1、中华人民共和国国家标准G直/T50号9.221996食品中黄曲霉毒素矶的测定方法代替Gll5009.22 85 Method for determination of afJatoxin B, in foods 1 :主题内容与适用范撞本标准规定了粮食、花生及其制品、辈辈类、豆类、发酵食品及酒类等各种食品中黄曲霉毒素队的测定方法。本标准适用于粮食、花生及其制品、薯类、豆类、发酵食品及酒类等各种食品中黄曲每毒素队的测定。本标准分为两法。在第一法中，薄E盖板上黄闹事草毒素队的最低检出量为0.0004隙，最低检出浓度为5Ig/kg第三法对黄曲霉毒素队的最低检出浓度为0.01g!kg。第-篇第一法2
2、Ji事理佯品中黄曲霉毒草号BI经提取、浓缩、薄层分离后，在波长365nm紫外光下产生蓝紫色荧光，根据其在薄j芸立显示荧光的毅低捡出撞来测定含量。3试M3. 1 之言革取钱。3.2 正己统或石油目击(沸程30-60.C或60-90C)。3.3月1静。3.4苯c3. 5乙H青。3. 6 元水乙重建或乙重建经无水硫酸锅烧水。3. 7 p，j酬。以上试剂在试验时先进行一次试剂空白试验，如不干扰测定即可使用，否则需逐一进行量燕。3.8 硅跤G:薄层包滋用。3.9 二三氟乙酸。3.10 元水硫盖章锁3. 11 量化销。3. 12 苯-乙脯混合液s量取98mL苯，加2mL乙脯，混匀。3. 13 号董事水溶液
3、:55 : 45。3. 14 黄曲草草毒素BI标准溶液。3. 14. 1 仪滤校正=测定重错酸御浴液的摩尔消光系数，以求出使用仪器的校正因素。准确称取25mg 纶干燥的意络酸苦(主主准级), )fl硫酸(0.5+1000)溶解后并准确稀辛辛至200mL，相当于c(几Cr，)=中华人民共和国卫生部19966-19批准1996-09 01实施723 GB/T 5009. 22一19960.0004 mol儿。乎等吸取25mL此稀森液于50mL容量瓶中，加硫酸(0.5十1000)稀释歪费tlJt，相当于O. 000 2 mol!L溶液。再吸取25mL此稀释液于50mL容量瓶中，加硫酸(0.5十100
4、0)稀释至刻度.中日当于O.口001目。l/L溶液。m1 c白石英杯，在最大吸收峰的波长接近350nm处)J吉普在重量号.5+1000)作空白，测得以上三种不同浓度的摩尔溶液的吸光度，并按式(1)计算出以上三种浓度的摩尔消光系数的平均值。=i生C ) 1 ( 式中sEI重错酸饵溶液的摩尔消光系数$A一一吉普4尊重错酸梆溶液的吸光度$c一-重锵酸例溶液的摩尔浓度。再以此平均傻与重铅酸御的摩尔消光系数值3160比较，那求也使用仪器的校正因素。叫-ErJ . ( 2 ) 、式中，/一一使m仪器的校:iE因素$E一测得的重错酸僻摩尔消光系数平均值。若f大于0.95或小子1.05.则使用仪器的校正因素可
5、略而不计.3.14.2 黄毯霉毒素B，标再重溶液的和j备=准确称取1-1.2盟g贫磁霉毒紫B，标准品，先加入2mL乙脯溶解后，再用苯稀释至100mL.避光，置于4C冰箱保存.该标准溶液约为10月/mL。用紫外分光光度计测此标准溶液的最大吸收峰的波长及该波长的吸光度值.3.14.2.1 计算AX M X 1 000 X / xz= . .( 3 ) 戏中:X，一一黄汹霉毒素B，标准军事液的浓度，问!mL;A一一测得的吸光度值，f一一使用仪器的校正因素，M一一黄曲霉毒素队的分子最312;E，一-黄曲霉毒素趴在苯-乙脯混合液中的摩尔消光系数.19800，根据计算，用笨乙黯混合液混到标准溶液浓度始为1
6、0.0f唱/mL.并掰分光光度it核对其浓度。3.14.3 纯度的测定z取5L10问/mL黄曲霉毒素队标准溶液，滴加于涂层厚度0.25mm的硅胶G薄层板上，用甲醇三氯甲烧(4+96)与丙醺，二三氯甲烧(8十92)展开剂展开，在紫外光灯下观察荧光的产生，必须符合以下条件33. 14. 3. 1 在展开后，只有且在一的荧光点，无其他杂质荧光点.3.14.3.2 原点上没有任何残留她荧光物质，3.15 黄翩霉毒素B，标准使用液z准确吸取1mL标准洛液(10g/mL)于10mL容量瓶中，加苯-乙精混合液至J度，1昆匀。此溶液每毫升相当于1.0附黄曲霉毒素息。吸取1.0 mL此稀释液，置于5mL容最瓶中
7、，加苯-乙满混合液事毒瘾至刻度，此溶液练毫升权主驾于号.21g黄草草草草毒素队。再吸取货涵霉毒素队标准溶液加25mL I1民物缓冲液加37L30 H,O,. 100L!孔.37 C. 15 min.然后加2moI/L H,SO,. 401./孔，以终11:.显色反应.酶斩、仪190 nm测出OD值。9. 4汁11V. _ 1 黄曲霉毒素BJ浓度(ng/g)二CX : X D X主叫6) 式中:C一一黄曲霉毒素B，含量，吨，对应标准曲线按数值插入法求得;FJ 样品提取液的体积，mL;儿一一滴)0样液的体积.mL;/) 稀释倍数;m2 样品质量.g0 由于按标准曲线直接求得的黄曲霉毒素BJ浓度(C
8、J)的单位为ng/mL.而测孔中加入的样品提取的体积为0.065mL.所以式(6)中C 0.065 mL X CJ 而VJ2mL. V，O. 065 mL. D2. m24 g 代入式(6)，则2 黄曲霉毒素BJ浓度(ng/g) 0.065 X CJ X汇万65X 2 X CJ (ng/g) ( 7 ) 所以，在对样品提取完全按本方法进行时，从标准曲线直接求得的数值C1，即为所测样品中黄曲每毒素队的浓度(ng/g)。附加说明:本标准由卫生部卫生监督司提出。牛;标准第-法由中国预防医学科学院营养及食品E生研究所、中华人民共和国青岛进出口商品检验问负责起草;第二法由卫生部食品卫生监督检验所、北京市营养源研究所负责起草。木标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。731
