1、中华人民共和国国家标准粮、油、菜中西维因残留量的测定方法Method for determination of carbarye(1-naphthyl N-inethyl carbamale) residues in cereals , oils and vegetables 1 主题内容与适应范围本标准规定了粮食、油、油料及蔬菜中西维因残留量的测定方法。本标准适用于粮食、泊、油料及蔬菜中商维因残留量的测定。最低检测l浓度:高效液相色谱法为0.5mg/kg。第一篇高效液梧色谱法(第一法)2 原理G/T 5009.21-1996 代替GB5009.21-85 含有西维困的粮食经提取、弗罗里硅土净
2、化后，浓缩，定容作为测定溶液，取一定量注入高效液相色谱仪，经分离用紫外280nm检测器检测，与标准系列比较定量。3试剂3. 1笨。3. 2 乙腊。3. 3 甲醇。3. 4 氯甲烧。3. 5 元水硫酸纳:120 C干燥4h。3.6 弗罗里硅土:120C干燥4h，加入6%(m/m)蒸馆水，摇匀，放置过夜后使用。3. 7 西维因标准溶液的配制z准确称取西维因标准品(99.3%)，用甲醇溶解并配制成10.0 mg/mL 的标准储备液，贮于冰箱中，使用时用甲醇稀释成10月/mL的标准使用液。4 仪器4. 1 高效液相色谱仪:带紫外检测器。4.2 溶剂过滤器。4.3 超声波仪:用于流动相脱气。4.4 KD
3、浓缩器或旋转式蒸发器。5 分析步骤5. 1 提取称取20.00 g经粉碎过20目筛的粮食试样于250mL具塞锥形瓶中，准确加入50mL苯，浸泡过夜，次日振荡提取1h，提取液过滤。中华人民共和国卫生部1996-06-19批准1996-09-01实施77 GB/T 5009. 211996 5. 2 净化取直径1.5 cm层析柱，先装脱脂棉少许(柱两头装2cm高无水硫酸锅，中间装6g弗罗里硅土), 装好的柱先用20mL二氯甲烧预淋，弃去预淋液，然后将510mL样品提取液倒入层析柱，用70mL -1A甲烧少量多次淋洗，收集全部淋洗液，用KD浓缩器进行浓缩至近干水浴温度30C)，然后用甲醇溶解事是余物
4、，并定容至5mL。定容后用O.5m滤纸借助于注射器过掠，取10L滤液注入高效色谱进行分离、检测。5.3 液相色谱测定参考条件5. 3. 1 色谱柱:不锈钢桂BONAPAKC,8 3.9 mmX 30 cm , 5. 3. 2 检测器z紫外检测器波长280m，灵敏度O.01 O. 020 5. 3. 3 流动相:乙睛-水(55+45)混合溶剂，流速1mL/min , 5. 3. 4 温度2柱温，检测器均为室温。5. 4 测定吸取10fL标准使用液及样品液注入色谱仪，以保留时间定性，用标准曲线法定量。6 计算X1AI X 1 000 , m , X V,/V1 X 1 000 式中X，粮食中西维因
5、的含量，mg/kg; Al 从标准曲线求出样液中西维因的含量，plrl一一样液定容的体积!mL; 1，一注入色谱的体积，mL，叫样品的质量，g，1 其他西维囚的液相色i普图，见下图。78 ) 1 ( 西维因西维因标准色谱图G8/T 5009.21-1996 第二篇比色法8 原理在碱性条件下，西维因水解成1荼盼、二氧化碳和甲胶。在酸性条件下.1茶盼和对硝基苯偶氮氟棚酸盐呈橙黄色，与标准系列比较定量。最低检出量10吨，测定样品相当于2g时，最低检出浓度为5 mg/kg 0 9试J9. 1 二氯甲烧。9.2 丙酬。9.3 乙醇(95%)。9.4 冰乙酸。9. 5 元水硫酸销。9.6 石泊瞪:沸程30
