1、建标中华人民共和国国家标准医院污水排放标准试行群众出版社北京中华人民共和国国家标准医院污水排放标准试行主编部门中华人民共和国卫生部批准部门中华人民共和国国家经济委员会中华人民共和国卫生部试行日期年月日关于颁发医院污水排放标准的通知经基号根据原国家建委建发设字第号和卫生部卫科字第号通知的要求由卫生部会同有关单位共同编制的医院污水排放标准已经有关部门会审现批准医院污水排放标准为国家标准自一九八三年六月一日起试行本标准由卫生部负责管理其具体解释等工作由中国医学科学院卫生研究所负责国家经济委员会卫生部一九八三年一月十二日编制说明本标准是根据原国家建委建发设字号和卫生部卫科字第号文下达的制订医院污水排放
2、标准的任务由我部委托中国医学科学院卫生研究所主持会同有关省市卫生防疫站医学院校科研与建筑设计等有关单位编制而成遵循我国预防为主的卫生工作方针和中华人民共和国环境保护法试行为防止医院排放带有病原体的污水污染环境危害人体健康特制订本标准在编制过程中曾对部分省市自治区医院污水的情况进行重点调查各课题组参照国内外有关的标准文献还进行了必要的科学试验并向全国有关单位广泛征求意见经多次讨论修改由全国卫生标准技术委员会环境卫生分委员会会同有关部门审核定稿本标准分总则排放标准设计要求与管理要求等四章和附录一检验方法在试行本标准的过程中请各单位注意积累资料总结经验如发现有需要修改和补充之处请将意见和有关资料寄送
3、中国医学科学院卫生研究所并抄送我部以便修订时参考卫生部一九八三年一月目录第一章总则第二章排放标准第三章设计要求第四章管理要求附录一医院污水污泥检验方法附录二本标准用词说明第一章总则第条为贯彻预防为主的卫生工作方针和中华人民共和国环境保护法试行防止医院排放带有病原体的污水污染环境危害人体健康特制订本标准第条本标准适用于县及县以上综合医院以及肠道传染病和结核病的专科医院疗养院其它有关的医疗卫生机构以下简称医院第条新建扩建改建的医院必须按照本标准的规定将污水的处理设施与主体工程同时设计同时施工同时使用现有医院应积极采取行之有效的措施限期达到本标准的要求第二章排放标准第条医院污水经处理与消毒后应达到下
4、列标准一连续三次各取样毫升进行检验不得检出肠道致病菌和结核杆菌二总大肠菌群数每升不得大于个第条当采用氯化法消毒时接触时间和接触池出水中的余氯含量应符合表的要求接触时间与总余氯量表医院污水类别接触时间小时总余氯量毫克升综合医院污水及含肠道致病菌污水不少于含结核杆菌污水不少于第条污水处理构筑物中的污泥必须经过无害化处理污泥排放时应达到下列标准一蛔虫卵死亡率大于二粪大肠菌值不小于三每克污泥原检样中不得检出肠道致病菌和结核杆菌第条当污泥采用高温堆肥法进行无害化处理时堆肥的温度必须大于并应持续天以上第条无上下水道设备或集中式污水处理构筑物的医院对有传染性的粪便必须进行单独消毒或其它无害化处理第条医院污水
