1、ICS 67.050 NY 中华人民共和国农业行业标准NY/T 1158一2006动物性食品中甲硝睡残留的检测方法高效液相色谱法Method for determination of metronidazole residues in animal derived food High performance Iiquid chromatography 06101 P. J00052 2006一07-10发布2006 -10-01实施中华人民共和国农业部发布前言本标准附录A、附录B为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。本标准起草单位:华中农业大学、湖北省医药工业研究院有限公司。本
2、标准主要起草人:王大菊、刘书庆、邱银生、艾霞。NY /T 1158-2006 1 范围动物性食品中甲硝睡残留的检测方法高效液相色谱法NY/T 1158一2006本标准规定了动物性食品中甲硝略残留量检测的制样和高效液相色谱测定方法。本标准适用于猪和鸡肌肉、肝脏、肾脏、脂肪组织中甲硝唾残留量检测。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBf 6682-1992 分析实
3、验室用水规则和试验方法3 制样3. 1 样晶的制备取适量新鲜或冷冻的空白或供试组织，剪碎，10 000 r /min匀浆。3.2 样晶的保存20C以下冰箱中贮存备用。4 测定方法4.1 方法提要或原理试料中残留的甲硝瞠经乙腊提取，SiC)z固相柱净化，高效液相色谱紫外检测法测定，外标法定量。4.2 试剂和材料以下所用试剂，除特别注明外，均为分析纯试剂，水为符合GBf6682-1992规定的二级水。4.2.1 甲硝睡对照品含甲硝瞠(4，H9N3.3)不得少于99.0%4.2.2乙腊色谱纯4.2.3甲醇色谱纯4.2.4 乙酸乙醋色谱纯或重蒸锢4.2.5 正己皖4.2.6 二乙股4.2.7 磷酸4.
4、2.8 无水碗酸铀4.2.9 磷酸溶液取85%磷酸(H3P04)1.2mL，加水稀释，用二乙胶约1.5mL，调pH至3.03.2，用水定容至1000mL。4.2.10 乙酸Z.旨-甲醇溶液(88+ 12) NY /T 1158-2006 4.2.11 正己炕-z酸Z醋溶液(100+ 50) 4.2.12 甲硝瞠标准储备液准确称取甲硝瞠对照品50mg，用甲醇溶解，并稀释成浓度为0.5mg/mL的标准储备液，-20C冰箱中保存，有效期3个月。4.2.13 甲硝睡标准工作液准确量取适量甲硝瞠标准储备液，用流动相稀释成浓度分别为0.01250.025、0.05、0.1、1.0、10问/mL的标准工作液
5、，供高效液相色谱分析。4.3 仪器和设备4.3.1 高效液相色谱仪(配紫外检测器)4.3.2 固相萃取柱Si乌柱500 mg/5mL 4.3.3 微量进样器4.3.4分析天平感量0.00001g 4.3.5天平感量0.01g 4.3.6 组织匀浆机4.3.7 滥涡混合器4.3.8 旋转蒸发仪4.3.9 超声清洗机4.3.10 离心机4.3.11 电热恒温水浴锅4.3.12 鸡心瓶4.3.13 具塞聚丙烯离心管4.4 测定步骤4.4.1 试料的制备试料的制备包括:一-取匀浆的供试样品，作为供试试料。一-取匀浆的空白样品，作为空白试料。一-取匀浆的空白样品，添加适宜浓度的标准溶液作为空白添加试料。
6、4.4.2 提取称取肌肉和肾脏试料(5:!:0.1)g置50mL具塞聚丙烯离心管中，加乙睛20mL、正己烧10mL，被涡混合5min，静置，3000r/min离心10min，弃去正己烧层;取乙睛层加元水硫酸饷10g，充分震荡，静置，3000r/min离心10min，取上清液至鸡心瓶中，置40C45C水浴中旋转蒸发至干，残余物用正己皖F乙酸乙醋溶液5mL溶解，用正己皖乙酸乙醋溶液5mL分两次洗涤鸡，心瓶，合并两次溶液，备用。称取脂肪试料(5g:!:0.1)g置50mL具塞聚丙烯离心管中，加乙脂20mL、正己烧10mL，游涡混合5min，静置，3000r/min离心10min，弃去正己烧层;取乙腊
7、层加元水硫酸纳10g，充分震荡，静置，3000r/min离心lOmi口，取上清液至鸡心瓶中，置40C45C水浴中旋转蒸发至于，残余物用正己烧-乙酸乙醋榕液5mL溶解，合并两次溶液，40C45C水浴旋转氮气吹干。用流动相0.5mL溶解残余物，充分震荡后，供HPLC分析。称取肝脏试料(10.0士0.1g)置于50ml聚丙烯离心管中，加入乙酸乙醋20mL，游涡据合5min，3000 r/min离心10min，取上清液于旋转蒸发瓶中。加元水硫酸铀lOg，充分震荡，静置，3000r/min离心10min，取上清液至鸡心瓶中，置40C45C水浴中旋转蒸发至干，残余物用正己烧-乙酸乙醋溶液5mL溶解，用正己
