1、GB/T 8312-2002 前言本标准是对GB/T8312-1987(茶咖啡碱的测定的修订。本标准第一法高效液相色谱法等效采用ISO10727，1995(高效液相色谱法测定茶和固态速溶茶中的咖啡碱含量儿本标准与ISO10727，1995的主要差异是:将等效采用的ISO10727，1995方法作为本标准的第一法。本标准与GB/T8312-1987的主要差异是:增加了第一法高效液相色谱法，并将GB/T8312-. 1987中紫外分光光度法作为本标准的第二法。本标准第一法和第二法可获得相同的结果。本标准自实施之日起，同时代替GBIT8312一1987，本标准由中华全国供销合作总社提出。本标准由中华
2、全国供销合作总社杭州茶叶研究院归口。本标准起草单位:中华全国供销合作总社杭州茶叶研究院。本标准主要起草人:周卫龙、孙安华、钟萝。本标准由中华全国供销合作总社杭州茶叶研究院负责解释。IH G/T 8312-2002 ISO前言ISO(国际标准化组织是一个各国标准化组织机构OSO成员团体)的国际性耳其盟。通常常j定商标标准的1作是由ISO技术委员会承担，每个成员团体如有兴趣，都有仪成为该琐日委员会的代表，与lSO有联系部官方或非官方的民际标准组织也参与工作。lSO1专题际电工委员会OEC)在电工标准文件紧密合作。技术委员会所采纳的阂际标准尊案提交各成员团体表决，网际标准的出版必须取得不少于成员团体
3、75%豹赞成票。国际标准lSO10727是由lSO/TC34农产食品技术委员会制定。同际标准lSO10727的附录A秘附录8仅供参考。145 中华人民共和圄国家标准茶咖啡畸测定Tea-Determination of caffeine content 1 范围GB/T 8312- 2002 eqv IS0 10727 ,1995 代替GB/T8312 1987 本标准规定了用高效液相色谱法、紫外分光光度法对茶叶中咖啡碱测定的原理、仪器和用具、试剂和溶液、操作方法及结果计算方法。本标准适用于茶叶中咖啡碱的测定。2 引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时
4、，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。GB/T 8302-2002茶取样GB/T 8303-2002 荼磨碎试样的制备及其干物质含量测定第一法高效液相色谱法3 原理茶叶中咖啡碱经沸水和氧化侯混合提取后，经高效液相色谱仪、C分离柱、紫外检测器检测，与标准系列比较定量。4 仪器和用具实验室常规仪器及下列各项4. 1 高效液相色谱仪。4.2 紫外检测器:检测波长280nm , 4.3 分析柱，C18(DS柱)。4.4 分析天平:感量。.000 1 g , 5 试剂和溶液甲醇为色谱纯，水为重蒸馆水。5. 1 氧化续z分析纯。5. 2 高效液相色谱流
5、动相z取600mL甲醇倒入1400 mL重蒸馆水，混匀，脱气。5. 3 咖啡碱标准液:称取125mg咖啡碱(纯度不低于99%)加乙醇2水(, 4)溶解，定容至250mL。使用时，待标准液至室温后，取2mL h日水至100mL作为工作液。6 操作方法6. 1 取样中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局2002- 06 -17批准却02-12-01实施146 GB/T 8312-2002 按G/T8302的规定。6.2 试样制备按GB/T8303的规定。6.3 测定步骤6.3.1 试液制备称取.0 g(准确至0.0001g)磨碎茶样(6.2) .置于500mL烧瓶中，加4.5g氧化续及300时，沸
6、水，于沸水浴中加热，浸提20min (每隔5min摇动次).浸提完毕后立即趁热减压过滤.滤液移入500 mL容量瓶中，冷却后，用水i容至刻度.混匀。政一部分试液，通过0.45m滤膜过滤，待用。6.3.2 色谱条件6. 3- 2.1 检测技长.紫外检测器，波长280nmo 6. 3- 2.2 流动相:水z甲醇的体积分数为73。6.3.2.3 流速，0.5 mL/min . 5 mL/min。6. 3- 2.4 柱温，40C。6.3.2.5 进样量，10L20L。6. 3. 3 测定准确吸取制备液(6.3.1)10L20L.注入高效液相色谱仪，并用咖啡碱标准液(5.3)制作标准曲线，进行色谱测定。
7、7 结果计算7. 1 计算方法比较试样和标准样的峰面积，按式(1)计算C, X手咖啡碱(%)ZAd2 100 . . . ( 1 ) M , X m , X 1 000 式中:( 捆tli液中咖啡碱含量.pL , 样品总体积，mL;L2 进样体积，L;M , 试样的质量，如m , 试样干物质含量，%。如果符合重复性(7.2)的要求，取两次测定的算术平均值作为结果.结果保留小数点后位。7.2 重复性|司一样品的两次测定值之差，每100g试样不得超过O.2 g 0 第二法紫外分光光度法8 原理茶叶中的咖啡碱易溶于水，除去F扰物质后，用特定波长测定其含量。9 仪器和用具实验室常规仪器及下列各项29.