5、经处理和消毒后其所含的污染物质与有害物质的含量应符合现行的有关标准的要求第三章设计要求第条医院应设置集中式污水处理构筑物严禁采用渗井渗坑排放污水第条医院职工生活区和行政区的污水应与病区的污水分流第条医院污水处理构筑物的位置宜设在医院建筑物当地夏季最小频率风向的上风侧与周围建筑物之间宜设绿化防护地带第条处理构筑物的设计应满足下列要求一采取防腐蚀防渗漏措施二确保处理效果安全耐用三操作方便便于消毒和清掏有利于操作人员的劳动保护第条氯化法消毒系统的设计应满足下列要求一备有发生故障时的应急设施二使用液态氯时应有安全设施严禁直接以钢瓶向污水中投加氯气第四章管理要求第条医院必须对污水污泥严加管理未经消毒或无
6、害化处理不准任意排放清掏用作农肥第条医院污水处理设施应定期维修保证正常运转当处理设备发生故障时必须采取适当措施确保污水仍能按标准要求排放第条医院污水处理设施应配备管理人员和检验人员第条医院污水的监测应符合下列要求一余氯连续式消毒每日至少监测二次间歇式消毒每次排放之前监测二总大肠菌群数每两周至少监测一次三传染病和结核病医院应根据需要增测致病菌第条各级卫生防疫部门应对辖区内医院的污水污泥处理情况进行经常性卫生监督每年抽查不得少于二次第条污水污泥的检验方法应符合附录一的规定附录一医院污水污泥检验方法一污水总余氯的测定方法一原理采用碘滴定法用碘标准溶液反滴定与余氯反应后过量的硫代硫酸钠标准溶液二试剂硫
7、代硫酸钠标准溶液先配制约硫代硫酸钠溶液称取约克分析纯硫代硫酸钠溶于煮沸放冷的蒸馏水中稀释至毫升加入克氢氧化钠或克无水碳酸钠储存于棕色瓶内可保存数月标定称取克干燥的分析纯碘酸钾放于毫升锥形瓶内加入毫升蒸馏水加热溶解后加入克碘化钾和毫升冰醋酸静置分钟自滴定管加约硫代硫酸钠溶液不断振荡锥形瓶直至颜色变为淡黄色加入毫升淀粉溶液继续用硫代硫酸钠溶液滴至刚变为无色为止记录总用量如滴定完毕放置若干时间后锥形瓶内溶液因接触空气氧化又显蓝色可不必再滴定计算硫代硫酸钠溶液的当量浓度式中碘酸钾重量克硫代硫酸钠溶液的用量毫升配制硫代硫酸钠标准溶液用除去二氧化碳的蒸馏水将上面标定后的硫代硫酸钠溶液稀释碘化钾溶液溶解克分
8、析纯碘化钾于少量新煮沸放冷的蒸馏水中再稀释至毫升盛于棕色带玻璃塞瓶中最好冷藏如发现溶液颜色变黄应予重配醋酸盐缓冲液称取克无水醋酸钠或克三水醋酸钠于蒸馏水中加克冰醋酸用蒸馏水稀释至毫升碘溶液溶解克分析纯碘化钾于毫升蒸馏水中加入克分析纯碘片不断搅拌到溶解为止移入毫升容量瓶中加水至刻度混匀待标定亚砷酸钠标准溶液称取预先在干燥器内经浓硫酸干燥的分析纯三氧化二砷克于毫升烧杯中加入毫升氢氧化钠溶液搅拌使溶解注意剧毒加盐酸或硫酸中和过量的氢氧化钠直至溶液接近中性为止采用试纸将配好的亚砷酸钠溶液转入毫升容量瓶中加水稀释至刻度混匀碘溶液的标定准确量取毫升亚砷酸钠标准溶液于毫升锥形瓶内用待标定的碘溶液滴定以淀粉作
