1、ICS 65. 160 X 87 运B和国国家标准11: -、中华人民G/T 13595-2004 代替GB/T13595-1992、GB/T13597-1992和GB/T13598-1992 烟草及烟草制品拟除虫菊醋杀虫剂、有机磷杀虫剂、含氮农药残留量的测定Tobacco and tobacco products-Determination of pyrethroids, organophosphorus and nitrogen-containing pesticides residues 2004-12-14发布中华人民共和国国家质量监督检验检瘦总局中国国家标准化管理委员会2005-03
2、-01实施发布GB/T 13595一2004前言本标准参考德国食品中农药残留量通用检测方法(S19)制定。本标准代替GBjT13595-1992(烟叶中拟除虫菊醋杀虫剂残留量的测定方法、GBjT13597一1992(烟叶中有机磷杀虫剂残留量的测定方法和GBjT13598-1992(烟叶中含氮农药残留量的测定方法。本标准与GBjT13595-1992、GBjT13597-1992和GBjT13598-1992相比主要变化如下:一一删除GBjT13595-1992、GBjT13597一1992和GBjT13598一1992的主题内容与适用范围(1992年版的第1章); 增加了范围;删除GBjT13
3、595-1992、GBjT13597-1992和GBjT13598-1992的取样(1992年版的第2章h一一增加了规范性引用文件;一一删除GBjT13595-1992 , GBjT 13597-1992和GBjT13598-1992的测定(1992年版的第3章); 一一一增加了原理;一一增加了试剂与材料;一一增加了仪器;一一增加了采样与试样制备气一增加了分析步骤气删除GBjT13595-1992、GBjT135971992和GBjT13598-1992的结果表示(1992年版的第4章); 一一增加了结果计算;删除GBjT13595-1992、GBjT13597-1992和GBjT13598-
4、1992的检验报告(1992年版的第5章h一一增加了精密度;一一一增加了附录A色谱图示例。本标准的附录A是资料性附录。本标准由国家烟草专卖局提出。本标准由全国烟草标准化技术委员会(TC144)归口。本标准起草单位:国家烟草质量监督检验中心。本标准主要起草人:张威、唐纲岭、朱永平、李国政、吴雪芹、谭兰兰、岳勇、刘惠民。本标准所代替标准的历次版本发布情况为:GBjT 13595一1992、GBjT13597一1992和GBjT13598-1992。I 1 范围烟草及烟草制品拟除虫菊醋杀虫剂、有机磷杀虫剂、含氮农药残留量的测定GB/T 13595一2004本标准规定了烟草及烟草制品中高效氯氟氧菊醋、
5、氟氯氟菊醋、氯氧菊醋、氧戊菊醋、澳氧菊醋、克百戚、甲荼威、二嚓磷、甲基对硫磷、毒死蝉、马拉硫磷、杀蟆硫磷、对硫磷、倍硫磷、甲胶磷、速灭磷、久效磷、甲霜灵、磷胶、氟节胶、仲丁灵、异丙乐灵、二甲戊灵23种农药残留量的测定方法。本标准适用于烟草及烟草制品。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 5606.1卷烟第1部分:抽样GB/T 19616 烟草成批原料取样
6、的一般原则(GB/T19616-2004 , ISO 4874:2000 , MOD) YC/T 31 烟草及烟草制品试样的制备和水分测定烘箱法(YC/T31-1996 , ISO 2881:1992 , eqv) 3 原理用丙酣提取烟草中的农药残留，用乙酸乙醋和环己烧进行液-液分配，凝胶渗透色谱和硅胶柱层析净化，气相色谱法或气相色谱质谱法测定。4 试荆与材料水应为蒸馆水或同等纯度的水。所有试剂应适用于农药残留量分析。所有溶剂应依照与样品测定(萃取和测定)相同的程序做空白试验以检查其纯度，榕剂色谱图的基线上应没有明显会影响农药残留测定的峰出现。4. 1 农药标准品:高效氯氟氧菊醋、氟氯霞菊醋、
