1、ICS 67050X 04 a雪中华人民共和国国家标准GBT 22996-2008人参中多种人参皂甙含量的测定20081231发布液相色谱一紫外检测法Determination of ginsenosides in ginseng-LCUV method2009-050 1实施车瞀鹊鬻瓣警糌瞥星发布中国国家标准化管理委员会“”刖 舌GBT 22996-2008本标准的附录A、附录B为资料性附录。本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局，中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局。本标准主要起草人：宋文斌、李军、董振霖、孙玉岭、隋凯、
2、李佳昌、于一茫、代英成、李妹、庞国芳。人参中多种人参皂甙含量的测定液相色谱一紫外检测法GBT 22996-20081范围本标准规定了人参中人参皂甙(ginsenosides)Re、Rg。、Rf、Rb。、Rc、Rbz含量的液相色谱一紫外检测方法。本标准适用于生晒人参中人参皂甙Re、Rg。、Rf、Rb。、Rc、Rb：含量的测定。本标准的方法检出限：人参皂甙Re、Rg，、Rb。、Re、Rb。均为50 mgkg，人参皂甙Rf为25 mgkg。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准。然而，鼓
3、励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 63791测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第l部分：总则与定义(GBT 637912004，IS0 5725 1：1994，IDT)GBT 63792测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GBT 63792 2004，ISO 57252：1994，IDT)GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法(GBT 6682 2008，ISO 3696：1987，MOD)3原理采用快速溶剂萃取法(ASE)在高温、高压的条件下，
4、使人参皂甙完全彻底地被萃取到甲醇中，经浓缩、定容，液相色谱测定，外标法定量。4试剂和材料水为GBT 6682规定的一级水。41甲醇：色谱纯。42乙腈：色谱纯。43海砂：化学纯，粒度：065 mmo85 mm。44人参皂甙标准物质：Re、Rg。、Rf、Rb。、Rc、Rbz纯度均大于99。45人参皂甙标准液451六种人参皂甙Re、Rg。、Rf、Rb，、Rc、Rb。标准储备液：10 mgmL。用分析天平准确称取适量上述物质(44)，分别用甲醇(41)配制成10 mgmL的标准储备液。储备液避光在24下保存。452六种人参皂甙混合标准工作液：根据每种人参皂甙的灵敏度和仪器的线性范围，量取适当的六种人参
5、皂甙标准储备液(451)，用甲醇配制成混合标准工作液，避光在2 oC4下保存。注：称取标准物质的质量是按照纯度修正过的质量。5仪器51液相色谱仪：配有紫外检测器。1GBT 22996-200852加速溶剂萃取仪：型号ASE200，配有11 mL萃取池。53电子天平：感量为001 g和0000 1 g。54旋转蒸发仪。55鸡心瓶：150 mL。56容量瓶：10 mL。57微量移液器：10弘L100肛L和1 000 sLy5 000 pL。58样品过滤器：PTFE，045肛m。6试样的制备与保存61试样的制备将人参样品混合均匀。分出05 kg作为试样，用粉碎机粉碎并通过孔径20目筛。混匀密封，并做
6、标记。62试样保存将试样置于4条件下贮存。7分析步骤71提取分别称取人参试样1 g(精确到001 g)和海砂130 g，将试样与海砂充分混匀，装人事先放入纤维素滤膜的加速溶剂萃取仪的11 mL萃取池中，拧紧池盖，进行萃取。加速溶剂萃取条件如下：a)萃取溶剂：甲醇；b)压力：107 MPa；c)温度：140；d)静态萃取时间：5 min；e)静态循环次数：2次；f)冲洗体积：50；g)吹扫时间：100 s。将收集到瓶中的提取液转移到鸡心瓶中，50下真空浓缩至小于10 mL，转移到i0 mL容量瓶中，用甲醇定容，混匀。取部分样液用045 pm滤膜过滤到进样瓶中，待液相色谱测定。72色谱测定721液
7、相色谱测定条件液相色谱测定条件如下：a) 色谱柱：Acclaim 120C18，5 pm，250 mmX 46 ram(内径)或相当者；b)流速：1 mLminc)检测波长：203 rlm；d)柱温：50；e)进样量：10“L；f)流动相及梯度见表1。表1流动相及梯度GBT 22996-2008步骤 运行时间rain 流动相水 流动相乙腈O 000 70 301 550 64 362 1200 20 803 2000 0 1004 2500 70 305 30 00 70 30722液相色谱测定用不同浓度的人参皂甙混合标准液分别进样，以峰面积和标准工作溶液的浓度绘制标准工作曲线，样品溶液中人参
8、皂甙的响应值均在仪器的测定线性范围内。在上述色谱条件下，各种人参皂甙的保留时间见表2。各种人参皂甙的标准物质色谱图参见附录A中的图A1。各种人参皂甙的添加浓度及其平均回收率的结果参见附录B中的表B1。表2各种人参皂甙参考保留时间人参皂甙 保留时间rain 人参皂甙 保留时间rainRe 4632 Rb， 10 310Rgl 4871 Rc 10540Rf 10014 Rbz 1121 573平行试验按照上述步骤，对同一试样进行平行试验测定。74空白试验除不称取试样外，均按上述步骤进行。8结果计算人参中人参皂甙含量按式(1)计算：xc筹揣式中：x试样中被测组分含量，单位为毫克每千克(mgkg)；
9、c从标准曲线上得到被测组分溶液的浓度，单位为微克每毫升(ggmL)v一一样品溶液定容体积，单位为毫升(mL)；m样品溶液所代表试样的质量，单位为克(g)。计算结果应扣除空白值。9精密度91一般规定本标准的精密度数据是按照GBT 63791和GBT 63792的规定确定的，其重复性和再现性的值是以95的可信度来计算。92重复性在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r，人参中人参皂甙添加浓度范围及重复性方程见表3。3GBT 22996-2008表3 人参中人参皂甙的添加浓度范围及重复性和再现性方程单位为微克每千克人参皂甙 添加浓度范围 重复性限r 再现性限RRe 50200
10、 19 r一5773+2 653lg卅 lgR一5639+2661 19 mRgl 50200 lg r-3510+1482 lg研 IgR一3367+1485 IgmRf 25100 19 r-1803+0 623 Ig m lgR一1653+0623 lgmRbl 50200 lg r一2523+0970 lg优 lgR-2388+0977 7 19 mRc 50200 19 r-1248+0318 lg优 IgR一3445+1528 IgmRb2 50200 lg r一7354+3432 lg 7n 19R：721 6+3429 lg研注：m为两次测定结果的算术平均值。如果差值超过重复性
11、限r，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。93再现性在再现性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R，人参中人参皂甙添加浓度范围及再现性方程见表3。4人参皂甙标准物质色谱图，见图A1。附录A(资料性附录)标准物质色谱图GBT 22996-2008Rgl：487lRc!10540Rf：10014Rb2：11215图A1 人参皂甙标准物质色谱图|兰啪mm印黔。0o弛门：；m胁胁GBT 22996-2008附录B(资料性附录)回收率本方法中人参皂甙添加浓度及其平均回收率试验数据，见表R 1。表B1 人参皂甙添加浓度及其平均回收率试验数据人参皂甙 添加浓度(mgkg) 平均回收率50 9I98100 8719Re150 9137200 947850 9422100 8669RgI150 9128200 971225 906950 9I09Rf75 10279100 985250 8569100 9226Rbt150 9395200 999550 9073100 8709Rc150 9417200 996150 8995100 8724Rbz150 9660200 10043