9、指示剂滴至刚显淡蓝色为终点如能在接近终点时向溶液中通入二氧化碳使之饱和可得到很准确的滴定终点碘标准溶液将克分析纯碘化钾放入毫升容量瓶中加入少量蒸馏水使之溶解准确加入标定后的碘标准溶液用蒸馏水稀释至刻度所需加入标定后的碘标准溶液的体积按下式计算式中标定后的碘标准溶液的毫升数标定后的碘标准溶液的当量浓度配制碘标准溶液的体积为毫升配制的碘标准溶液的当量浓度为为了测定更准确最好每天用亚砷酸钠标准溶液按上述操作标定一次预计用去毫升亚砷酸钠溶液即可此溶液应盛于棕色玻璃磨口瓶中存放时避免阳光直射不可接触橡胶制品淀粉溶液称取克可溶性淀粉于毫升烧杯内加少量蒸馏水调成糊状加入刚煮沸的蒸馏水毫升冷却后加入克水杨酸作
10、保存剂三步骤污水水样中余氯小于毫克升时取毫升污水样余氯多时应按比例减少水样体积将毫升污水样加入毫升锥形瓶中加入毫升硫代硫酸钠标准溶液毫升碘化钾溶液和毫升醋酸盐缓冲液使保持在之间用碘标准溶液滴定接近终点前加入毫升淀粉溶液滴至刚显淡蓝色为终点混匀后蓝色不应消失把最后滴碘液的体积约为毫升从读数中减去毫升污水样消耗毫升硫代硫酸钠溶液时相当于存在毫克升余氯故余氯在毫克升时需用毫升试剂余氯在毫克升时应加入毫升试剂污水中余氯更高时就按比例增加试剂碘滴定法测得的余氯为总余氯并按下式计算毫克升式中总余氯毫克升硫代硫酸钠标准溶液的毫升数碘标准溶液的毫升数污水样毫升数二污水总大肠菌群的检验方法一采样方法用采水器或其
11、他灭菌容器采取污水样毫升放入灭菌瓶内如果是经加氯处理的污水需加硫代硫酸钠毫升中和余氯二检验方法总大肠菌群系指一群需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌在恒温箱内培养小时能使乳糖发酵产酸产气总大肠菌群数系指每升污水中所含的总大肠菌群的数目一初发酵试验以无菌操作将各盛有倍浓缩乳糖蛋白胨培养液毫升的支发酵管内各接种污水样毫升将各盛有单料乳糖蛋白胨培养液约毫升支的发酵管内各接种污水样毫升再将各盛有单料乳糖蛋白脏培养液约毫升的支发酵管内各接种稀释的污水样毫升相当于原污水样毫升将此支管已接种的发酵管置于恒温箱内培养小时二平板分离经培养小时后将产酸产气及只产酸不产气的发酵管分别接种于伊红美兰培养基或品红亚硫酸
12、钠培养基上置恒温箱培养小时挑选符合下列特征的菌落取菌落的一小部分进行涂片革兰氏染色镜检伊红美兰培养基上的菌落色泽深紫黑色具有金属光泽的菌落紫黑色不带或略带金属光泽的菌落淡紫红色中心色较深的菌落品红亚硫酸钠培养基上的菌落色泽紫红色具有金属光泽的菌落深红色不带或略带金属光泽的菌落淡红色中心色较深的菌落三复发酵试验涂片镜检的菌落如为革兰氏阴性无芽孢杆菌则挑取上述典型菌落个接种于一支单料乳糖发酵管内然后置于恒温箱内培养小时产酸产气者包括小量产气即证实有大肠菌群存在根据证实有大肠菌群存在的阳性管数查对总大肠菌群近似数检索表附表即是每升污水中的大肠菌群数此表中所列数值系指毫升水样中的细菌数因此需将表中的数
13、值再乘为每毫升水中的细菌数举例某一污水样接种毫升的支管中有管为阳性接种毫升的支管中有管为阳性接种稀释水样毫升即原污水样毫升的支管皆为阴性即结果为查附表得知毫升污水中总大肠菌群数为个即毫升污水中总大肠菌群数为个总大肠菌群近似数检索表附表总接种量毫升其中份毫升水样份毫升水样份毫升水样接种量毫升每毫升水样中总大肠菌群近似数接种量毫升每毫升水样中总大肠菌群近似数续表接种量毫升每毫升水样中总大肠菌群近似数接种量毫升每毫升水样中总大肠菌群近似数续表接种量毫升每毫升水样中总大肠菌群近似数接种量毫升每毫升水样中总大肠菌群近似数续表接种量毫升每毫升水样中总大肠菌群近似数接种量毫升每毫升水样中总大肠菌群近似数续表