7、氯氯菊醋、氧戊菊醋、澳氧菊醋、克百威、甲荼威、二嗦磷、甲基对硫磷、毒死蝉、马拉硫磷、杀蟆硫磷、对硫磷、倍硫磷、甲胶磷、速灭磷、久效磷、甲霜灵、磷胶、氟节胶、仲丁灵、异丙乐灵、二甲戊灵。4.2 氯化锅，分析纯。4.3 元水硫酸铀，分析纯(5500C干燥至少2h)。4.4 棍合盐，氯化铀=硫酸纳为1: l(质量分数)。4.5 石英棉，经硅炕化处理。4.6 丙酬，需重蒸井验证。4. 7 环己烧，需重蒸并验证。4.8 乙酸乙醋，需重蒸并验证。4.9 凝胶渗透色谱(GPC)流动相，乙酸乙醋z环己烧为1: 1 (体积分数)，或二者的共沸蒸榴物。4. 10 聚苯乙烯，38m74m，建议使用Bio-Beads
8、 S-X3。GB/T 13595-2004 4. 11 正己饶，需重蒸并验证。4. 12 异辛炕，需w:蒸并验证。4. 13 甲苯，需重蒸并验证。4. 14 趾胶.用1.5%的水脱活。将61/-Lm250m的砖胶在130.C温度下烘干至少5h.在干燥器中冷却至室温后，转移至250mL 具塞豆角版巾。每98.5g硅胶加入1.5g水，边加边持续摇动。加完后立即盖上塞子，用手剧烈摇动=角瓶5min，自:至没街块状物。然后在震荡器上震荡至少2h.保存于密闭容器中。4. 15 农药标准恪液4. 15 . 1 单一标准储备液巾，用GPC流动相(4.9) 4. 15. 3 工作标准液由混合储备液(4.覆盖f
9、J)i计检测到的样，百5.1 5.5 破璃漏斗.P45mm , 5. 6 旋转蒸发仪。5. 7 移掖特.10mL。5.8 超声波清洗器。5. 9 滤纸筒.内cm，快退5.10 蜒胶咨透也i苦仪(C;PU。色i普柱K璃-:射器.10mL(或一次阶聚丙烯注射器)。5.11 滴管。5. 12 层析牡.I).J径7mm.民23cmc 5. 13 离心机.3500 旷日。5. 14 容量胀，10mL。5. 15 气相色情仪。5.15. 1 自己电捕获检测器(J汇。)的气相色谱仪应100mL容量瓶液。即配即用。使用电子捕获检测器(I汇D)。色情性推荐史川熔融4英毛细管桩，长30m，内径0.32mm.固定相
10、HP 5.膜厚0.25ILm . G / T 13595-2004 5 . 15. 2 配火焰光度检测器(FPD)检测器的气相色谱仪使用火焰光度检测器(FPD)，配硫滤光片。色i普柱推荐使用熔融石英毛细管柱SGE-ZII，长30m , 内径0.32mm，膜厚0.25m(BPX50)。5. 16 气相色谱/质谱联用仪:使用质谱检测器。色谱柱推荐使用熔融石英毛细管柱，长30m，内径。.32mm，固定相DB-17MS，膜厚O.25m。注:玻璃器皿用洗涤剂洗涤后要用水和丙嗣充分冲洗。6 采样与试样制备6.1按GB/T5606. 1或GB/T19616抽6 . 2 按YC/T31制备试样，测定水7 分析
11、步骤正式样品分析之前应列回收率。农药名称二嚓磷甲基对硫磷毒死蝉马拉硫磷杀旗硫磷对硫磷倍硫磷氟节胶高效氯氟氯菊醋氟氯氨菊醋氮氧菊醋氨戊菊醋澳氧菊醋1. 15 克百威4. 47 仲丁灵2.48 甲霜灵2. 643 80. 70 异丙乐灵2. 08 83 . 50 甲奈威4. 125 89 . 43 二甲戊灵2. 89 76 . 70 甲胶磷3. 16 70.03 速灭磷2. 38 95 . 27 久效磷2. 22 94 . 57 磷胶2.32 94 . 57 6. 55 3. 22 9.25 2. 75 3. 26 5. 99 3. 62 3. 62 检出限/(g/g) 0.02 0.06 0.0
12、4 0. 06 0. 05 0. 05 0. 04 0. 01 0. 02 0.03 0. 03 0. 02 3. 01 0. 02 5. 32 0. 01 7.92 0. 03 10. 57 83. 33 6.62 O. 03 8.31 93. 97 3. 39 0. 02 16 . 57 100. 17 6. 87 0.02 11. 56 85.87 7. 24 0.02 12 . 63 62 . 97 7. 78 O. 01 9. 54 91. 40 4. 75 0.01 8. 89 98 . 03 8. 16 0. 02 9.31 98. 03 8. 16 0. 03 3 GB/T 1
