1、GB ICS 65.150 B 52 中华人民共和国国家标准GB/T 27520-2011 鱼电方东纹日立曰Obscure puffer 2012-03-01实施发布中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会2011-11-21发布中华人民共和国国家标准暗纹东方盹GB/ T 27520一20114峙中国标准出版社出版发行北京市朝阳区和平里西街甲2号(100013)北京市西城区三里河北街16号(100045)网址总编室:(010)64275323发行中心:(010)51780235读者服务部:(010)68523946中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销. 开本88
2、0X1230 1/ 16 印张0.75字数17千字2012年1月第一版2012年1月第一次印刷4峰书号:155066 1-44058 定价18.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68510107GB/T 27520-2011 目。昌本标准按照GB/T1. 1 2009给出的规则起草。本标准由农业部提出。本标准由全国水产标准化技术委员会淡水养殖分技术委员会(SAC/TC156 / SC 1)归口。本标准起草单位:江苏中洋集团股份有限公司、上海海洋大学。本标准主要起草人:钱晓明、李家乐、赵金良、秦桂祥、卢玉平、郭正龙。I GB/T 27520-2011 暗纹东
3、方钝1 范围本标准给出了暗纹东方鲍(Takifugufasciatus )的主要形态结构特征、生长与繁殖、生化遗传特性和检测方法。本标准适用于暗纹东方剑的种质检测与鉴定。2 规范性引用文件3 名称与3: 1 学名4. 1 外形特征4. 1. 1 形态体呈亚圆筒形，前端钝圆，向后渐狭小，尾柄略为侧扁。胸鳝宽短，无腹鳝，背鳝后位，与臀鳝相对，同形，尾鳝后缘稍圆形。口小，端位。体棕褐色，体侧下方具淡黄色带，腹面白色。体色和条纹随体长不同而有变异。背部具不明显暗褐色横纹4条6条，横纹之间具白色狭纹3条5条。胸鳝后上方体侧处具l圆形黑色大斑，边缘白色。背鳝基部具l长圆形黑色大斑。胸鳝基底外侧和里侧常各具
4、1黑斑。胸鳝、背鳝、臀鳝黄棕色，尾鳝后端灰褐色。头部及体背、腹面均被小刺，背剌区与腹刺区在眼后部相连。吻侧、鲍孔后部体侧及尾柄光滑无刺。暗纹东方蝇的外形见图1。GB/T 27520一20114.2 可数性状4.2.1 背鳝鳝式:D.1518。4.2.2 臀鳝鳝式:A.1316。4.2.3 胸鳝鳝式:P.1618。4.3 可量性状图1暗纹东方盹外形暗纹东方倒可量性状比例值见表1。表1暗纹东方盹可量性状比例值体长/体高体长/头长头长/吻长头长/眼径3. 53. 7 3. 23. 8 2. 93. 1 6. 77. 8 4.4 内部特征4.4.1齿顿与齿愈合，上、下各1对板状齿。4.4.2 脊椎骨脊
5、椎骨数目为:21块24块。5 生长与繁殖5. 1 生长体长与体重关系参见附录A。5.2 繁殖5.2.1 性成熟年龄雌鱼性成熟年龄3龄4龄，雄鱼性成熟年龄2龄3龄。2 头长/眼间距尾柄长/尾柄高1.52.0 1.51.7 GB/T 27520一20115. 2.2 产卵特点暗纹东方童电为一次产卵型鱼类。绝对怀卵量1.0X105粒5.0XI05粒。长江中下游地区产卵期在4月上旬至6月下旬，5月为盛期。5.2.3 卵子特征粘性卵，淡黄色，半透明，圆球形，卵径O.9 mm1.1 mm，卵膜厚，有弹性，具油球，附着在基质上。6 遗传学特性6. 1 细胞遗传学特性体细胞染色体数为:2n=44。核型公式:1
6、0m十6sm+8 st+20 t。染色体组型见图2。揭.饥. Il 霄I .J A . . 6 I A ，、民 ，、，ft ,. 。ft 11、。. . . . , 占旦旦图2暗纹东方蝇染色体组型6.2 生化遗传学特性肌肉组织乳酸脱氢酶(LDH)同工酶电泳图谱见图3。LDH LDH + 图3暗纹东方蝇肌肉乳酸脱氢酶(LDH)同工酶电泳图i普及扫描图3 GB/T 27520-2011 7 检测方法7. 1 抽样方法按GB/T18654. 2的规定执行。7.2 年龄的鉴定采用脊椎骨年龄鉴定法和鲤盖骨年龄鉴定法。7.2.1 脊椎骨年龄鉴定法7.2. 1. 1 取材a) b) d) e) 7.2.2.
