmL)V样品溶液定容体积，单位为毫升(mI。)；m样品溶液所代表试样的质量，单位为克(g)。计算结果应扣除空白值。9精密度91一般规定本标准的精密度数据是按照GBT 63791和GBT 63792的规定确定的，重复性和再现性的值以95的可信度来计算。92重复性在重复性试验条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超
18、过重复性限r，牛奶和奶粉中16种磺胺类药物的添加浓度范围及重复性方程见表4、表5。表4牛奶中16种磺胺类药物的添加浓度范围及重复性和再现性方程单位为微克每千克化合物名称 添加浓度范围 重复性限r 再现性限R磺胺醋酰 1010o ro124 6mo025 8 lgR-O990 I lgmO753 0甲氧苄氨嘧啶 10100 r一0125 6m 0012 0 lgn=1044 5 lgm一0737 8磺胺嘧啶 10100 r一0053 9 lgm+0076 1 lgR=0923 1 lgm 0696 7磺胺噻唑 10100 r一0088 7m+0091 7 lgR=1009 8 lgm 0738
19、8磺胺吡啶 10100 r一0078 Om一0020 0 R一0114 8m+0110 2磺胺甲基嘧啶 10100 F-0144 1m 0011 1 lgn=1087 3 lgm 0857 9磺胺对甲氧嘧啶 10100 T-=0080 7Im+0031 I R一0 143 2m+0045 0磺胺甲噻二唑 1O100 r一0057 Olin+0092 7 ICR=o879 6 lgm O716 2磺胺二甲嘧啶 1O-10O y-0129 5m0041 9 lgR-1000 5 lgmO730 55GBT 22966-2008表4(续) 单位为微克每千克化合物名称 添加浓度范围 重复性限r 再现性
20、限R磺胺甲氧哒嗪 1010O r=0093 lm+0056 8 lgR=O965 0 Igm一0738 9磺胺甲基异晤唑 10100 r一0191 6m一0124 4 R一0222 30 115 8磺胺一6一甲氧嘧啶 10100 r一0112 0m+0109 1 R一0197 4m+0 010 7磺胺二甲异曙唑 1O10O rO114 0m+0000 9 gR=0936 9 19mO671 3磺胺氯哒嗪 1O100 r一0103 2m+0017 4 lgR=O927 5 Ig0 675 7磺胺邻二甲氧嘧啶 10100 r一0102 4m+0056 8 R一0195 0m+0019 0磺胺喹晤啉
21、 10100 r一0086 8m+0056 2 lgR=0887 6 lgm一0669 2注：m为两次测定结果的算术平均值。表5奶粉中16种磺胺类药物的添加浓度范围及重复性和再现性方程单位为微克每千克化合物名称 添加浓度范围 重复性限r 再现性限R磺胺醋酰 40400 r一0072 4m一0050 6 R一0140 1m一0042 0甲氧苄氨嘧啶 40400 r一0042 0m+0279 7 lgR=1008 0 Igm-0896 5磺胺嘧啶 4 0400 r一0 035 0m+0 197 3 R一0 109 8m+0 387 0磺胺噻唑 4040 0 lgr=0909 3 lgm一0989
22、1 lgR=0985 4 lg0 746 8磺胺吡啶 4040 0 r一0076 5m一0039 1 lgR=0893 8 lg0 708 4磺胺甲基嘧啶 40400 r一0082 0m一0036 6 R一0153 7m一0027 4磺胺对甲氧嘧啶 4 0-400 r一0079 7m+0129 1 R一0109 5m+0551 6磺胺甲噻二唑 40400 r一0 073 3m士0062 5 R一0119 2m+0 268 2磺胺二甲嘧啶 4040 0 r一0080 6m+0246 5 R一0130 20 357 0磺胺甲氧哒嗪 40400 r一0090 3m+0344 4 lgR=0932 5
23、 lg0 688 3磺胺甲基异瑶唑 4O400 r一0085 9m+0111 0 R一0172 3m+0220 9磺胺一6一甲氧嘧啶 40400 r一0 098 7m+0221 2 IgR=0919 8 19M0 609 9磺胺二甲异嚼唑 40400 r一0107 9m+0376 1 lgR=1034 4 lg0 787 9磺胺氯哒嗪 40400 r一0106 6m+0436 1 lgR=0920 1 lg0 603 5磺胺邻二甲氧嘧啶 40400 r一0100 4m+0121 4 lgR=0983 lgm_u0 711 6磺胺喹嚼啉 40400 r一0118 5m-0055 4 R一0139
