1、ICS 65.020.01 B 16 中华人民11: _，、远在3和国国家标准GB/T 28092-20门落叶松柏梢病菌检疫鉴定方法Detection and identification of Botryosphaeria laricina (K. Sawada) Y. Z. Shong 2011-12-30发布数码防ij中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会2012-06-01实施发布GB/T 28092-2011 前言本标准按照GB/T1. 1-2009给出的规则起草。本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。本标准起草单位:中华人民共
2、和国江苏出人境检验检疫局、中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局。本标准主要起草人z吴翠萍、李彬、粟寒、高渊、陆军、吴晶、刘伟、高振兴、安榆林。I GB/T 28092-2011 落叶松柏梢病菌检疫鉴定方法1 范围本标准规定了落叶松枯梢病菌Botryoshaerialaricina CK. Sawada) Y. Z. Shong 1987的检测和鉴定方法。本标准适用于对落叶松苗木、接穗以及带小枝梢的原木等样品携带落叶松枯梢病菌的检测和鉴定。2 落叶松枯梢病菌基本信息中文名:落叶松枯梢病菌。学名:Botryosphaeria laricina CK. Sawada) Y. Z. Shong 1987
3、。异名:Physalosora laricina K. Sawada, Guignardia laricina CK. Sawada) W. Yamamoto &. K. Ito 病害英文名:shootblight of larch, twig dieback of larcho 采用Ainsworth(1973)真菌分类系统，病原菌为子囊菌亚门Ascomycotina，腔菌纲Loculoascomycetes，格抱腔菌目Pleosporales，葡萄座腔菌科Botryosphaeriaceae，葡萄座腔菌属Botryosphaeria。元性阶段为半知菌亚门Deuteromycotina，腔抱
4、纲Coelomycetes，球壳抱目Sphaeropsidales，球壳抱科Sphaeropsidaceae，大茎点霉属Macrohomao落叶松枯梢病菌的其他信息参见附录A。3 方法原理根据病原菌危害的症状特点(参见附录B)采集样品进行检测，观察病原菌产生的子实体的显微形态特征，并结合病原菌的地理分布和寄主范围等有关信息进行结果判断。4 仪器和用具4. 1 仪器体视显微镜、普通光学显微镜(具显微拍摄和测量功能)、光照培养箱、高压灭面器、干热灭国器、冰箱等。4.2 用具手持放大镜、试剂瓶、纱布、脱脂棉、慑子、剪刀、培养皿、修枝剪、吸管、酒精灯、打孔器(直径5mm)、瓷盘、解剖刀、酒精灯、解剖针
5、、载玻片、盖玻片、微量移液器、标本盒、海绵、胶带、标签等。5 试剂石蜡，70%、95%酒精，二氧化硅干燥剂。G/T 28092-2011 6 检测6. 1 样晶采集根据下列症状等进行样品采集z苗木、接穗上的新梢枯死，并且枯死的梢端呈弯曲状;在病组织上有固着的白色滴状物树脂块;干枯的枝干部为紫褐色或灰褐色;在枯死的枝干、松针上有突出的枯梢病原菌子实体。原木上如果带有的小枝梢，则应仔细观察小枝梢上有元子实体，若元，则可排除怀疑带有枯梢病原菌。6.2 样晶制备6.2. 1 子实体的制片用解剖针挑取样品上的子实体少许，置于载玻片上加盖玻片压碎或由发病部位直接切片制成水玻片，在解剖镜或显微镜下观察子实体
6、的形态并确认是否成熟。如果成熟，则观察典型形态特征并测量大小;如果不成熟则需进一步培养。6.2.2 不成熟于实体的培养对子实体不成熟的部位，先用无菌水浸泡2d3 d，然后浸泡在35.C和10.C的无菌水中进行交替变温处理，每次5min，重复1次，再浸在元菌水中30min，最后取出置室温条件下保湿培养中7d12 d , 诱导产生成熟子实体并制片镜检。7 鉴定7.1 有性阶段子实体形态特征子囊座为壳状、瓶状或架形，黑褐色，单生、2个5个群生或丛生在病枝表皮下，成熟后仅孔口外函，大小为(170m500m)X (130m300m)。子提棍棒状，双壁，元色，顶端困，下有短柄，平行排列于子囊腔基部，大小为