13、3595-2004 7. 1 萃取和液-液分配称取10g样品(精确至0.01g)于500mL具塞三角瓶中(5.2)。加入预先加热到400C的水，根据样品含水量调整总水量为100g。用玻璃棒充分搅动后静置30min。再加入200mL丙酣(4.6)，在高速匀浆机(5.1)上匀浆2min。然后加入35g氯化铀(4.2)，100mL GPC(4. 9)流动相，再匀浆1min。静置直至分层后收集上层有机相。用量筒(5.3)准确量取200mL有机相，转移到装有无水硫酸铀(4.3)的漏斗(5.5)中，过滤至400 mL浓缩瓶(5.4)内。漏斗用石英棉(4.5)塞孔，上铺约100g无水硫酸锅。分四次每次用20
14、mL GPC流动相(4.9)洗涤量筒和漏斗，洗涤液同样过滤至400mL浓缩瓶(5.4)中。将浓缩瓶置于旋转蒸发仪(5.的上(水浴温度400C)浓缩近干，必要时氮吹。向浓缩瓶中准确加入7.5mL乙酸乙醋(4.8)，旋转浓缩瓶以榕解内壁上的残留可将浓缩瓶漫入超声波(5.8)中加速溶解，再加入5g 昆合盐(4.4)和7.5mL环己烧(4.7)，使总体积达到15.0mL。静置至i昆合盐沉降后，取出上层溶液，在离心机(5.13)上离心5min后用滤纸筒(5.9)过滤，得到滤液约10 mL。7.2 净化7.2.1 凝胶潘透色谱净化7.2. 1. 1 凝胶渗透色谱柱的装填将50g Bio-Beads(4.
15、10)悬浮在GPC流动相(4.9)中，放置过夜使其膨胀。把全部悬浮物一次性倒人色谱柱(容积约180mL) (5. 10)。待凝胶沉降至约32cm高且无气泡时，塞上尾端适配器，并使其降低至凝胶床基上层面。安装在凝胶渗透色谱上即可使用。如果长期使用后凝胶床基因受压而降低，则应相应调整尾端适配器。7.2. 1. 2 净化将7.1得到的约10mL滤液置于进样盘上，运行凝胶渗透色谱仪。滤液被准确注入5mL的样品环(5.10)内，用GPC流动相(4.的以5.0mL/min的洗脱速度洗脱，收集23min50 min时间段洗脱液于150mL具塞三角瓶(5.2)中。转移洗脱液于250mL浓缩瓶(5.的中，用GP
16、C流动相(4.9)洗涤三角瓶，洗涤液并入浓缩瓶中。置于旋转蒸发仪(5.6)上浓缩至1 mL(慢速旋转，浓缩瓶只浸入少部分于水浴中)。用乙酸乙醋(4.8)洗涤浓缩瓶，定容至5.0mL。此为溶液A，用于气相色谱分析或进一步的硅胶柱净化。7.2.2 硅胶层析柱净化7.2.2. 1 硅胶柱的装填层析柱(5.12)的填装:先填装少量石英棉(4.5)，后填入1.0g脱活硅胶(4.14)，然后填入5mm 10 mm厚的无水硫酸饷(4.3)，最后在层析柱上层再填入少量石英棉(4.5)。使用前，硅胶层析柱用5mL正己皖(4.11)预淋洗，弃去洗脱液。7.2.2.2 净化移取7.2. 1. 2所得溶液A2.5 m
17、L于250mL放缩瓶(5.4)中，加入2X10mL异辛烧(4.12)，置于旋转蒸发仪(水浴温度300C40oC )(5.6)上浓缩至1mL左右，转移至7.3.1预淋过的层析柱内，洗脱液用10mL容量瓶(5.14)接收。7.2.2.2.1 甲苯洗脱量取8mL甲苯(4.13)做洗脱液。加入2mL甲苯(4.13)至浓缩瓶中，超声溶解(瓶内仍有未溶物)后转移至层析柱内洗脱，待液面下降到填料上部，再分别用3X2mL甲苯重复上述操作。收集洗脱液，用甲苯定容至10mL。此为榕液B，待色谱分析。7.2.2.2.2 丙嗣洗脱量取8mL丙酣(4.6)做洗脱液。4 GB/T 13595-2004 加入2mL丙酣(4
18、.6)至浓缩瓶中，超声榕解(瓶内应无未榕物)后转移至层析柱内洗脱，待液面下降到填料上部，再分别用3X2mL丙酣重复上述操作。收集洗脱液，用丙酣定容至10mL。此为溶液C，待色谱分析。7.3 测定7.3. 1 气相色谱(FPD检测器)-一一靶标物:二嚓磷、甲基对硫磷、毒死蝉、马拉硫磷、杀蟆硫磷、对硫磷、倍硫磷;一-样品搭液:7.2. 1. 2所得榕液A。7.3. 1. 1 温度进样口温度应为2500C，检测器温度应为2500C。柱温合适的方法如下:一一初始温度:500，幻、初始时间:1min; 一一程序升温1:以250C/min速率由500C升至1000C;一一一程序升温2:以50C/min速率