14、接种量毫升每毫升水样中总大肠菌群近似数接种量毫升每毫升水样中总大肠菌群近似数三沙门氏菌属和志贺氏菌属的检验方法甲污水一样品处理水样毫升加入灭菌的无水碳酸钠溶液毫升混合后再加入灭菌的硫酸铁溶液毫升混合均匀静置小时倾去上清液沉淀物约为毫升左右进行沙门氏菌属和志贺氏菌属培养二增菌培养沙门氏菌属吸取样品处理后的沉淀物毫升加于毫升双料亚硒酸盐增菌液内也可加于亚硒酸盐甘露醇或氯化镁孔雀绿增菌液内置于或恒温箱培养小时志贺氏菌属吸取样品处理后的沉淀物毫升加于毫升双料革兰氏阴性增菌液内置于恒温箱培养小时三平板分离沙门氏菌属取上述经培养的沙门氏菌用增菌培养液接种沙门氏菌属志贺氏菌属平板或海克托因简称平板置于恒温箱
15、培养小时也可接种亚硫酸铋平板置于恒温箱培养小时志贺氏菌属取上述经培养的志贺氏菌用增菌培养液接种平板或平板置于恒温箱培养小时四挑选菌落沙门氏菌属挑取在平板上呈无色透明或中间有黑心直径毫米的菌落挑取在平板上呈蓝绿色有或无黑心直径毫米的菌落挑取在平板上呈黑色培养基周围具有金属光泽的菌落志贺氏菌属挑取在平板上呈无色透明直径毫米的菌落挑取在平板上呈绿色的菌落每个平板最少挑取个以上可疑肠道病原菌菌落转种三糖铁或其他鉴别培养基中置于恒温箱培养小时五生化试验及血清学检验沙门氏菌属在三糖铁培养基中如不发酵乳糖葡萄糖产酸产气或只产酸不产气一般产生硫化氢有动力者先与沙门氏菌群多价血清作玻璃片凝集凡与多价血清凝集者再
16、与因子血清凝集以确定其所属群别然后用因子血清确定血清型双相菌株应证实两相的抗原有抗原的菌型伤寒和丙型副伤寒沙门氏菌应用因子血清检查生化试验应进行葡萄糖甘露醇麦芽糖乳糖蔗糖靛基质硫化氢动力尿素试验沙门氏菌属中除伤寒沙门氏菌和鸡沙门氏菌不产气外通常发酵葡萄糖产气均发酵甘露醇和麦芽糖但猪伤寒沙门氏菌雏沙门氏菌不发酵麦芽糖不分解乳糖蔗糖尿素酶和靛基质为阴性通常产生硫代氢除鸡雏沙门氏菌和伤寒沙门氏菌的型菌株无动力外通常均有动力如遇多价血清不凝集而一般生化反应符合上述情况时可加做侧金盏花醇水杨素和氰化钾试验沙门氏菌均为阴性志贺氏菌属在三糖铁培养基上葡萄糖产酸不产气无动力不产生硫化氢上层斜面乳糖不分解生化试
17、验应进行葡萄糖甘露醇麦芽糖乳糖蔗糖靛基质硫化氢动力尿素试验志贺氏菌属能分解葡萄糖但不产气福氏志贺氏菌型有时产生少量气体一般不能分解乳糖及蔗糖宋内氏志贺氏菌对乳糖及蔗糖迟缓发酵产酸志贺氏菌属均不产生硫化氢不分解尿素无动力对甘露醇麦芽糖的发酵及靛基质的产生则因菌株不同而异如遇多价血清玻璃片凝集试验为阴性而生化反应符合上述情况时可加做肌醇水杨素枸橼酸盐氰化钾等试验志贺氏菌属均为阴性反应血清学检查志贺氏菌属分为个群先与多价血清作玻璃片凝集试验如为阳性再分别与群血清凝集并进一步与分型血清做玻璃片凝集最后确定其血清型乙污泥一样品处理用灭菌匙称取污泥克放入灭菌容器内加入毫升灭菌水充分混匀制成混悬液二增菌培养