7、(115m149m)X ( 20m45m)。假侧丝很多，线形，无色，半永久存在，直径3m。子囊抱子8个，双行排列，椭圆形至纺锤形，单胞，无色，大小为(22.5m40m)X(6.3m15. 5m)。参见附录C。7.2 无性阶段子实体形态特征分生抱子器群生于顶梢残留的叶背和顶梢小枝周围的表皮下，并使表皮突起，近球形或扁球形，黑色，大小为(120m249m)X (148m213m)。分生抱子梗短，不分枝，圆柱形，(5m7m)X(2.5m3.2m)。分生抱子椭圆形至纺锤形，单胞，无色，大小为(24m30m)X(6m9m)。常见12个油球。参见附录C。性抱子器球形至扁球形，单个或几个丛生于病枝表皮下，大
8、小为(115m214m)X (109m 190m)。性抱子梗细长，元色，2个3个分隔，大小为(12m16m)X(3m5m)。性抱子短杆状或椭圆状，元色，大小为(3m6m)X(1m2m)参见附录C。8 结果判定如有性阶段、元性阶段的形态特征符合第7章鉴定特征的描述，即可判定为落叶松枯梢病菌。2 GB/T 28092-2011 9 标本和样品保存发现落叶松枯梢病菌的样品，需制作成标本在室温条件下进行干燥保存，或将样品置于一20.C冷冻保存，保存至少6个月，以备复检、谈判和仲裁。保存期满后进行灭活处理。3 GB/T 28092-20门附录A资料性附录)落叶松柏梢病菌其他信息A.l 地理分布国外2日本
9、、朝鲜、韩国、俄罗斯(远东)。国内:黑龙江、吉林、辽宁、内蒙古、山东、陕西、甘肃、青海、宁夏。A.2 寄主落叶松属(Larixspp. ) :华北落叶松(L.nnCllsru户户rechtii)、长白落叶松(L.olgensis var. chan g户aiensis)、朝鲜落叶松(L.olgensis var. koreana)、海林落叶松(L.olgensis var. heilingensis)、日本落叶松(L.letoleis)、黄花落叶松(L.olgensis)、欧洲落叶松(L.decidua)、美国西部落叶松(L.occidentalis)、美加落叶松(L.laricina)等。A
10、.3 发病规律该病从幼苗、幼树到成林的当年新梢都能发病，但幼树发病重。7月上旬开始发病显症状，7月中、下旬发病最明显。一般都先从主梢发病，然后由树冠上部向下蔓延，加重病情。病后新梢渐渐褪色，顶部弯曲下垂呈句状，而顶梢与弯曲部分变紫褐色或灰褐色，从弯曲部分逐渐向下脱叶、干枯，茎收缩变细，仅在顶部残留一簇叶子，枯萎呈紫灰色。次年春天，由侧芽生小枝代替原来主梢，连年发病、为害严重的，树冠出现扫帚状丛枝，高度生长停止，形成小老树或全株枯死(为害症状参见附录B)。在枝梢受害部位，多数有松脂溢出，凝成块状。8月末至翌年6月，在枯梢上特别是弯曲部分的枝皮及凹陷处，生长着梭形小黑点，初埋生，至翌年6月突破寄主
11、，形成病原菌子囊座。发病10余天后，在顶梢残留叶上或弯曲部位可见圆形的散生小黑点，形成病原菌的分子抱子器。有时在病枝上可见圆形黑色突起，即性抱子器。4 附录B(资料性附录)落叶松枯梢病症状GB/T 28092-2011 图B.18年生日本落叶松柏梢病症状(图片来源T.Kobayashi,Japan) 5 6 G/T 28092-2011 A一一子褒zB一一侧丝;C一一子囊抱子;D一一分生抱子器;E-一分生抱子。注1:图片仿Kazuolto 注2:图片比例尺为10mA 附录C(资料性附录)落叶松枯梢病原形态特征B 认(f f叭C 二立a 、;匕7阳帽-1 JJ JJ 叫E 图C.1落叶松枯梢病的
12、病原特征=ON-NgNH闰。华人民共和国家标准落叶松桔梢病菌检疫鉴定方法GB/T 28092-2011 国中* 中国标准出版社出版发行北京市朝阳区和平里西街甲2号(100013)北京市西城区三里河北街16号。0004日网址总编室:(010)64275323发行中心:(010)51780235读者服务部:(010)68523946中国标准出版社荣呈岛印刷j印刷各地新华书店经销* 印张O.75 字数13千字2012年3月第一次印刷开本880X 1230 1/16 2012年3月第一版* 书号:155066 1-44646定价16.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68510107GB/T 28092-2011 打印日期:2012年4月16R F002A