6、60C。9. 7 二甲基亚隅。9.8 氯化锅。9.9 硅藻土。9, 10 一缩二乙二醇溶液:一缩二乙二醇和工氯甲烧等体积混合。9.11 丙翻(10%)。9.12 凝固液g称取0.5g氯化镑，溶于400mL水中，加1mL磷酸(85%)。9. 13 氢氧化御乙醇溶液(56g/L):称取5.6 g氢氧化饵，溶于10mL水中，加95%乙醇稀释至100 mL.临用时配制。9.14 氯化纳溶液(100g/L)。9.15 氢氧化纳溶液(20g/L):称取2g氢氧化锅，加水溶解并稀释至100mL。9. 16 显色剂:称取50mg对硝基苯偶氮氟棚酸盐，溶于50mL冰乙酸乙醇溶液(20%)中，临用时配制，过滤后使
7、用。9. 17 西维因标准溶液g西维团结晶经无水乙醇两次重结晶纯化。熔点142145C。准确称取50.00 mg西维因精制品，加二氯甲烧溶解，移入100mL容量瓶中，加二氯甲烧至刻度，混匀。此溶液每毫升相当于西维因0.50mgo 9.18 西维因标准使用液z吸取西维因标准溶液1.0 mL或2.0mL.置于100mJi.容量瓶中，用二氯甲娩稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5.。阅或10.0问西维因。10仪器10. 1 分光光度计。10.2 抽气泵。10.3 恒温水浴锅。10. 4 电动振荡器。10.5 脂肪提取器。10. 6 离心机11 操作方法11. 1 提取79 GB/T 5009.21-19
8、96 11. 1.1 粮食:样品经脱壳、磨粉，过20目筛并混匀。称取粮食试样10.00日，匠150mL具塞锥形瓶中.加10g无水硫酸纳，混匀，加40mL二氯甲饶，在振荡器振摇O.5 h.浸泡过夜，用滤纸过滤，弃去230L初滤液，量取20.0mL滤液，置于50mL烧杯中，加3滴一缩二乙二醇溶液，放热水浴上挥干，如lf、太干，用吸耳球吹干。11. 1. 2 油及油料211. 1.2.1 比较纯净的油:称取5.00 g j昆匀的样品，用50mL丙嗣分次溶解并洗入100mL分液漏斗中。11. 1. 2. 2 毛泊称取2.005. 00 g混匀的样品，用40mL石油院分次溶解并洗入100mL分液漏斗中。
9、11. 1.2.3 棉籽z样品经脱壳、磨碎、混匀。称取10.00g试料装入滤纸筒中，置于60mL脂肪提取器中，用40mL石油酷提取8h.将提取液移入100mL分液漏斗中。11. 1. 3 蔬菜、水果取可食部分洗净、晾干、切碎、混匀。称取25.OOg试料加20g无水硫酸纳后，在乳钵中用力研碎，至植物组织全部研成泥状，再加10日无水硫酸纳继续研磨至干粉状，移至250mL具塞锥形瓶中，再用约5g无水硫酸销将乳钵研洗干净，一并移入具塞锥形瓶中，用工氯甲烧将乳钵研洗二次.每次50mL，洗净粘在乳钵上的残物，洗液并入具塞锥形瓶中，在振荡器上振摇O.5 h.浸泡过夜，用滤纸过滤，弃去23mL初滤液，吸取50
10、.00mL滤液，置脂肪提取器的接收瓶内，加3滴缩二乙二醇洛液，在水浴上蒸干溶剂至虹吸节内，弃去蒸出的二氯甲饶，直至蒸干，取下接收瓶，用吸耳球吹子残留i在剂。11. 2净f七11. 2. 1 粮食:沿上述含提取物的烧杯壁，加入3mL丙耐，使残渣完全溶解后，加15mL凝固液，放进15 min，并时时摇动。将垂熔漏斗下接抽滤器(或抽滤瓶).先铺一张滤纸，再铺一薄层约1g的硅藻土作为助滤剂，用丙酬(10%)洗涤多次后备用;弃去洗涤液。将样品凝固液倾入准备好的垂熔漏斗中，放宣10 min以上，慢速抽滤于下面的抽滤管内，拙干后，用滴管滴加约2mL丙酣(10%).洗净烧杯内壁，洗液倾入垂融漏斗中，浸泡12m
11、in后，再行抽干，如此重复23次。将滤液移至25mL容量瓶中，用少量内闸(10%)洗涤抽滤管，洗液并入容量瓶中稀释至刻度，混匀。11. 2. 2 油及油料:11.2. 2.1 比较纯净的油z在上述含有油样的丙嗣溶液的分液漏斗中，加10mL水，轻轻摇匀.静青1 h.弃去分出的泊层，将丙酣提取液放入离心管中，以2500r/min离心0.5h.用滴管吸取上层澄清内酬提取液，置于另一分液漏斗中，加30mL二氯甲饶，振摇提取1mn，放置1h.二氯甲炕层经盛有约10 g无水硫酸纳的漏斗滤入脂肪提取器的接收瓶中。在二氯甲烧溶液内加3滴一缩二乙二醇浓浓，在水浴上将二氯甲烧蒸发至虹吸节内，弃去蒸出的二氯甲烧。分
