1、ICS 65.020.01 B 16 GB 中华人民共和国国家标准GB/T 28079-2011 水稻稻粒黑粉病菌检疫鉴定方法Detection and identification of Tilletia horrida Tak. 2011-12-30发布2012-06-01实施数码防伪J中华人民共和国国家质量监督检验检茂总局中国国家标准化管理委员会发布GB/T 28079-2011 前言本标准按照GB/T1. 1-2009给出的规则起草。本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。本标准起草单位:中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国天津出人境检验检疫局。本标准主
2、要起草人z吴品珊、罗家凤、杜洪忠、严进。I G/T 28079-2011 水稻稻粒黑粉病菌检疫鉴定方法1 范围本标准规定了水稻稻粒黑粉病菌形态学鉴定的方法。本标准适用于水稻Oryzasativa、大米、稻壳中水稻稻粒黑粉病菌的检疫和鉴定。2 水稻稻粒黑粉病菌基本信息中文名z水稻稻粒黑粒病菌学名:Tilletia horrida Tak.。异名:Tilletia barclayana CBref.) Sacc. &. P. Syd. ; Neovossia horrida CTakah.) Padwick &. A. Khan; Neovossia barclayana Bref.。病害英文名:
3、black smut of rice , rice kemel smut。属真菌界Fungi，担子菌门Basidiomycota，黑粉菌纲Ustilaginomycetes，外担菌亚纲Exobasidiomycetidae，腥黑粉菌目Tilletiales，腥黑粉菌科Tilletiaceae，腥黑粉菌属Tilletia。病菌的形态特征与我国进境植物检疫性有害生物小麦印度腥黑穗病菌Tilletiaindica以及黑麦草腥黑穗病菌Tilletiawalkeri近似。水稻稻粒黑粉病菌的其他信息参见附录A。3 方法原理根据稻粒黑粉病菌抱子的形态特征和对寄生造成的症状特征为判断稻粒黑粉病菌的依据。4 仪
4、器4. 1 生物显微镜。4.2 体视显微镜。4.3 往复式振荡器。4.4 低速离心机。5 试剂5. 1 吐温-20CTween-20)。5.2 席尔氏浮载剂(参见附录B)。6 检测6. 1 肉眼观察将水稻稻粒、大米或夹杂在其他货物中的水稻稻粒置于灭菌的白色瓷盘中，根据下列特征检查菌瘦GB/T 28079-2011 和病粒z病粒外表污绿色或污黄色，有时似健粒，饱满或略稚，松软，隐约可见内部的黑色物，破裂后即可散出F有时病粒开裂，散出黑粉;有的病粒呈暗绿色或焦黄色;也有的病粒局部隐暗，米粒部分破坏，胚完好。对疑似病粒，挑取黑粉制片。6.2 洗涤检验称取50g样品，倒入250mL灭菌的三角瓶内，加灭
5、菌水100mL、吐温-201滴2滴，铝锚纸封口，将三角瓶在振荡器上振荡洗涤5mino 将洗涤悬浮液注人10mL20 mL灭菌的刻度离心管内，1000 r/min离心3min，倒掉上清液，再加剩余洗涤悬浮液，重复离心，直至所有洗涤悬浮液离心完毕，留沉淀物。在沉淀物中加人席尔氏浮载剂，视沉淀物的量，定容至1mL3 mL，吸取5L20L沉淀物悬浮液制片。7 鉴定在油镜(100X)下随机观察测量30个成熟的黑粉菌冬抱子，记录冬抱子大小、表面突起形状、突起高度。同样条件下观察不孕细胞形态特征，测量相关特征数值。8 稻粒黑粉病菌形态特征8. 1 各子包子冬于包子球形或近球形，浅褐色至深褐色，直径17m36
6、m，平均24m28m。冬抱子侧面现表面有疵突，顶弯曲、尖锐，成熟的抱子顶端平截或钝，被透明的胶质喃包围，高1.5m4.0m;正面观疵突均匀分布，排列紧密，呈多角型。8.2 不孕细胞不孕细胞球形，近球形，透明，抱壁光滑，大小(22m36m)X (14m21m)，壁厚1.5m5.0mo 8.3 水稻稻粒黑粉病菌与近似种的比较见附录C和参见附录D。9 结果判定如样本的形态特征与第8章描述吻合，可判定为水稻稻粒黑粉病菌Tilletiahorrida Tak.。否则，不视为水稻稻粒黑粉病菌。10 样晶保存检疫鉴定后保存样品，以备复验、谈判和仲裁。由鉴定人标识确认、样品管理员登记，置于干燥、防虫、防鼠处保