19、由1000C升至2700C;一一总运行时间:37 mino 7.3. 1. 2 气流速率根据仪器操作手册及分析人员的经验设定气流速率，恒压模式的气流速率如下z一一载气:氮气，速率30cm/s; 一一尾吹气:氮气，19mL/min; 一一氢气:75mL/min; 一一句空气:10Om丑1L/r口m町1m7工.3.1.3进样方式及模式自动进样器或其他合适的进样装置，进样量2L，不分流进样。进样后分流阀关闭0.5min 7.3.2 气相色谱(咀ECD幢测器)一一靶标物:氟节胶、高效氯氟氧菊醋、氟氯氧菊醋、氯氧菊醋、氧戊菊醋、澳鲁在菊醋;一一一样品溶液:7.2.2.2.1所得榕液B。7.3.2. 1
20、温度进样口温度应为2500C，检测器温度应为3000C。柱温合适的方法如下:一一一初始温度:700C;一一初始时间:2min; 一一程序升温1:以300C/min速率由700C升至1600C;一一程序升温2.以2.50C/min速率由1600C升至2200C;一一程序升温3.以5.00C/min速率由2200C升至2600C;一一-顶温时间:在2600C保持10min; 一一总运行时间:47mino 7.3.2.2 气流速率根据仪器操作手册及分析人员的经验设定气流速率，合适的气流速率如下:一一载气:氮气，2.5mL/min; 一一尾吹气:氮气，6omL/mi丑旧1让ln盯; 一一阳极气:6mL
21、/m口nm7.3.2.3 进样方式及模式自动进样器或其他合适的进样装置，进样量1L，不分流进样。进样后分流间关闭0.5min。7.3.3 气相色谱-质谱联用仪一一靶标物:甲股磷、速灭磷、克百威、久效磷、甲霜灵、磷腊、仲丁灵、异丙乐灵、二甲戊灵、甲荼威;GB/T 13595-2004 一一样品榕液:7.2.2.2.1所得榕液B，7.2. 2. 2. 2所得榕液C。需分别检测。7.3. 3. 1 温度进样口温度2500C，柱温合适的方法如下:一一初始温度:70oC; -一初始时间:2min; 一一程序升温1:以250C/min速率由700C升至1300C;一一程序升温2:以2.0oC/min速率由
22、1300C升至2200C; 一一程序升温3.以10.0oC/min速率由2200C一一顶温时间:在2800C保持6.60 m 一一一总运行时间:62.00min。7.3.3. 2 气流速率根据仪器操作手册及分载气:氮气，1.5mL/ 7.3.3.3 进样方式及模自动进样器或其他7.3.3. 4 检测器质谱检测器:电序I号I 1农中II2 3 4 5 6 7 克百威8 磷胶9 甲霜灵10 甲奈威8 结果计算8.1 FPD检测器B 以干基计的农药残留量Rp计，数值以微克每克表示，按式(1)计算:ZJl |l ;JJ 224 I I I 250 95 192 192 11 5 201 R p = -
23、:-;-;了X5、;:;X3.(1) 6 式中:C一一由标准曲线得出的农药残留浓度，单位为微克每毫升(g/mL); 5一一溶液最终定容的体积，单位为毫升(mL); m一一试料质量，单位为克(g); GB/T 13595-2004 w 样品的水分百分含量，%(质量分数); F一一稀释因子(F=200/285)。8.2 ECD检测器和MSD检测器以干基计的农药残留量Rp计，数值以微克每克表示，按式(2)计算:Rn = -，X 10 p - . / /1、X6(2 ) 式中:C一一由标准曲线得出的农药残留浓度，单位为微克每毫升(g/mL); 10-、溶液最终定容的体积，单位为毫升(mL)_;m 试料
24、质量，单位为克(g);w 样品的水分百分含量，%F一二稀释因子(F=200/28。9重复性回叫出阻侈;表17 GB/T 13595-2004 8 5Hz 260 240 220 200 180 160 140 120 20 22.5 25 1一19.3rnin，氟节胶p2一-32.1rnrn，高效氯氟氟菊酶;3-35.6 rnin.氟氯氧菊酶(共四个峰); 4一二36.4rnn，氯氧菊酶(共四个峰h5一-38.1rnin，氧戊菊醋;6一一一40.3rnin，澳氟菊醋。附录A(资料性附录)色i曾图示例27.5 30 2 32.5 3 4 5 35 37.5 图A.1a) ECD检测器0.05阿/