8、 1 紫外分光光度仪。9.2 分析夭平:感量。.001 g 0 H7 GB/T 8312-2002 10 试剂和溶液所用试?对应为分析纯(AI主)，水为蒸滚水。10. 1 碱玲:乙酸铅溶液z称JIj50 g碱式乙酸铅，加水100mL.静景过夜J现出上清液过滤。10.2 盐酸，0.01mol/L熔液，取0.9mL浓越酸，用水稀释1L，摇匀。1日.3硫梭:4.5mol/L溶液，取浓硫被250mL，用水稀将至1L，摇匀。10.4 咖啡碱标准液g称取100mg咖啡碱(纯度不低于99%)溶于100时，水中，作为母液，准确吸取5 mL损水至10mL作为工作液(1mL含草草碍Fl碱0.05mg)。1 1 测
9、定步骤11. 1 试液帘j各称取3g(准确.tO. 001 g)磨碎试样(6.2)于500mL雏形瓶中，加沸蒸倒水450mL.立即移人沸水浴中，浸援45min (练隔10rnin摇动一次)0没提完毕后守NP趁热减压过滤。滤液移入500mL容量并在巾，残渣ll少量热蒸馆水洗涤23次，并将滤液滤入上述容量瓶中，冷却后用蒸熔水稀释至2自WL11. 2 用移液管准确吸取试液(11.1)10 mL移人100mL容戴瓶中，加入4mL 0.01 mol/L盐酸(lO. Z)称1mL碱式乙毅铅溶液(10.抄，用水草普释至主t宜，混匀，静置澄清过滤，准确吸取滤液25mL , 泼入50时，容量瓶中，加入0.1mL
10、 4.5 mol/L硫酸溶液00.川，加水稀释至刻度，混匀，静宣澄清过滤。用10mrn 比色杯，在波长274nm处.以试fi)空白溶液作参比，测定吸光度(A)。11. 3 咖啡碱标准草草线的制作分别吸取0、l、2、3、4、5、6mL咖啡碱工作液00.4)于一组25mL容烧瓶中，各加人).0 mL盐酸(10.幻，丹:水草草释至2声(1)度J犀匀，黑10mm石英比色杯，在E波长274nm处，以试fiJ空白溶浓作参比.测定吸光度(A)。将拥H导的吸光Jl与对应的咖啡碱浓度绘制标准曲线。12 结果计算茶叶中咖啡碱含量以千态质量分数表示.按式(2)计算，咖啡碱(%) c, . L宠100. . 50 一儿一一二-X-1 000 10 . 25 Mz X m2 X 100 式中:C2吁一根据试样测得的吸光度(A)，从咖啡碱标准航线上查得的咖啡喊相应含邃，mg/mL;L;l 试液总量，mL;Mz-试样用量，如m，一试棒子物质含量量t%。如果符合重复性(7.2)，JIj两次测定的算术平均值作为结果.保留小数点后一位。!.j H . ( 2 )