24、 5m+0，170 6注；m为两次测定结果的算术平均值。如果两次测定的差值超过重复性限r，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。93再现性在再现性试验条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R，牛奶和奶粉中16种磺胺类药物的添加浓度范围及再现性方程见表4、表5。附录A(资料性附录)标准物质多反应监测色谱图16种磺胺标准物质多反应监测色谱图，见图A1。0芝100巷萎50010050O1005。010050保留时间rainGBT 22966-20082 3 4 5 6 7 8 9保留时问mm图A1 16种磺胺类药物标准物质多反应监测色谱图00GBT 22966-20088500
25、50述50剑*靛霉O1006 60 磺胺甲塞二唑6607 497 93保留时间rain鬟划止韶霉803 磺胺氯哒嗪注：图中前面的为定量色谱图，后面的为定性色谱图。图A1(续)保留时问rain0lilm可净。，。一可附录B(资料性附录)回收率16种磺胺类药物添加浓度及其回收率范围的试验数据，见表B1。表B1 16种磺胺类药物添加浓度及其回收率范围的试验数据GBT 22966-2008牛 奶 奶 粉化合物名称添加浓度(gkg) 回收率范围“ 添加浓度(pgkg) 回收率范围1 81，o93o 4 83094 42 9051036 8 9261006磺胺醋酰5 763986 20 78394410
26、85294 5 40 8609701 76 6880 4 7808902 8441008 8 881993甲氧苄氨嘧啶5 83 61003 Z0 83 4101710 80490，4 40 7928931 6 9186O 4 7158902 76497 8 8 814935磺胺嘧啶5 73687q 20 76791 810 781877 40 78897 0l 678790 4 76789 12 782961 8 84 598 7磺胺噻唑5 77 399 0 20 79 397110 79 189 8 40 80 3935l 69292 2 4 7229412 76 8931 8 732926
27、磺胺吡啶5 77 4903 20 76 693110 815932 40 7889431 7259Z6 4 7689012 817991 8 836983磺胺甲基嘧啶5 769939 20 76 9876i0 793909 40 79S8931 810996 4 80 79762 735931 8 785982磺胺对甲氧嘧啶5 739914 20 7】989910 785917 40 78 89081 726916 4 74 19162 767939 8 794942磺胺甲噻二唑5 792967 20 77291810 815922 40 7789089GBT 22966-2008表B1(续)
28、牛 奶 奶 粉化合物名称添加浓度(Pgkg) 回收率范围 添加浓度(pgkg) 回收率范围1 84O1032 4 80O10032 845985 8 840976磺胺二甲嘧啶5 774970 20 78095310 812935 40 7989331 702882 4 7558602 711907 8 761911磺胺甲氧哒嗪5 756931 20 77691210 807899 40 7809081 771979 4 7929712 8291014 8 832913磺胺甲基异嚼唑5 766955 20 77593710 838966 40 7739081 743920 4 7739202 7
29、84998 8 80 7974磺胺6甲氧嘧啶5 731916 20 76295010 81693 8 40 795920l 690870 4 78 89102 765977 8 81 5960磺胺二甲异嚼唑5 71 7908 20 71387510 749889 40 79 39131 726890 4 7578912 781975 8 824983磺胺氯哒嗪5 648783 20 72991510 881999 40 85 09351 664873 4 7648902 755979 8 782955磺胺邻二甲氧嘧啶5 754985 20 78996710 834951 40 8159101 690862 4 7308942 72I935 8 792978磺胺喹嚼啉5 747921 20 74794110 753899 40 78389510