7、1 a) b) d) 7.3 主要形态结构特征测定按GB/T18654.3的规定执行。7.4 细胞遗传学特性的检测按GB/T18654. 12的规定执行。7.5 生化遗传学特性的检测7.5.1 样晶的采集与制备取活体暗纹东方童电背部肌肉1g，用0.7%生理盐水清洗，加入3%的辅酶1(NAD)溶液3mL，置4 GB/T 27520-20门匀浆器中匀浆，将匀浆液于4.C、12000 r/min离心30min，取上清液，重复以上离心过程至上清液澄清。7.5.2 聚丙烯酷腰凝胶制备将?昆匀的4%聚丙烯眈胶凝胶配方溶液，立即灌注到凝胶模具中，聚合反应结束后，取出凝胶，放在保湿盒内备用。4%聚丙烯酌胶凝胶
8、配方溶液及其制备见附录B中的B.1。7.5.3 电派分离电极缓冲液为TC电极缓冲液，配制方法见附录B中的B.2。预电泳:将预先制备的聚丙烯酷前电泳:预电泳结束后，电泳10min。7.5.4 染色按GB5 GB/T 27520-2011 附录A(资料性附录)养殖暗纹东方蝇体长与体重关系体长与体重关系见式(A.l): W =0. 043 6L 2.951 6 (R2 =0.9456) ( A.l ) 式中:W一一鱼体体重，单位为克(g); L一一鱼体体长，单位为厘米(cm)。6 GB/T 27520-2011 附录B(规范性附录)乳酸脱氢酶(LDH)同工酶电泳分析溶液制备B.1 聚丙烯酷肢凝胶B.
9、 1. 1 各种凝胶溶液配方各种凝胶榕液配方见表B.l。表B.1各种;疑胶溶液配方溶液名称配制方法TC制胶缓冲液二瓷甲基氨基甲烧(Tris)3.028 5 g，用拧棱酸(ci tric acid)调至|pH 8.0，蒸馆水定容至1L Arc. Bis液丙烯酷胶(Arc)98g ,N ，N亚甲基双丙烯献胶(Bis)2g，用蒸馆水溶解并定容到500mL 25 % TEMED 四甲基乙二胶(TEMED)25mL，加入75mL蒸馆水10% APS 过硫酸胶(APS)O.lg，溶解于1mL蒸馆水中B. 1. 2 4%聚丙烯酷肢凝胶配方4%聚丙烯酷胶凝胶配方见表B.2。溶液名称TC制胶缓冲液Arc. Bi
10、s液25 % TEMED 10% APS 蒸馆水B. 2 电极缓冲在电极缓冲液配方见表B.3。溶液名称TC电极缓冲液表B.24%聚丙烯酷肢凝胶配方溶液量mL 14. 7 13.2 0.3 O. 6 37.5 表B.3电极缓冲液配方配制方法二楚甲基氨基甲炕(Tris)48.65 g，用拧橡酸(citric acid)调pH至8.0，蒸馆水稀释至10L -FON|ONRNHS GB/T 27520- 2011 乳酸脱氢酶(LDH)同工酶染色液B.3 各种溶液配方B. 3.1 各种溶液配方见表B.4。各种溶液配方溶液名称配制方法1. 5 mol/L Tris-HCl染色缓冲液(pH=9.5)三努甲基
11、氨基甲烧(Tris)181.71 g，用盐酸(HCl)调至pH9.5，蒸馈水定容至1L 10%氯化硝基囚氮I哇蓝(NBT)氯化硝基囚氮I些蓝(NBT)250mg，加入250mL蒸馆7.1 mol/L乳酸纳乳酸(Lacticacid)56. 3 mL，用氢氧化纳(NaOH)调至pH7.0，蒸馆水定容到500mL 表B.4乳酸脱氢酶(LDH)同工酶染色液配方B. 3.2 乳酸脱氢酶(LDH)同工酶染色液制备见表B.5。乳酸脱氢酶(LDH)同工酶的染色液配方溶液名称溶液量1. 5 moL/ L Tris-HC!染色缓冲液(pH=9.5)15 mL 10%氯化硝基四氮i哇蓝(NBT)30 mL 1 mol/L乳酸纳10 mL 蒸i留7.)(H2 0) 95 mL 辅酶1(NAD) 30 mg 吩嗦甲自旨硫酸盐(PMS)10.5 mg 表B.5侵权必究版权专有奇峰书号:155066 1-44058 定价:18.00元GB/ T 27520-2011
