1、亚硝酸盐与硝酸盐的测定格里斯试剂比包法(摘自GB/T5009. 33 1996) (一)亚硝酸盐测定1 原理样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与N-l-荼基乙二胶偶合形成紫红色染料，与标准比较定量。2 试剂实验用水为蒸馆水，试剂不加说明者，均为分析纯试剂。2. 1 氯化锁缓冲液dL容量瓶中加入500mL水，准确加人20.0mL盐酸，振荡混匀，准确加人50mL 氮氧化钱，用水稀释至刻度。必要时用稀盐酸和稀氢氧化镀调试至pH9.6-9. 7。2.2 硫酸镑溶液(0.42mol/L):称取120g硫酸铸(ZnS. 7H2).用水熔解，并稀释至1000mL。2
2、.3 氢氧化纳溶液(20g/U称取20g氢氧化销用水溶解，稀释至1L。2.4 对氨基苯磺酸溶液z称取10g对氨基苯磺酸，溶于700mL水和300mL冰乙酸中，置棕色瓶中混匀，室温保存。2.5 N-1菜基乙二胶溶液(g/L)称取0.lgN-1-茶基乙二胶，加60%乙酸溶解并稀释至100时. 混匀后，置棕色瓶中，在冰箱中保存，一周内稳定。2.6 显色J1iJ:临用前将N-l茶基乙二胶溶液(g/U和对氨基苯磺酸溶液等体积混合。2.7 亚硝酸纳标准溶液2准确称取250.0mg于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钩，加水溶解移入500 mL容量瓶中，加100mL氯化镀缓冲液，加水稀释至刻度，混匀，在4C避光
3、保存。此溶液每毫升相当于500月的亚硝酸销。2.8 亚硝酸纳标准使用液:I拖用前，吸取亚硝酸锵标准溶液1.00 mL.置于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5.。g亚硝酸销。3 仪揭3. 1 小型粉碎机。3. 2 分光光度计。4 操作方法4. 1 样品处理称取约10.00g(粮食取5g)经绞碎混匀样品，置于打碎机中，加70mL水和12mL氮氧化纳溶液(20 g/L).混匀，用氢氧化销溶液(20g/L)调样品pH=8.定量转移至200mL容量瓶中加10mL硫酸钵溶液，混匀，如不产生白色沉淀，再补加2-5mL氢氧化俐，混匀。置60C水浴中加热10min，取出后冷至室温，加水至刻
4、度，混匀。放置O.5 h.用滤纸过滤，弃去初滤液20mL.收集滤液备用。4.2 测定4. 2. 1 亚硝酸盐标准曲线的制备2吸取0.0.5.1.0.2. 0.3. 0.4. 0.5. 0 mL亚硝酸销标准使用液(相当于0.2.5.5.10.15.20，25月亚硝酸销).分别置于25时，带塞比色管中。于标准管中分别加入4.5mL 537 氯化镀缓冲液，加2.5mL60%乙酸后立即加入5.0mL显包剂，加水至刻度，混匀，在暗处静置25min , 用1cm比色杯(灵敏度低时可换2cm比色杯)，以零管调节零点，于波长550nm处测吸光度，绘制标准曲线。低含量样品以制备低含量标准曲线计算，标准系列为:吸
5、取0，0.4，0.8，2, 6 , 2. 0 mL亚硝酸销标准使用液(相当于0，2，4，6，8，10月亚硝酸纳)。4.2.2 样品J!IJ定:吸取10.0mL上述滤液(4.1)于25mL带塞比色管中，自4.2.1于标准管中分别加入4.5mL氯化锁缓冲液起依法操作。同时做试剂空白。5 结果计算1亚硝酸盐含量按式()计算:x-2L立1000 ,-v噜m , X有X1000 式中，X、l样品中亚硝酸盐的含量，mg/kg，m , 样品质量，g;1n2 测定用样液中亚硝酸盐的质量，g，V , 样品处理液总体积，mL;V , 测定用样液体积，mL结果的表述:报告算术均值的二位有效数。6 允许差相对相差运1
6、0%。(二)硝酸盐测定7 原理. ( 1 ) 样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，溶液通过铺柱，或加入铺粉，使其中的硝酸根离子还原成亚硝酸根离子，在弱酸性条件下，亚硝酸根与对氨基苯磺酸重氮化后，再与N-l荼基乙二胶偶合形成红色染料，测得亚硝酸盐总量，由总量减去亚硝酸盐含量即得硝酸盐含量.8试剂8. 1 氯化镀缓冲溶液(pH9.69. 7)，同2.1.8. 2 硫酸锅溶液(0.14mol/U，称取37g硫酸铺(CdSO， 8H,o) ，用水溶解，定容至1L。8. 3 盐酸溶液(0.1mol/L)，吸取8.4mL盐酸，用水稀释至lL8.4 硝酸纳标准溶液:准确称取500.0mg于1l0120C干燥恒重的
