1、中华人民共和回国家标准肉均肉制品维生素8，含量理.M幅在andm回重prod时相?峰时bodfor determination of vitamin 81 content 1 主题内容与通恕我本标准巍定了内与内秘品中维生素B11量擎的吉普定方法。本标准适用于肉与肉模j品中维生素B.含量的测定e2 511目标准GB 9695. 19 肉与肉制品取样方法3原理GBj9695.27-91 试样用酸水解使维生素B.(硫跤素游寓，维生素B，经酶解、绪化后在碱性离铁氟化告H营房下定量氧化成具有蓝色荧光的硫色素。在激发波长365nm，发射波长435nm处测定其荧光强度，荧光强度与硫色素含量成正比，以此计算维
2、生素矶的含量。4试JiJ所用试剂均为分析纯，水为蒸幸自水或阅等纯度自号水4.1 乙酸锵(GB694): 2 moljL溶液。4.2 盐酸(GB622):0.1 mol/L溶液。4.3 澳甲盼绿pH指示剂变色范围:pH傻为4.O(绿)-5.8(疏).O. 1 g指示剂与0.05mol/L氢氧化销溶液2.8mL在玛瑞乳钵中研磨溶解，以水稀至200mL. 4.4 澳酣蓝pH指示剂:变色范围:pH僚为3.O(黄)-4.6(葳) O. 1 g指示剂与0.05mol/L氮氧化销溶液3mL在玛淄乳钵中研磨溶解，以水稀至250mL. 4.5 离蜂淀粉德:10%溶液罕4.6 氯化挥(GB646) :25%溶液。
3、4.7 酸性氯化梆溶破:每升氯化梆溶液中加入8.5mL浓盐酸。4. 8 氢氧化销(GB629): 15%溶液。4.9 铁氟化梆(G日644):1%溶液。4.10 氧化剂:1 %铁氟化饵溶液1mL.IIl15%氮氧化纳溶液稀将至100L, 1陆用前配制。4.11 异了辞。4.12 95%乙董事(GB679) .20%溶液4.13 酸性乙醇，20%乙醇溶液用。.1mol/L盐酸溶液谓节pH为3.4-4.3，4.14 人JJ!沸石2市售品要经活化处理活化方法:将粒度40-60日的人泼沸石置于烧杯中，加约5倍量的热水搅拌，静_I!t后倾出上清液奔去。重复此操作d在至上清液透明。接辈辈加入5倍量的3%乙
4、酸溶液搅拌浸泡10min，静11后倾去上清理家技术监督局1991-03-26批准1991-12们实施338 GB/T 9 6 9 5. 2 7 - 9 1 液，重复此操作3次。然后加入约5倍量热的酸性氯化饵溶液，在沸水浴中加热25min，弃去tl青液，加3%乙酸溶液洗涤两次后，用水反复洗至元氯离子为止(用硝酸银溶液检查)。将处理过的人造沸石浸没于水中保存，也可于80C干燥备用。维生素B，回收率要大于85%。4.15 维生素B，标准溶液4.15.1 标准贮备液100g/mL，称取50.0吨维生素B，标准晶于500mL棕色容量瓶中，用酸性乙醇稀释至刻度，置冰箱保存。4. 15. 2 标准工作液10
5、g/mL， 取标准贮备液10.0mL，用酸性乙醇定容至100mL棕色容量瓶中。5 仪器和设备5. 1 实验室常规设备，5.2 绞肉机z孔径不超过4mm; 5.3 培养箱2可控制温度45-50(; 5.4 棕色具塞试管，25-40mL; 5.5 荧光分光光度计，5.6 人造沸石玻璃层析柱2构造如图10 层析柱可控制流速为1mL/mino准备方法g将脱脂棉置于毛细管顶端防止沸石流出和控制榕液流速。把悬浮于水中的人造沸石倾入层析柱中，其高度约10cm(约用1.5 g人造沸石)仔细洗下贮液槽壁上的人造沸石颗位.在吸附过程中液面要始终高于沸石表面，防止柱内有气泡。单位，mm20 贮液槽。-7 。mH咂附
6、骨毛细管图1玻璃层析柱5. 7 高压釜。6 试样6. 1 按GB9695. 19取祥。6. 2 取有代表性的试样200g，于绞肉机中至少绞两次使其混匀，贮于密闭容器中备用。尽快分析试样。7 分析步骤7. 1 水解:3 39 GB/9695.27-91 称取4-6g试样(精确至0.001g)(约含维生素B，10-25陆)于150mL具塞锥形瓶中，加入O.1 mol盐酸溶液50mL，搅匀，于沸水浴中水解30min，或者用高压釜121-123(:水解30m恒。取出冷却至室温。7.2酶解用乙酸销溶液调节试样水解液，使pH为4.0-4.5，用澳甲盼绿指示剂在点滴板上检查.加入高峰淀粉酶榕液5mL，混匀，
7、在45-50(:培养箱中保温3h。取出冷却后用。.1mol/L盐酸调整pH为3.5左右，用澳盼蓝指示剂在点滴板上检查.将海液全部转移到100mL容量瓶中，用水稀释至刻度。摇匀，用滤纸过滤，取滤液备用。7.3 净化取酶解滤液25.0mL，注入人造沸石层析柱，层析柱流速控制在1mL/min左右，弃去流出液。用3份5mL近沸热水洗涤层析柱，弃去流出液.用25mL 60-80(:热的酸性氯化饵溶液分5次洗脱维生素矶，收集于25mL容量瓶中，冷却后用酸性氯化仰溶液定容。混匀备用。7.4 氧化取2支40mL具塞棕色试管，加入1.5 g氯化饵或氯化纳.再加入净化后的样液5.0mL，一支试管中加入氧化剂3mL
8、.立即旋摇试管，混匀，加入异了醇10mL萃取，塞上塞子振摇90s.静置分层。另一支试管作为空白对照，加入15%氮氧化纳溶液3mL，旋摇混匀，加入异丁醇10mL萃取，静置分层，异丁醇层用无水硫酸铺脱水。7.5 荧光测定准备好荧光分光光度计，调节激发波长为365nm，发射波长为435nm，狭缝为5mm，取异了醇萃取液，置于比色皿中，测定氧化样品管中的荧光强度为1，空白样品管中的荧光强度为10。7.6 维生素B，标准的测定取维生素B，标准工作液2.。此，于150mL具塞锥形瓶中，同样按7.1-7.5条操作步骤进行水解、酶解、净化、氧化、测定。氧化标准管中荧光强度为Q.空白标准管中荧光强度为Qo。8
9、分析结果的计算计算公式zx = 1 -o X 20 一二Q-Qom 式中:X一一试样维生素B，的含量.mg/炮，I -一氧化样品管中的异丁醇液的荧光强度，10 -一空白样品管中的异丁醇溶液的荧光强度gQ-一氧化标准管中的异丁醇溶液的荧光强度gQo一空白标准管中的异丁醇溶液的荧光强度gm-一试样质量当符合允许差规定的要求时，取两次测定结果的算术平均值作为结果。9 允许差由同一分析者同时戎相继进行的两次测定结果之差不得超过其算术平均值的20%。3.1 () GO/T 96 9 5. 2 7 9 1 附加说明=本标准由中华人民共和国商业部提出。本标准由中国肉类食品综合研究中心归口.本标准由中国肉类食品综合研究中心起草。本标准主要起草人王津生、张燕婉。 341