12、液漏斗内的水层用10mL二二氯甲烧振摇洗涤4次，经原无水硫酸纳漏斗滤入接收瓶中，继续蒸发至干，取下接收瓶，用吸耳球吹干残留溶剂。if瓶哇加入3mL丙嗣溶解残渣，以下按11.2. 1自加15mL凝固液起依法操作。11.2.2.2 毛油:在上述含有泊样的石油隧溶液的分液漏斗中，加10mL二甲基亚枫，振摇1min.放民分层后，将二甲基亚枫分入另一分液漏斗中，石油酷层再用10mL二甲基亚枫振摇次，合并二次提取液.JJljl0mL石油酷振摇洗涤二甲基亚飘提取液一次。将工甲基亚矶层移入盛有2日氯化销和150mL 水的分液漏斗中，弃去石油磁层。二甲基亚枫水溶液用二氯甲烧提取四次，每次25mL.合并二氯甲烧提
13、取液，用7.5;5mL氢氧化纳溶液(20g/L)振摇提取二次，以洗去植物中的天然盼类物质，弃去洗涤液。-l在甲烧层再用氯化纳溶液(100g/Ll洗涤二次，每次15mL.最后用15mL水洗涤一次。二氯可1皖层经元水硫酸纳脱水滤入脂肪提取器的接收瓶中，以下按11.2.2.1自在二氯甲烧溶液内加3滴缩二乙二醉溶液起依法操作。11. 2. 2. 3 棉籽:孩11.2.2.2毛泊中的方法净化。11. 2. 3 蔬菜、水果价上述含有提取物的接收瓶瓶壁加入3mL丙酬，并转动以溶解瓶中提取物，加入80 G8/T 5009.21-1996 10 rnL凝固液，再转动接收瓶，使凝固液布满内壁，放置10min，并时
14、时转动。以下按11.2. 1自将垂熔漏斗F接抽滤器(或抽滤瓶)，先铺一张滤纸，再铺一薄层约1g的硅藻土作为助滤剂起依法操作。12 测定吸取5.0mL西维因标准使用液(相当50吨西维因)或.0 mL西维因标准使用液(相当.0月西维因.接近样品量)，置于50mL烧杯中，加3滴一缩二乙二醇溶液，在热水浴上挥干，加3rnL两国同溶解，并加15mL凝固液，混匀，移入25mL容量瓶中，用丙嗣(10%)洗涤烧杯，洗液并入容量瓶中并稀释至刻度，作为比色时的标准对照溶液。吸取上述定容后的试样溶液和标准溶液各5.0mL，分别置于具塞刻度试管中，各加2rnL氢氧化饵-乙醇溶液(56g/Ll，混匀，放置2min后再各
15、加1mL显色剂，混匀。以水调整零点，用1crn比色杯，于波长475nm处测吸光度。同时，另取两个试管，一管加入5mL定容后的标准溶液，另一管加入5mL定容后的样品溶液，用2 mL乙醇代替氢氧化何-乙醇j溶液，按上述方法同样操作，于波长475nm处分别测吸光度，作为试剂空白和样品空白。13 计算X Aq-A, C 1000 =一一一-:o-=x一一一一一一一一-. ( z ) 2 - A , - A5 A m, X 5/25 1 000 式中:几一一样品中西维因的含量，mg/kg，A2 样品管的吸光度的读数pA , 样品空白管的吸光度读数;A , 标准溶液管的吸光度读数:A5一一试剂空白管的吸光度读数;C一标准溶液中西维因含量，g，m2一一样品质量，g。14 允许差粮食取样10g时，相对相差运5%，油取样25g时，相对相差15%，棉籽取样10g时，相对相差10%，水果、蔬菜取样25g时，相对相差5%。附加说明.本标准由卫生部卫生监督司提出。本标准第一法由浙江省粮食科学研究所负责起草$第二法由卫生部食品卫生监督检验所、中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所负责起草。本标准由E生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。81