18、沙门氏菌属吸取上述混悬液毫升加于毫升双料亚硒酸盐增菌液内也可加于亚硒酸盐甘露醇或氯化镁孔雀绿增菌液内置于或恒温箱培养小时志贺氏菌属吸取上述混悬液毫升加于双料革兰氏阴性毫升增菌液内置于恒温箱培养小时三平板分离挑选菌落生化试验及血清学检查均与污水样品检验方法相同四污泥粪大肠菌值的检验方法一初发酵试验按图所示将污泥稀释分别将污泥样品接种于装有毫升乳糖胆盐培养液的内有倒管的试管中再将已接种的四支试管置于恒温箱培养小时图污泥的稀释和接种示意图二平板分离经培养小时后产酸产气及只产酸不产气的发酵管分别划线接种于伊红美兰培养基或品红亚硫酸钠培养基上置于恒温箱培养小时挑选符合下列特征菌落的一小部分进行涂片革兰氏
19、染色镜检伊红美兰培养基上的菌落色泽深紫黑色具有金属光泽的菌落紫黑色不带或略带金属光泽的菌落淡紫红色中心色较深的菌落品红亚硫酸钠培养基上的菌落色泽紫红色具有金属光泽的菌落深红色不带或略带金属光泽菌落淡红色中心色较深的菌落三复发酵试验上述涂片镜检的菌落如为革兰氏阴性无芽孢杆菌则挑取该菌落的另一部分再接种于内有倒管的乳糖发酵管中每管可接种分离自同一初发酵管的最典型的菌落个置于恒温箱培养小时有产酸产气者即证实有粪大肠菌群存在按阳性管数查粪大肠菌值检索表附表即得出每升克粪大肠菌值例如接种污泥量克发酵管阳性毫升发酵管阴性毫升为阳性毫升为阴性查附表当阳性阴性管数为时粪大肠菌值为粪大肠菌值检索表接种总量克附表
20、接种样品量毫升或克类大肠菌菌值五污泥蛔虫卵的检验方法一污泥样品的采集先把泥堆尽量划为四等份而后在每份的中间用铁锹或小铲各采污泥约克同时在堆泥的中间也采克一并放在塑料桶或搪瓷桶中搅拌均匀并挑去固体夹杂物再从中取出克置于塑料袋或其他容器中带回实验室二污泥样品的处理将现场带回的样品倒于烧杯中如遇样品稍干且有结块时可将其倒于搪瓷盘中再行搅拌同时用大镊子一面搅拌一面将硬块夹碎去掉肉眼能看出的夹杂物如腐烂的布条草梗小石块等然后将样品装入广口瓶中贴上标签标明样品号码医院名称采样日期和处理前或处理后的情况等三污泥样品的检验上述样品处理后应立即进行检验不能立即进行检验时可适当加入约毫升福尔马林溶液或盐酸溶液瓶口
21、上放置一个适宜大小的表面皿然后放于冰箱内以防微生物的繁殖和抑制蛔虫卵的发育水洗从已经处理过的克污泥样品中称取克置于毫升锥形量杯中加水约毫升用玻璃棒搅拌后静置之让其自然沉淀经小时后倒去污泥上面的水另换清水搅拌后再让其自然沉淀经半小时后再倒去上面的水另加清水如此反复进行次直到污泥上面的水接近无色为止过滤倒去沉淀上面的清水用孔口寸金属筛子过滤于另一毫升锥形量杯中弃去阻留在筛上的泥渣沉淀分钟后倒去沉淀上面的液体另加清水如此反复水洗次最后倒去上清液将沉淀物倒入毫升离心管中经转分离心分钟后倒去上清液离心飘浮管内注入饱和食盐水经用玻璃棒搅匀后离心分钟由于蛔虫卵比饱和盐水的比重小所以管中绝大多数的蛔虫卵均浮聚