8、烧乙酸乙醋溶液5mL洗涤鸡心瓶，合并两次溶液，备用。2 NY /T 1158-2006 4.4.3 净化将Si固相柱依次用甲醇5mL、乙酸乙醋-甲醇溶液15mL、乙酸乙醋溶液lOmL和正己烧-乙酸乙醋溶液lOmL预洗，真空抽干。取备用液过Si乌柱，自然流出，弃去流出液，抽干。用正己皖-乙酸乙醋溶液4mL洗柱，真空抽干。再用乙酸乙醋-甲醇溶液6mL洗脱，收集洗脱液至10mL离心管中，于40C 45C水浴氮气吹干，加流动相O.2mL溶解残余物，供HPLC分析。4.4.4 jJ!g定4.4.4.1 色谱条件色谱柱:Hypersil-Ct8 250 mm x 4.6 mm( i. d) ，粒径5m或1
9、0m。流动相:pH3.2磷酸溶液-乙腊-甲醇(850十112+ 38)或pH3. 0 (920 + 50 + 30 )。检测波长:325 nmo 柱温:室温。流速:0.9或0.8mL/min。进样量:20L。4.4.4.2 液相色谱测定根据试样溶液中甲硝略的含量，选择响应值相近的标准工作液，等体积参插测定，以色谱峰面积积分值定量。标准工作液及试样溶液中甲硝瞠的响应值均应在仪器测定的线性范围之内。在上述色谱条件下，甲硝瞠色谱峰参考保留时间分别为7.8min和9.5min，标准溶液和试样溶液的液相色谱图见附录Ao4.4.5 空白试验除不加试料外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。4.5 结果计算
10、与表述按式(1)计算试样中甲硝瞠的残留量(glkg): Cs.A.V X=-;:-. , . (1) 式中:X一一试料中甲硝哩的残留量(glkg); Cs一一标准工作液中甲硝略的浓度(g/mL); A一一试样榕液中甲硝略的峰面积;As.M V一一浓缩至于后，溶解残余物所用流动相的总体积(mL);As一一标准工作液中甲硝略的峰面积;M一一组织样品的质量(g)。注:十算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留至小数点后2位。5 检测方法灵敏度、准确度、精密度5.1 灵敏度本方法在猪和鸡的肌肉、肝脏、肾脏、脂肪组织中的检测限为1glkg。5.2 准确度本方法在1glkg、2fLgl
11、kg和4glkg添加浓度的回收率为50%70%。5.3 精密度本方法的批内和批间变异系数均为CV o.2 AUT HV 0.000 5.00 10.00 15.00 圈A.2.5猪的空白肝脏组织中甲硝睡色谱固(1glkg)Minutes NY/T 1158-2006 7 NY /T 1158-2006 动物猪鸡复核试验室内窒间8 附录B(资料性附录)回收率表B.l猪鸡组织样品中甲硝睡的回收率(%)药物浓度(闻公g)组织1 2 肌肉64.6 :t 2.2 68.6 :t 2.7 肝脏61.3士5.960.9士4.3肾脏57.1士3.355.3 :t 2.4 脂肪60. l:t3.5 57.8士3
12、.3肌肉61.5士3.354.4 :t 4.2 肝脏59.31 1.8 58.3 :t 2.1 肾脏54.4 :t 4.6 55.8 :t 2.1 脂肪59.5士3.960.0 :t 3.6 表B.2复核试验猪组织样晶中甲硝瞠的回收率(%) 药物浓度(glkg)组织1 2 肌肉66.4 :t 11.0 69.2 :t 11.0 肝脏59.3士5.561.8士4.9肾脏63.2士5.464.2士4.8脂肪65.9 :t 8.3 67.5士5.8肌肉84.5 :t 22.5 69.9士18.24 69.3士1.958.6 :t 2.7 55.9士3.353.4士2.555.7 :t 1. 9 55
13、.8土2.457.5 :t 1. 1 60.3 :t 2.4 4 70.6 :t 10.6 63.6 :t 4.7 66.213.7 69.0 :t 7.0 71.4士10.7CON-BFF HMZ 中华人民共和国农业行业标准动物性食品中甲硝睡残留的检测方法高效液相色谱法NY /T 1158-2006 中国农业出版社出版(北京市朝阳区麦子店街18号楼)关并争等(邮政编码:100026 网址:) 中国农业出版社印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经销字数10千字2006年9月北京第1次印刷印数:1 500册定价:12.00元争夺争毛争奇印张1开本880mmx1230mm 1/16 2006年9月第1版书号:16109. 767 版权专有僵权必究举报电话:(010) 65005894 NY厅11
