GB T 27535-2011 猪流感HI抗体检测方法.pdf
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1、ICS 11. 220 B 41 毒国中华人民ft -、和国国家标准GB/T 27535-20门猪流感HI抗体检测方法Detection method of hemagglutination inhibition antibody against swine influenza 2011-11-21发布2012-03-01实施数码防伪中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会发布中华人民共和国国家标准猪流感HI抗体检测方法GB/T 27535-2011 争6中国标准出版社出版发行北京市朝阳区和平里西街甲2号(100013)北京市西城区三里河北街16号(100045)网址总编
2、室:(010)64275323发行中心:(010)51780235读者服务部:(010)68523946中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销* 开本880X 1230 1/16 印张0.5字数9千字2012年1月第一版2012年1月第一次印刷* 书号:155066 1-44052定价14.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68510107目UJ:I 本标准按照GB/T1. 12009给出的规则起草。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国动物防疫标准化技术委员会CSAC/TC181)归口。本标准起草单位:中国农业科学院哈尔滨兽医研究所。本标
3、准主要起草人:乔传玲、杨焕良、陈艳、辛晓光、陈化兰。GB/T 27535-2011 I 猪流感HI抗体检测方法1 范围本标准规定了猪流感病毒血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验的技术要求。本标准适用于猪流感血清HI抗体的检测。2 仪器水浴箱、4.C冰箱等。3 试验材料单道及多道微量移液器、吸头。4 试剂4.1 0.01 mol/L pH7. 2 PBS(参见附录A中A.口。4.2膜酶榕液(参见附录八中A.2)。4.3 0.01 mol/L KI04溶液(参见附录A中A.3)。4.4 J%丙三醇盐水(参见附录A中A.4)。4.5 阿氏CAlsevers)液(参见附录A中A.5)。4.6 0.5%鸡
4、红细胞悬液参见附录A中A.6)。4.7 HI试验抗原和阴、阳性血清(参见附录A中A.7)。5 血凝(HA)试验5. 1 用多道微量移液器在微量反应板的112孔均加入0.05mL PBS.换吸头。5.2 吸取0.05mL抗原,加入第1孔,反复抽打35次混匀。G/T 27535-2011 5.3 从第1孔吸取0.05mL抗原加入第2孔,海匀后吸取0.05mL加入第3孔,如此进行对倍稀释至第11孔,从第11孔吸取0.025mL弃之,换吸头。第12孔作为红细胞对照。5.4 每孔均加入0.05mL o. 5%(体积分数)鸡红细胞悬液(将鸡红细胞悬液充分摇匀后加入)。5.5 轻轻混匀,室温(20.C25
5、.C)下静置20min后观察结果(如果环境温度太高,可置4.C环境下)。对照孔红细胞显著呈钮扣状时判定结果。5.6 结果判定:将反应板倾斜450,观察红细胞若没有呈泪滴状流淌,则判为HA阳性;完全血凝(不流淌)的病毒最高稀释倍数代表1个血凝单位(HAU)。6 血凝抑制(HI)试验6. 1 操作步骤6. 1. 1 血清样品的处理:待检血清样品需经膜酶-加热-高腆酸盐方法处理,以去除血清中非特异性GB/T 27535-2011 凝集抑制因子。其步骤为:先加0.15mL膜酶溶液于0.3mL血清中,在56.C水浴灭活30min后冷却至室温;:1100.9 mL高腆酸饵,混合,室温孵育15min;加0.
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