1、 中华人民共和国国家标准 UDC 637.51/.52 :443.06 肉与肉制品 葡糖酸 内酯含量的测定 GB/T 9695-17.88 Meat and meat products Method for determination of glucono-delta-lactone content 本标准等同采用国际标准 ISO 4133 1979 肉和肉制品中葡糖酸- -内酯含量的测 定 。 1 主题内容与适用范围 本标准规定了肉和肉制品中葡糖酸- -内酯含量的测定方法。 本标准适用于肉和肉制品中葡糖酸- -内酯含量的测定。 2 引用标准 GB 9695.15 肉与肉制品 水分含量测定 G
2、B 9695.19 肉与肉制品 取样方法 3 原理 用冷高氯酸提取试样中的葡糖酸- -内酯, 离心, 倾析并过滤上清液。在氢氧化钾作 用下葡糖酸- -内酯转化成葡糖酸酯。葡糖酸酯通过葡糖酸酯激酶和 6-磷酸葡糖酸酯脱氢 酶的作用, 产生 5-磷酸核酮糖并使烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)还原。 葡糖酸酯+ATP 葡糖酸酯激酶 6- 磷酸葡糖酸酯+ADP 6-磷酸葡糖酸酯+NADP 6- 磷酸葡糖酸酯脱氢酶 5- 磷酸核酮糖+NADPH+CO2+H- 用分光光度计测量还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸的光密度, 然后计算出葡糖酸 - -内酯的含量。 4 试剂 所用试剂均为分析纯。容器应认真清洗,
3、 蒸煮或灭菌。水是重蒸水。 4.1 高氯酸(GB 623):0.4mol/L 溶液。 4.2 氢氧化钾(GB 2306):2 mol/L 溶液。 4.3 缓冲液：称取二苷氨酞 2.64g 和氯化镁(GB 672) 0.284g 溶于 150mL 水中, 用氢氧化钾 溶液调 pH 至 8.0,定容到 200mL。 4.4 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸钠盐: 称取烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸钠盐 50mg 于带盖的小瓶 中 ,用 5.0mL 水溶解。 4.5 腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)溶液: 称取腺嘌呤核苷三磷酸钠盐 250mg 和碳酸氢钠(GB 640) 250mg 于带盖的小瓶中, 加入 5mL 水溶解。
4、 4.3,4.4,4.5 试剂可在 4下保存四星期。 4.6 每毫升 6-磷酸萄糖酸酯脱氢酶(6-PGDH) 悬液中含有 6-PGDH2.0mg, 葡糖酸激酶和还原 型 NADP 氧化酶不超过 0.05。 4.7 每毫升葡糖酸激酶(GK) 悬液中含有 GK1.0mgNADP 氧化酶含量不超过 0.05。 4.6,4.7 试剂可在 4下保存 6 个月。 5 仪器和设备 5.1 常用实验室仪器 5.2 绞肉机：孔径不超过 4mm。 5.3 匀浆器。 5.4 离心机。 5.5 紫外分光光度计。 6 试样 6.1 按 GB 9695.19 取样。 6.2 至少取有代表性试样 200g 通过绞肉机绞两次
5、混匀。 6.3 绞好的试样要尽快分析, 若不立即分析, 要密封冷藏贮存, 防止变质和成分发生变 化 ,贮存的试样在启用时必须重新混匀。 7 分析步骤 7.1 葡糖酸酯的制备 称取试样 50g(精确至 0.01g),放入烧杯内, 加入 0.4mol/L 冷高氯酸溶液 100mL 于匀浆 器中均浆, 转移到离心管中, 在 3000r/min 离心 10min 除去上面的脂层, 上清液通过扇形滤 纸过滤到 200mL 锥形瓶中 ,弃去最初滤液 10mL。取滤液 50mL 于 100mL 烧杯中 ,用氢氧化钾溶 液调 pH 至 10。然后将烧杯内容物完全转移到 100mL 容量瓶中并定容, 置于冰浴中
6、放置 20min 后 ,用扇形滤纸过滤 ,弃去最初的滤液 10mL。取滤液 25mL 或适当体积移入 100mL 容量 瓶中并定容。 7.2 测定 取缓冲液 2.50mL,NADP 溶液 0.1mL 和 ATP 溶液 0.1mL 分别置于两个比色杯中, 其中一个 比色杯加入提取液 0.2mL 为试验溶液, 另一个比色杯中加入水 0.2mL 为空白溶液, 然后再分 别加入 6-磷酸葡糖酸酯脱氢酶 0.05mL,混匀后放置 5min,以空气为参比在 365nm 或 340nm 波长处测光密度。 A1试验溶液的光密度值 A1B空白溶液的光密度值 取葡糖酸酯激酶悬液 0.01mL 分别置于上述两个比色
7、杯中, 立即混匀。10 15s 内在 360nm 或 340nm 波长处测光密度。以后每隔 2min 测一次, 直 到光密度值恒定为止。绘制出光 密度值与时间的关系曲线, 并查出光密度最大值。 A2试验溶液的光密度值 A2B空白溶液的光密度值 8 分析结果的计算 M m 计算公式： 100 2.96 196.1 100 100 100 100 X( ) = 0.908 A K 0.2 1000 1000 V 50 m A M m = 52.705(100+ ) K V m 100 式中: X 葡糖酸- -内酯含量, ; A(A2-A1) - (A2B-B1B); 196.1D - ( ) -葡
8、糖酸的相对分子量； K在 365nm 波长时,K = 3.5cm*2/ mol； 在 340nm 波长时,K = 6.23cm*2/ mol； V取滤液的体积(25mL) ； M试样的含水量； m试样质量 g。 当符合允许差要求时, 则取两次测定的算术平均值作为结果, 精确到 0.01。 8 允许差 同一分析者同时或相继两次测定允许差不超过平均值的 10。 附加说明： 本标准由中华人民共和国商业部食品局提出。 本标准由中国肉类食品综合研究中心归口。 本标准由中国肉类食品综合研究中心负责起草。 本标准主要起草人裴显庆、张纯。 中华人民共和国商业部 1988-02-25 批准 1989-03-01 实施