22、在液面注意加入食盐水量不得少于沉淀物的倍离心沉淀用毛细吸管反复吸取管中斜面上的浮膜于另一离心管中加入清水经搅匀后再行离心虫卵比水的比重大因而下沉于管底然后小心倒去上清液培养注入毫升清水于管中加几滴福尔马林溶液置于恒温箱中培养天在培养过程中清水不得少于毫升镜检样品经培养天后取出用毛细吸管吸去上面的清水余下含虫卵的沉淀物在一张干净的载玻片的中央滴一滴清水用毛细吸管吸一小滴沉淀物于水中涂匀后盖以盖玻片在低倍镜下检查必要时再换以高倍镜记录个以上死活虫卵数查完一张片子而卵数不及个时依同法作第二张涂片检查涂片不宜太厚否则视野模糊不清影响观察一般涂片厚度能以透过涂片尚能辩认报纸上的字迹为宜而后在适宜的温度和
23、湿度下经过天的培育活蛔虫卵就会逐渐发育到幼虫期而死卵则在同一条件下仍然保持单细胞期或停留于某一发育阶段故易于区别镜检时为达到较为快速而明显地辨认幼虫起见可在载玻片上的滴一滴预先配好避光保存的次氯酸钠溶液商品名为安替福明以代替清水作成涂片置于显微镜下观察可以看见被包在卵的最外层的蛋白质壳逐渐溶解使卵内的幼虫一目了然因此亦称此液为脱壳液如遇沉淀物中渣子较多卵数较少时可以直接注入几滴此脱壳液于离心管中与沉淀物混合并搅匀之而后吸一滴混合液于载玻片上盖以盖玻片直接镜检即可此时视野格外清晰在培养第天未查见幼虫时应继续培养到天注意加过脱壳液的样品不能再继续培养最后就个以上的死活蛔虫卵数求出死卵的百分率如此检
24、验的全过程已告结束可从冰箱中取出剩余的样品处理之六结核杆菌的检验方法甲污水一集菌根据检验室条件可以选用滤膜集菌法或离心集菌法滤膜集菌法采用经煮沸消毒的醋酸纤维膜孔径微米和特制的金属滤器安装严密后抽滤污水样毫升根据悬浮物的多少一份水样需更换数张滤膜将同一份水样滤膜集中于小烧杯内用硫酸溶液反复冲洗处置分钟后收集洗液于离心管中转分钟离心弃去上清液沉淀物中加毫升灭菌生理盐水混合均匀后供接种用离心集菌法水样毫升分装于毫升或毫升灭菌离心管中转分钟离心同一份水样的沉淀物集中于试管内加等量硫酸处理分钟供接种用如体积过大再次离心浓缩后接种二接种上述集菌液全部接种于改良罗氏培养基或接种于小川氏培基上每支培养管接种
25、毫升三培养置恒温培养箱培养周周后开始观察结果每周观察次分离菌株罗氏培养基上呈淡黄色或无色粗糙型菌落作抗酸染色阳性者作分离传代菌型鉴别分离传代菌株如生长速度在二周以上则需作菌型鉴别应用耐热触酶试验和传代培养于培养箱周观察是否生长用此两种方法即可进行初步鉴别四致病力试验耐热触酶反应阴性不生长之菌落为可疑结核杆菌于小白鼠尾静脉接种毫克菌量毫克升菌液每只动物接种毫升死亡时观察病变或周后解剖脏器发现典型结核病变者可确认为检出结核杆菌其耐热触酶试验方法如下一材料磷酸缓冲液吐温水溶液加等量二方法取菌落毫克分散于毫升磷酸盐缓冲液中置水浴中分钟冷却后加吐温和混合液毫升三结果发生气泡为阳性分钟不产生气泡者为阴性人
