1、ICS 6714010X 55 雪亘中华人民共和国国家标准GBT 23 1 932008200812-31发布茶叶中茶氨酸的测定高效液相色谱法Determination of theanine in tea-High performance liquid chromatography200906-0 1实施宰瞀鹊紫瓣警襻瞥鐾发布中国国家标准化管理委员会“”。刖 昌GBT 231932008本标准的附录A为资料性附录。本标准由国家食品质量安全监督检验中心提出。本标准由全国茶叶标准化技术委员会归口。本标准起草单位：国家食品质量安全监督检验中心、国家茶叶质量监督检验中心。本标准主要起草人：刘小力、石
2、维妮、周卫龙、金瑛、徐建峰、刘晓毅、李想。茶叶中茶氨酸的测定高效液相色谱法GBT 2319320081范围本标准规定了用高效液相色谱法测定茶叶中茶氨酸含量的方法。本标准适用于茶叶中茶氨酸的测定。本标准检出限为50 mgkg。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 6682 2008分析实验室用水规格和试验方法(ISO 3696：1987，MOD)GBT 830
3、2茶取样GBT 8303 2002茶磨碎试样的制备及其干物质含量测定(eqv ISO 1572：1980)3原理茶叶样品中茶氨酸经水加热提取、净化脱色、衍生化处理后，采用高效液相色谱仪进行测定，与标准系列比较定量。4试剂除非另有说明，在分析中所使用试剂均为分析纯，用水为GBT 6682 2008规定的三级水。41茶氨酸标准品(L-theanine)：纯度99。42邻苯二甲醛(OPA)。43乙硫醇。44硼酸。45氢氧化钠。46乙腈：色谱级。47甲醇：色谱级。48 045“m无机滤膜。49 C。固相萃取柱。410乙酸铵溶液(20 mmolL)：称取154 g乙酸铵，用水溶解定容至1 000 mL。
4、411 硼酸钠缓冲液(04 molL)：称取248 g硼酸和141 g氢氧化钠，用水溶解定容至100 mL。412衍生试剂：称取01 g OPA用10 mL甲醇溶解，加01 mL乙硫醇，用04 molL硼酸钠缓冲液定容至100mL。413茶氨酸标准储备液：称取005 g茶氨酸(精确到0000 1 g)，用水溶解后移人50 mL容量瓶中，稀释至刻度，混匀，此溶液每毫升含1 mg茶氨酸。有效期为一年。414茶氨酸标准使用液：分别准确吸取茶氨酸标准储备液(1 mgmL)00、01、02、05、10、15、20 mL，用水定容至10 mL，得到浓度分别为00、001、002、005、010、015、0
5、20 mgmL的茶氨酸1GBT 23 1932008标准使用液。有效期为一年。5仪器51 高效液相色谱仪(配有紫外检测器)。52柱前衍生装置。53离心机。54振摇恒温水浴锅。55分析天平：感量0000 1 g。6测定步骤61样品处理611按照GBT 8303-2002进行样品制备，按照GBT 8302进行取样。612茶叶样品经磨碎混匀后，准确称取05 g(精确到0000 1 g)，加水100 mL，在80振摇恒温水浴锅中浸提45 rain，冷却后将浸提液离心、过滤，上清液混匀待用。613将C。固相萃取柱经5 mL甲醇活化，用5 mL水平衡后，将试液过c，s固相萃取柱进行净化，再经045 pm的
6、微孔滤膜过滤到棕色自动进样瓶中，待衍生用。614衍生化(选一)6141样品自动柱前衍生程序(参考)a)抽取样品提取液50 pL；b)冲洗进样针端口50 S；c)抽取衍生液50 pL；d)冲洗进样针端口50 S；e)混合30次(混合时间为2 min左右)；f)进样(进样量为10 pL)。6142样品手动柱前衍生准确吸取茶氨酸标准使用液(或样品试液)05 mL于棕色自动进样瓶中混匀，临进样前加入05 mL OPA衍生试剂，反应2 min后，立即取10 pL进样。62测定621色谱条件色谱柱：C。8色谱柱，5 pm，46 minx 250 ram；或相当者。流动相：A：20 mmolL乙酸铵溶液；B
7、：20 mmolL乙酸铵溶液：甲醇：乙腈一1：2：2(体积比)；VA：VB一1：1。流速：10 mLmin。柱温：40。进样量：10 pL。检测波长：338 nm。622标准工作曲线6221按6141和6品色谱图参见图A1。6222按6142和6623试样测定21进行色谱分析，以峰面积一浓度作图，绘制标准曲线和回归方程。标准样21进行色谱分析，以峰面积一浓度作图，绘制标准曲线和回归方程。取已制备好的试样按色谱条件(621)进行测定，记录色谱峰的保留时间和峰面积，试样与标准溶2GBT 231932008液的衍生化处理至进样的时间应保持一致。由色谱峰的峰面积可从标准曲线上求出相应的茶氨酸的浓度。样品溶液中被测物的响应值均应在仪器测定的线性范围之内。7分析结果的计算茶叶中茶氨酸含量按式(1)进行计算： x一丛79t辫(1)X 1 UUU式中：x样品中茶氨酸的含量，单位为克每千克(gkg)；c样品浓度，单位为毫克每毫升(mgmL)；v最终定容后样品的体积，单位为毫升(mL)；m样品的质量，单位为克(g)。计算结果保留小数点后两位有效数字。8精密度在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10。GBT 23193-2008附录A(资料性附录)茶氢酸标准样品液相色谱图图A1 茶氨酸标准样品液相色谱图
