1、ICS 67.040 C 53 国中华人民共和国国家标准GB/T 5009.33-2003 代替GB/T5009.33-1996 食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定Determination of nitrite and nitrate in foods 2003-08-11发布2004-01-01实施中华人民共和国卫生变发布中国国家标准化管理委员GB/T 5009.33一23前言本标准代替GB/T5009.33-1996试样处理液总体积，单位为毫升(mL)，V2一一-测定用样液体积，单位为毫升(mL)。计算结果保留两位有效数字。7 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平
2、均值的10%。铺柱法一一硝酸盐测定8 原理.( 1 ) 试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后，溶液通过锅柱，使其中的硝酸根离子还原成亚硝酸根离子，在弱酸性条件下，亚硝酸根与对氨苯基磺酸重氮化后，再与盐酸茶乙二胶偶合形成红色染料，测得亚硝酸盐总量，由总量减去亚硝酸盐含量即得硝酸盐含量9 试剂9.1 氨缓冲溶液(pH9.69. 7):量取20mL盐酸，加50mL水，混匀后加50mL氨水，再加水稀释至1000 mL，混匀。9.2 稀氨缓冲液z量取50mL氨缓冲溶液，加水稀释至500mL，混匀。9可盐酸溶液(0.1mol/L):吸取5mL盐酸，用水稀释至600mL, 9.4 硝酸销标准溶液z准确称取0.123
3、2g于11OC120C干燥恒重的硝酸锅，加水溶解，移于500mL 容量瓶中，并稀释至刻度。此溶液每毫升相当于200吨亚硝酸销。9.5 硝酸纳标准使用液临用时吸取硝酸纳标准溶液2.50mL，置于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度。此溶液每毫升相当于5g亚硝酸销。9.6 亚硝酸纳标准使用液同3.7，10 仪器10.1 铺柱10. 1. 1 海绵状锅的制备z投入足够的钵皮或停棒于500mL硫酸铺溶液(200g/L)中，经3h4 h，当其中的锅全部被铸置换后，用玻璃棒轻轻刮下，取出残余铸棒.使锅沉底，倾去上层清液，以水用倾泻法多次洗涤，然后移人组织捣碎机中，加500mL水，捣碎约2s，用水将金属细粒洗
4、至标准筛上，取262 GB/T 5009.33-2003 20目40目之间的部分。10. 1. 2 铺柱的装填.如图10用水装满锅柱玻璃管，并装入2cm高的玻璃棉做垫，将玻璃棉压向柱底时，应将其中所包含的空气全部排出，在轻轻敲击下加入海绵状锅至8cm10 cm高，上面用1cm高的玻璃棉覆盖，上置一贮液漏斗，末端要穿过橡皮塞与铺柱玻璃管紧密连接。如;无上述铺柱玻璃管时，可以25mL酸式滴定管代用。当锅柱填装好后，先用25mL盐酸(0.1mol/U洗涤，再以水洗两次，每次25mL，锅柱不用时用水封盖，随时都要保持水平面在锅层之上.不得使锅层夹有气泡。l一一贮液漏斗，内径35mrn.外径37mrn;
5、 2 进液毛细管，内径。4mm，外径6mm; 3 橡皮塞;4 铺柱玻璃管.内径12mrn，外径16mm; 5、7玻璃棉;6 海绵状锅p8 出液毛细管，内径2mm，外径8mmo 图110. 1. 3 铺柱每次使用完毕后，应先以25mL盐酸(0.1 mol/L)洗涤，再以水洗两次，每次25mL，最后用水覆盖铺柱。10. 1. 4 铺柱还原效率的测定g吸取20mL硝酸铀标准使用液，加入5mL稀氨缓冲液，混匀后依照11. 2. 211. 2. 3进行操作。取10.0mL还原后的溶液(相当10吨亚硝酸饷)于50mL比色管中，以下按5.2进行操作，根据标准曲线计算测得结果，与加入量一致，还原效率应大于98
6、%为符合要求。10. 1. 5 结果计算:还原效率按式(2)进行计算。X生x100% 10 .( 2 ) 263 GB/T 5009.33-2003 式中X一一还原效率;A 测得亚硝酸盐的质量，单位为微克(g)，10 测定用溶液相当亚硝酸盐的质量，单位为微克(JLg)，11 分析步骤11. 1 试样处理同5.L 11. 2 测定11. 2. 1 先以25mL稀氨缓冲液冲洗铺柱，流速控制在3mL/min5 mL/min(以滴定管代替的可控制在2mL/min3 mL/min)。11. 2. 2 吸取20mL处理过的样液于50mL烧杯中，加5mL氨缓冲溶液，混合后人贮液漏斗，使流经锅柱还原，以原烧杯
7、收集流出液，当贮液漏斗中的样液流完后，再加5mL水置换中l内附存的样液。11. 2. 3 将全部收集液如前再经铺柱还原-次，第二次流出液收集于100mL容量瓶中，继以水流经铺柱洗涤三次，每次20mL.洗液一并收集于同一容量瓶中，加水至刻度，混匀。11. 2. 4 亚硝酸纳总量的测定2吸取10mL20 mL还原后的样液于50mL比色管中，以下按5.2自吸取0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00.起依法操作。11. 2. 5 亚硝酸盐的测定=吸取40mL经11.1处理的样液于50mL比色管中，以下按5.2自吸取0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00.起依法操