26、型牛型结核杆菌胃分枝杆菌和海鱼分枝杆菌为阴性其它非典型抗酸菌和非致病抗酸菌为阳性人型牛型结核杆菌在培养不生长胃分枝杆菌和海鱼分枝杆菌在培养能生长乙污泥一样品处理取污泥克加毫升蒸馏水冲洗过滤滤纸漏斗再经玻璃漏斗孔径微米和孔径微米抽滤最后再经滤膜孔径微米抽滤取下滤膜用硫酸毫升充分振摇冲洗分钟然后将此酸性菌液以毫升分别接种于改良罗氏培养基或小川式培养基置于恒温箱培养周周后开始观察结果每周观察二次二集菌滤膜集菌法取污泥克加毫升蒸馏水混摇均匀成为混悬液其后的操作步骤同污水离心集菌法取上述混悬液分装于灭菌离心管中转分分钟离心操作步骤同污水关于培养基的制备接种培养以及致病力试验等均与污水的检验方法相同七培养
27、基的制备乳糖蛋白胨培养液成分蛋白胨克牛肉膏克乳糖克氯化钠克溴甲酚紫乙醇溶液毫升蒸馏水毫升制法将蛋白胨牛肉膏乳糖及氯化钠加热溶解于毫升蒸馏水中调整为加入溴甲酚紫乙醇溶液毫升充分混匀分装于有倒管的试管中置于高压蒸气灭菌器中以灭菌分钟贮存于冷暗处备用二三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液按上述乳糖蛋白胨培养液浓缩倍配制三品红亚硫酸钠培养基成分蛋白胨克乳糖克磷酸氢二钾克琼脂克蒸馏水毫升无水亚硫酸钠克左右碱性品红乙醇溶液毫升储备培养基的制备先将琼脂加到毫升蒸馏水中加热溶解然后加入磷酸氢二钾及蛋白胨混匀使溶解再以蒸馏水补足至毫升调整为趁热用脱脂棉或绒布过滤再加入乳糖混匀后定量分装于烧瓶内置于高压蒸气灭菌器中以灭菌分钟
28、贮存于冷暗处备用平皿培养基的制备将上法制备的储备培养基加热溶化根据烧瓶内培养基的容量用灭菌吸管按比例吸取一定量的碱性品红乙醇溶液置于灭菌空试管中根据烧瓶内培养基的容量按比例称取所需要的无水亚硫酸钠置于灭菌空试管内加灭菌水少许使溶解再置于水浴中煮沸分钟用灭菌吸管吸取已灭菌的亚硫酸钠溶液滴加于碱性品红乙醇溶液内由深红色褪成淡粉色为止将此亚硫酸钠与碱性品红的混合液全部加于已融化的储备培养基内并充分混匀防止产生气泡立即将此种培养基适量倾入于已灭菌的空平皿内待其冷却凝固后置冰箱内备用此种已制成的培养基于冰箱内保存亦不宜超过二周如培养基已由淡红色变成深红色则不能再用四伊红美兰培养基成分蛋白胨克乳糖克磷酸氢
29、二钾克琼脂克蒸馏水毫升伊红水溶液毫升美兰水溶液毫升储备培养基的制备先将琼脂加至毫升蒸馏水中加热溶解然后加入磷酸氢二钾及蛋白胨混匀使溶解再以蒸馏水补足至毫升调正为趁热用脱脂棉或绒布过滤再加入乳糖混匀后定量分装于烧瓶内置于高压蒸气灭菌器内以灭菌分钟贮存于冷暗处备用平皿培养基的配制将已制备的培养基加热融化根据烧瓶内培养基的容量用灭菌吸管按比例分别取一定量已灭菌的伊红水溶液及一定量已灭菌的美兰水溶液加入已融化的储备琼脂内并充分混匀防止产生气泡立即将此种培养基适量倾入于已灭菌的空平皿内待其冷却凝固后置冰箱内备用五亚硒酸盐增菌液成分胰蛋白胨或多价胨克磷酸氢二钠克磷酸二氢钠克乳糖克亚硒酸氢钠克蒸馏水毫升制法