7、硝酸锅，加水溶解，移于500mL 容量瓶中，加50mL氯化镀缓冲液，用水稀释至刻度，混匀，在4C冰箱中避光保存。此溶液每毫升相当于1mg硝酸俐。8. 5 硝酸纳标准使用液zl临用时吸取硝酸饷标准溶液1.0 mL，置于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀，临用时现配。此溶液每毫升相当于10周硝酸锅。8. 6 亚硝酸饷标准使用液同2.8，8. 7 铺位(锅粉)。8. 7. 1 海绵状铺粉的制备:于500mL硫酸锅溶液中，技入足够的钵棒经34h，当其中的锅全部被铮冒换后，用玻璃棒轻轻刮下，取出残余铸棒，使俑沉底，倾去上层清液，以水用倾斜法多次洗涤，然后移人538 粉碎机中，加500mL水，揭碎约
8、2S.用水将金属细粒i洗至标准筛上，取2040目之间的部分，置试剂瓶中，用水封盖保存，备用。8.7.2 铺柱还原效率的测定:取25mL酸式滴定管数支，向柱底压人1cm高的玻璃棉作垫，上置一小漏斗，将新配制的锅粉带水加入柱内.边装边轻轻敲击柱，排除柱内空气，加铺粉至810cm高，上面用1cm高的玻璃棉覆盖，上置一贮液漏斗。当锅柱填装好后，先用25mL盐酸(0.1 mol/U洗涤，再以水洗两次，每次25mL，调节柱流速至35 mL/min，铺柱不用时用水封盖，随时都要保持水平面在锅层之上，不得使铺层夹有气泡。铺柱每次使用完毕后，应先以25mL盐酸(0.1mol/U洗涤，再以水洗两次，每次25mL.
9、最后用水覆盖铺柱。桂先加25mL氯化镀缓冲液，至液面接近海绵铺时，吸取2.0mL硝酸纳标准使用液(10问/mU，经柱还原，控制流速35mL/min，用50mL容量瓶接收。加入5mL氯化镀缓冲溶液，液面接近海绵铺时，加人15mL水洗柱，还原液和洗液一并流入50mL容量瓶中。加5mL60%乙酸，10mL显色剂，加水稀释至刻度，混匀，暗处放置25min。用1cm比色杯，以标准零管调节零点，于波长550nm处测吸光度，根据亚硝酸盐标准曲线计算还原效率(如铺柱还原率小于95%，应经盐酸浸泡活化处理)。8.7.3 铺粉还原效率的测定g铺粉使用前，经盐酸浸泡活化处理，再以水洗两次，用水浸没待用。用牛角勺将铺
10、粉加入25mL带塞刻度试管中，至5mL刻度;用少量水封住。吸取2.0mL硝酸销标准使用液，加入5mL氯化镀缓冲液。盖上试管塞，振摇2min，静止5min，用漏斗颈部塞有少量脱脂棉的小漏斗过滤，滤液定量收集于50mL容量瓶中，用15mL水少量多次地洗涤铺粉，洗液与滤液合并，!J5时，乙酸(60%)后，立即加10mL显色剂，加水稀释至刻度，混匀，暗处置25min。用1cm比色杯，以标准零管调节零点，于550nm波长处测吸光度，根据亚硝酸盐标准曲线计算还原效率。8.7.4 结果计算还原效率按式(2)计算zX，阴，X 1. 232 = -一一一一一=X 100 , 20 ( 2 ) 式中:Xz 还原效
11、率，%; 20一-硝酸盐的质量，用;叫一-20g硝酸盐还原后测得亚硝酸盐的质量，g;1. 232 亚硝酸盐换算成硝酸盐的系数。9 分析步骤9. 1 样品处理同4.L 9. 2 测定(用锅柱法或锅粉法还原硝酸盐为亚硝酸盐)9.2.1 甲法(铺柱法):经活化的铺柱先加25mL氯化镀缓冲液，至液面接近海绵俑时，准确吸取4.1 的样品滤液10.0 mL，加入铺柱还原。以下按8.7.2自控制流速35mL/min起依法操作。9.2.2 乙法(俑粉法):准确吸取4.1的样品滤液10.0mL，置于盛有高度5mL铺粉的25mL带塞刻度试管中。自加人5mL氯化镀缓冲液按8.7. 3依法操作。注:蔬菜、臆莱类食品中硝酸盐吉量较高，可根据样品中硝酸盐的实际吉量，将样品溶液稀择至适当浓度.10 结果计算硝酸盐的含量按式(3)计算2X ( m5 - m6) X 1. 232 X 1 000 3 - m , X (V,/V,) X 1 000 . ( ) 式中:X3 样品中硝酸盐的含量，mg/kg;539 m , 样品的质量，gj m5 经俑粉还原后测得亚硝酸纳的质量，吨，m , 直接测得亚硝酸盐的质量，问1. 232 亚硝酸销换算成硝酸铀的系数。V , 样品处理液总体积，mL;V, 测定用样液体积.mL。结果的表述:报告算术平均值的两位有效数。11 允许差相对相差，;，1 0 %。540