8、作。12 结果计算试样中硝酸盐的含量按式(3)进行计算。I A1 X 1 000 A, X 1 00o I V ,. V , . V,. I x 1. 232 I m X i+ x X 1 000 m X X 1 000 I 1 . V , V, .- n V5 n J ( 3 ) 式中=X 试样中硝酸盐的含量，单位为毫克每千克(mg/kg); m一一试样的质量，单位为克(g); A , 经锅粉还原后测得亚硝酸纳的质量，单位为微克(g), A2 直接测得亚硝酸盐的质量，单位为微克(g); 1. 232 亚硝酸倒换算成硝酸铀的系数;V, 测总亚硝酸纳的试样处理液总体积，单位为毫升(mL);V,
9、测总亚硝酸纳的测定用样液体积，单位为毫升(mL);民经铺柱还原后样液总体积，单位为毫升(mL);V，-一一经锅柱还原后样液的测定用样液体积，单位为毫升(mL);V5 直接测亚硝酸纳的试样处理液总体积，单位为毫升(mL);V , 直接测亚硝酸纳的试样处理液的测定用样液体积，单位为毫升(mL)。计算结果保留两位有效数字。13 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。264 GB/T 5009.33一2003示:皮极谱法一一亚硝酸盐测定14 原理试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸性的条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，在弱碱性条件下再与8短基唾琳偶合形成橙
10、色染料，该偶氮染料在乘电极上还原产生电流，电流与亚硝酸盐的浓度呈线性关系，可与标准曲线比较定量。15 试剂15.1 亚铁氟化饵溶液z称取106.0 g亚铁氟化御K，Fe(CN)6 3H，OJ.用水溶解，并稀释至1000mL。15.2 乙酸钵溶液z称取220.0 g乙酸铸Zn(CH3CO)2.2H20J，加30mL冰乙酸溶于水，并稀释至1000mL 15.3 饱和棚砂溶液=称取5.0g砌酸销(Na2B，O，.lOH20)，溶于100mL热水中，冷却后备用。15.4 对氨基苯磺酸溶液(8g/L)，称取2g对氨基苯磺酸，用热水溶解，再加25mL盐酸(1. 0 mol/Ll，移至250mL容量瓶稀释至
11、刻度。15. 5 8涯基喳琳溶液(1g/L)，称取0.250g 8瓷基喳琳，加4mL盐酸(0.1mol/L)和少量水溶解，移至250mL容量瓶稀释至刻度。15.6 EDTA溶液(0.10mol/L) ，称取3.722g EDTA C1oHHN20 , Na 2H，OJ，加水30mL溶解，转入100mL容量瓶中用水稀释至刻度。15.7 氨水(5%)，吸取28%的浓氨水5.00mL于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度。15.8 亚硝酸盐标准溶液z准确称取O.100 0 g于硅胶干燥器中24h的亚硝酸俐，加水溶解移入500 mL容量瓶中，并稀释至刻度，此溶液每毫升相当于200吨亚硝酸锅。15.9 亚
12、硝酸销标准使用液z准确吸取亚硝酸纳标准溶液5.00mL于200mL容量瓶中.加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5g亚硝酸纳。再取10.00mL该稀释液于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于0.5吨的亚硝酸例。16 仪器16.1 小型绞肉机。16.2 示波极谱仪。17 分析步骤17.1 试样处理称取5.000g经绞碎混匀的试样(午餐肉、火腿肠可称10.00 g20. 00 g).置于50mL烧杯中，加12.5mL跚砂饱和液，搅拌均匀，以700C的水300mL将试样洗入500mL容量瓶中，于沸水浴中加热15min，取出后冷却至室温，然后一面转动，面加入5mL亚铁氧化饵溶液，摇匀，
13、再加入5mL 乙酸钵溶液，以沉淀蛋白质。加水至刻度，摇匀，放置。.5h，除去上层脂肪，清液用滤纸过滤，弃去初滤液50mL.滤液备用。17.2 测定吸取3mL上述滤液于10mL容量瓶(或比色管)中，另取0、0.50、1.00、1.50、2.00、2.50、3.00 mL亚硝酸纳标准溶液(相当于0，0.25、0.50、O.75、1.00、1.25、1.50阅亚硝酸纳于10mL容量瓶(或比色管)中，于标准与试样管中分别加入0.20mL EDTA溶液(0.10mol/L)、1.50 mL对氨基苯磺酸溶液(8g/Ll.混匀，静止3min-4 min后各加入1.00 mL 8短基喳琳溶液(1g/Ll和0.
14、5mL氨265 GB/T 5009.33-2003 水(5%).用水稀释至刻度.昆匀，静止10min,-._, 15 min，将试液全部转入电解池中(10mL小烧杯)。在示波极谱仪上采用三电极体系进行测定(滴隶电极为工作电极，饱和甘乘电极为参比电极，铅电极为辅助电极)。17.3 测定参考条件原点电位调节在0.2 V , 倍率为0.1(可以根据试样中亚硝酸盐含量多少选择合适的倍率。含量高，倍率高，倍率选择在0.1以上;反之，倍率选择在0.1以下)。电极开关拨至三电极，导数档。测量开关拨至阴极。将三电极插入电解池中，每隔7s仪器自行扫描次，在荧光屏上记录-0.56V左右(允许电位波动10mV20 mV)的极谱波高，绘制标准曲线比较。18 结果计算试样中亚硝酸盐的含量按式(4)进行计算。式中A X 1 000 x= . ( 4 ) m X (V2/Vj ) X 1 000 X 1 000 X 试样中亚硝酸盐的含量，单位为克每千克(g/kg);A 测定用样液中亚硝酸盐的质量，单位为微克(g)，Vj一一试样溶液的总体积，单位为毫升(mL)，V2 测定用样液的体积，单位为毫升(mL)，m 试样质量，单位为克(g)。计算结果保留两位有效数字。19 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。266