30、除亚硒酸氢钠外将以上各成分放于蒸馏水中加热溶化再加入亚硒酸氢钠待完全溶解后调整为分装于阿诺氏器中灭菌分钟备用六亚硒酸盐甘露醇增菌液成分亚硒酸氢钠克磷酸氢二钠克磷酸二氢钠克甘露醇克胰蛋白胨或多价胨克蒸馏水毫升制法与亚硒酸盐增菌液配制方法相同七氯化镁孔雀绿增菌液成分甲液胰蛋白胨或多价胨克氯化钠克磷酸二氢钾克蒸馏水毫升乙液氯化镁克蒸馏水毫升丙液孔雀绿水溶液制法用上述配制的甲液毫升乙液毫升丙液毫升混合分装分钟高压灭菌分钟八革兰氏阴性增菌液成分胰蛋白陈或多价胨克葡萄糖克甘露醇克枸橼酸钠克去氧胆酸钠克磷酸氢二钾克磷酸二氢钾克氯化钠克蒸馏水毫升制法将以上各成分加入蒸馏水中溶化用磷酸氢二钾调整至煮沸过滤高压灭
31、菌分钟贮存于冷暗处备用双料增菌液配制除蒸馏水改为毫升外其他成分不变九沙门氏志贺氏菌属琼脂培养基十海克托因肠道简称琼脂培养基成分乳糖克蔗糖克水杨素克胆盐克氯化钠克蛋白胨克牛肉膏克琼脂克蒸馏水毫升溶液制备溶液甲枸橼酸铁铵克硫代硫酸钠克蒸馏水毫升溶液乙去氧胆酸钠克蒸馏水毫升安氏指示剂成分酸性复红克蒸馏水毫升氢氧化钠毫升制法将酸性复红溶解于蒸馏水中加入氢氧化钠溶液数小时后如复红退色不够可再加毫升氢氧化钠液不同牌号的酸性复红其色素含量相差很大此试剂保存时间长效果更好制法将培养基的调整至煮沸不完全溶解然后加入溶液甲与溶液乙各毫升重新调整至加入溴麝香草酚兰乙醇溶液毫升和安示指示剂毫升此培养基不需高压灭菌经煮
32、沸灭菌后即可倾注平板备用十一亚硫酸铋琼脂培养基成分牛肉膏克蛋白胨克葡萄糖克磷酸氢二钠克硫酸亚铁克亚硫酸铋指示剂毫升琼脂克煌绿克蒸馏水毫克亚硫酸铋指示剂制备亚硫酸钠克加入毫升水中使之溶解另取枸橼酸铋铵克加入毫升水中使之溶解再将二者混合加热煮沸分钟即成乳白色冷却备用制法将牛肉膏蛋白胨葡萄糖磷酸氢二钠溶解于蒸馏水中溶化后加入琼脂溶解再加入硫酸铁混匀冷却至再加入亚硫酸铋指示剂混匀后再加入煌绿此时煌绿颜色消失制备平板供用十二乳糖胆盐培养基成分乳糖克胆白胨克猪胆盐或牛胆盐克溴甲酚紫酒精溶液毫升蒸馏水毫升制法将蛋白胨胆盐及乳糖溶于水中调剪至加入指示剂分装于试管每管毫升并放一个小倒管高压分钟三倍浓缩培养液除蒸
33、馏水外其他成分均为三倍制法同上该培养基用于污泥中粪大肠菌群初发酵检验复发酵乳糖发酵管与污水总大肠菌群复发酵乳糖发酵管相同十三改良罗氏培养基成分磷酸二氢钾克硫酸镁克枸橼酸镁克味精克甘油毫升淀粉克蒸馏水毫升鸡蛋包括蛋清和蛋黄毫升孔雀绿毫升制法将磷酸二氢钾枸橼酸镁味精甘油及蒸馏水混合于烧杯内放在沸水浴中加热溶解加入淀粉继续加热一小时摇动使其溶解待冷却至加入蛋液及孔雀绿溶解充分混匀置成斜面保持温度一小时灭菌十四小川氏培养基成分甲液无水磷酸二氢钾克味精克蒸馏水毫升乙液全蛋液毫升甘油毫升孔雀绿毫升制法甲乙两液混合分装试管内置成斜面保持温度一小时灭菌附录二本标准用词说明一执行本标准条文时要求严格程度的用词说明如下以便在执行中区别对待表示很严格非这样作不可的用词正面词采用必须反面词采用严禁表示严格在正常情况下均应这样作的用词正面词采用应反面词采用不应或不得表示允许稍有选择在条件许可时首先应这样作的用词正面词采用宜或可反面词采用不宜二条文中应按其他有关标准规范执行的写法为应按执行或应符合的规定非必须按所指定的标准规范或其他规定执行的写法为可参照