7、存，保存期为一年，有特殊需求保存期可造当延长。保存期满，需经灭菌后方可处理。2 A.1 寄主范围附录A(资料性附录)水稻稻粒黑盼病菌其他信息GB/T 28079-2011 主要寄主水稻(Oryzasativa)，次要寄主有臂形草属(BrachiariaGriseb. )、马唐属(DigitariaHal ler)、泰属(PanicumL. )和狼尾草(Pennisetumglaucum)。A.2 分布欧洲z希腊，意大利，俄罗斯。亚洲z孟加拉，柬埔寨，中国(安徽、甘肃、广东、广西、贵州、河北河南、湖北、湖南、江苏、江西、吉林、辽宁、四川、台湾、云南、浙江)，印度，印度尼西亚，日本，朝鲜，韩国，马
8、来西亚，缅甸，尼泊尔，巴基斯坦，菲律宾，塔吉克斯坦，泰国，乌兹别克斯坦，越南。非洲:塞拉利昂。中美洲加勒比海:洪都拉斯，古巴，尼加拉瓜，巴拿马，特立尼达和多巳哥。北美洲z墨西哥，美国。南美洲z阿根廷，巴西，圭亚那，苏里南，委内瑞拉。大洋洲z澳大利亚，斐济，所罗门群岛。3 GB/T 28079-2011 附录B(资料性附录席尔氏浮载剂的配制方法B.1 麦克凡氏缓冲液B. 1. 1 配制0.1mol/L的拧攘酸溶液称取19.21g元水拧朦酸溶于1000mL蒸馆水中。B. 1.2 配制0.2moI/L的磷酸氢二铀溶液称取28.40g元水磷酸氢二铀溶于1000 mL蒸馆水中。B. 1.3 配制麦克凡氏
9、缓冲渡取0.1mol/L的拧朦酸溶液5.5mL和0.2mol/L的磷酸氢二铀溶液194.5mL混合，liP为pH8.0的麦克凡氏缓冲液。B.2 席尔氏浮载剂的配制称取6g无水乙酸饵溶于300mL麦克凡氏缓冲液中，加甘油120mL和乙醇180mL混匀，即为席尔氏浮载剂。4 GB/T 28079-2011 附录C(规范性附录水稻稻粒黑粉病菌与近似种的各抱子形态图图C.1水稻稻粒黑粉病菌Tilletiahorrida的各袍子光学显微镜形态固(引自LoriM. C.等)图C.2小麦印度腥黑穗病菌Tilletiaindica的各抱子光学显微镜形态图(引自LoriM. C.等)5 GB/T 28079-2
10、0门附录D(资料性附录)水稻稻粒黑粉病菌与近似种的比较表D.l水稻稻粒黑粉病菌与近似种的比较特征水稻稻粒黑粉病菌小麦印度腥黑穗病菌黑麦草腥黑穗病菌Tilletia horida Tilletia indica Tilletia walkeri 范围17-36 22-47 23-45 冬抱子直径/m平均24-28 35-41 30-31 顶弯曲、尖锐，成熟顶部偶尔弯曲，尖或顶部偶尔弯曲，锥冬抱子脊或刺抱子顶端平截或钝，钝，高1.5m-5.0m状、平截或钝，高高1.5m-4m3m-6m 冬抱子形状球形或近球形球形或近球形球形冬抱子颜色浅褐色至深褐色红褐色、黑褐色至黑色红褐色至黑褐色寄主水稻小麦黑麦
11、草6 FFON-mhoNH阁。华人民共和国家标准水稻稻粒黑粉病菌检疫鉴定方法GB/T 28079-2011 国由l晤中国标准出版社出版发行北京市朝阳区和平里西街甲2号(100013)北京市西城区三里河北街16号(100045)网址总编室:(010)64275323发行中心:(010)51780235读者服务部:(010)68523946中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销唾印张0.75字数13千字2012年4月第一次印刷开本880X12301/16 2012年4月第一版* 16.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68510107定价书号:155066. 1-44635 GB/T 28079-2011 打印忖期:2012年5月4HF002A