25、rnL工作标准溶班的色谱图5日z275 250 225 200 175 150 125 100 20 22.5 25 27.5 30 32.5 35 37.5 6 40 t/min 40 t/min 圄A.1b) 无氟节脏、高效氯氟佩菊醋、氟氯佩菊醋、氯篝菊醋、佩戊菊醋、澳佩菊醋农药残留烟草样晶的色谱圈GB/T 13595-2004 7 150 ., pA 100 80 4 60 40 20 22 24 26 28 30 I/mm 圄谱色液准标作工L m ,/ ob uf nu 器测幢D P Ez a qL 曲mg;AP硫磷磷.，。圄磷对蝉硫硫磷磷嚓基死拉螺硫硫二甲毒马杀对倍nnnnnnn m
26、mmmmmm AIno-FUA句t巧，丛4nxunudn可UA叫unudAHuq?。?。，9Mqdti。Lqad哇phO07150寸pA100 80 60 40 20 。22 24 26 28 30 I/min 固A.2b) 无二醺磷、甲基对硫磷、毒死蝉、马拉畸磷、杀螺硫磷、对硫磷、倍硫磷农药残留烟草样晶色谱图9 GB/T 13595-2004 10 A bundance 34000 32000 30000 28000 26000 24000 22000 20000 18000 16000 14000 12000 10000 8000 6000 4000 2000 27.00 Ab 26000
27、 24000 22000 20000 18000 16000 14000 12000 10000 8000 6000 4000 2000 27.00 5 圈A.3b) 无克百威、甲霜灵、伸丁灵、异丙乐灵、二甲戊灵、甲荼威农药残留烟草样晶的选择离子色谱图t/ min GB/T 13595-2004 Abundance 2 5000 4500 4000 3500 3000 4 2500 2000 1500 1000 5001 I.一叫k 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 22.00 24.00 26.00 28.00 30.00 32.00
28、 t/min 1-8.2 min，甲胶磷;2-11. 6 min和12.4min，速灭磷;3-25.2 min，久效磷;4-30.7 min，磷胶。圄A.4a) MSD检测器四种含磷农药0.5g/mL工作标准液的选择离子色谱圈e pu-n a AUa m000000000000000000000000000000 日50505050505050505050505050505011uraRuaaaazqdna。4qa-AAUnunvnvngo。句，户口户。rDFhuaazaandn04n，AiAi-1111111111 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.0
29、0 20.00 22.00 24.00 26.00 28.00 30.00 32.00 34.00 t/min 图A.4b) 无甲股磷、速灭磷、久效磷、磷股农药残留烟草样晶的选择离子色谱固苛CON-m町的户同阁。华人民共和国家标准烟草及烟草制晶拟除虫菊醋杀虫剂、有机磷杀虫剂、含氨农药残留量的测定GB/T 13595-2004 国中怜中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北衔16号邮政编码:100045 网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销 印张1字数24千字2005年3月第-次印刷开本880X12301/16 2005年3月第一版7G 如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533定价12.00* 书号:155066 1-22363 GB/T 13595-2004
