1、ICS 65120B 46 a亘中华人民共和国国家标准GBT 1 3883-2008代替GBT 13883-19922008-08-01发布饲料中硒的测定Determination of selenium in feeds20081101实施丰瞀髁鬻瓣警糌瞥星发布中国国家标准化管理委员会促1”刖 吾GBT 1 3883-2008本标准代替GBT 138831992饲料中硒的测定。本标准与GBT 13883-1992相比主要变化如下：引入氢化物原子荧光光谱法并作为仲裁法；一一规定2，3-二氨基萘荧光法的激发波长为376 nm，发射波长为520 nm。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口
2、。本标准起草单位：中国饲料工业协会、国家饲料质量监督检验中心(武汉)。本标准主要起草人：何一帆、辛盛鹏、粟胜兰、徐锦萍、邹大琼、刘小敏、高丽红。本标准于1991年首次发布为国家标准GB 13883-1992。1997年调整为非强制性标准，编号改为GBT 138831992。本次修订是该标准的第一次修订。1范围饲料中硒的测定本标准规定了配合饲料、浓缩饲料及预混合饲料中硒的测定方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料及预混合饲料中硒的测定。氢化物原子荧光光谱法定量限001 mgkg；荧光法定量限002 mgkg。2规范性引用文件GBT 13883-2008下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的
3、条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法(GBT 66821992，neq ISO 3696：1987)GBT 146991 饲料 采样(GBT 1469912005，ISO 6497：2002，IDT)GBT 20195 动物饲料试样的制备(GBT 20195 2006，IsO 6498：1998，IDT)3第一法氢化物原子荧光光谱法(仲裁法)31原理试样经酸加热消化后，在盐酸介质中
4、，将试样中的六价硒还原成四价硒，用硼氢化钠作还原剂，将四价硒在盐酸介质中还原成硒化氢，由载气带人原子化器中进行原子化，在硒空心阴极灯照射下，基态硒原子被激发至高能态，在去活化回到基态时，发射出特征波长的荧光，其荧光强度与硒含量成正比，与标准系列比较定量。32试剂以下试剂除特别注明外，均为分析纯，水应符合GBT 6682中规定的二级水。321硝酸：优级纯。322高氯酸：优级纯。323盐酸：优级纯。324混合酸溶液：硝酸+高氯酸一4+1。325氢氧化钠：优级纯。326硒粉：光谱纯。327硼氢化钠溶液(5 gL)：称取50 g硼氢化钠(NaBHt)，溶于氢氧化钠溶液(5 gL)中，然后定容至1L。3
5、28铁氰化钾溶液(200 gL)：称取200 g铁氰化钾K3Fe(CN)s，溶于100 mL水中，混匀。329硒标准贮备液：准确称取1000 mg硒粉(326)，溶于少量硝酸(321)中，加2 mL高氯酸(322)，置沸水浴中加热3 h-4 h冷却后再加84 mL盐酸(323)，再置沸水浴中煮2 rain，用水移入1L容量瓶中，稀释至刻度，摇匀。其盐酸浓度为01 molL，此贮备液浓度为每毫升含100 pg硒。3210硒标准工作液：准确量取100 mL硒标准贮备液(329)于100 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。此标准工作液为每毫升含1 pg硒。现用现配。33仪器、设备331分析天平：感
6、量0000 1 g。332原子荧光光度计。1GBT 13883-2008333电热板。334实验室用样品粉碎机。335 载气：氩气或氮气。34试样的制备按GBT 146991采样，按GBT 20195制备试样，试样磨碎，通过045 mrll孔筛，混匀，装入密闭容器中，避光低温保存备用。35测定步骤351试样的处理称取试样20 g，准确到0000 1 g，置于100 mL高型烧杯内，加15o mL混合酸溶液(324)及几粒玻璃珠，盖上表面皿冷消化过夜。次日于电热板上加热，当溶液高氯酸冒烟时，再继续加热至剩余体积2mL左右，切不可蒸干。冷却，再加25mL盐酸(323)，用水吹洗表面皿和杯壁，继续加
7、热至高氯酸冒烟时，冷却，移人50 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为试样消化液。量取20 mL试样消化液于50mL容量瓶中，加8mL盐酸(323)，加2mL铁氰化钾溶液(328)，用水稀释至刻度，摇匀，待测。同时在相同条件下，做试剂空白试验。352标准曲线的制备分别准确量取00，025，050，100，200，300mL硒标准工作液(3210)于50mL容量瓶中，加入10mL水，加入8mL盐酸(323)，加2mL铁氰化钾溶液(328)，用水稀释至刻度，摇匀。353仪器参考条件光电倍增管负高压：340 V；硒空心阴极灯电流：60 mA；原子化温度：800；炉高：8 mm；载气流速：500
8、mLmin；屏蔽气流速：1 000 mLmin；测量方式：标准曲线法；读数方式：峰面积；延迟时问：1 S；读数时间：15 s；加液时问：8 s；进样体积：2 mL。354测量设定好仪器最佳条件，待炉温升至设定温度后，稳定15 min20 rain开始测量。连续用标准系列的零瓶进样，待读数稳定之后，首先进行标准系列测量，绘制标准曲线。再转入试样测量，分别测量试剂空白和试样，在测量不同的试样前进样器应清洗。测其荧光强度，求出回归方程各参数或绘制出标准曲线。从标准曲线上查得溶液中含硒量，试样中硒的测定结果按361计算。36分析结果的计算和表示361结果计算试样中硒含量x，以质量分数计，数值以毫克每千
9、克(mgkg)表示，按式(1)计算。X (c一“)砜1000 (fCo)VomV11 0001 000 mVl1 000式中：c 试样消化液中硒的浓度，单位为纳克每毫升(ngmL)；Co 试剂空白液中硒的浓度，单位为纳克每毫升(ngmL)；V0 试样消化液总体积，单位为毫升(mL)；m 试样质量，单位为克(g)；v。分取试液的体积，单位为毫升(mL)。测定结果用平行测定后的算术平均值表示，计算结果表示到001 mgkg。362重复性在同一实验室，同一分析者对两次平行测定的结果，应符合以下相对偏差的要求当硒的质量分数小于或等于020 mgkg时，相对偏差25；当硒的质量分数大于020mgkg而小
10、于040mgkg时，相对偏差Z0；2当硒的质量分数大于040 mgkg时，相对偏差12。4第二法2，3一二氨基萘荧光法GBT 13883-200841原理试样经混合酸消化，使硒游离出来，在微酸性溶液中硒(Se”)和2，3一二氨基萘(DAN)生成4，5-苯基苯并硒二唑，用环己烷直接在生成络合物的同一酸度溶液中萃取。用荧光光度计在激发波长为376 nm、发射波长为520 nm条件下测定荧光强度，从而计算出试样中硒的含量。42试剂以下试剂除特别注明外，均为分析纯，水应符合GBT 6682中规定的二级水。421高氯酸：优级纯。422硝酸：优级纯。423氨水溶液：1+1。424盐酸溶液：c(HCl)一3
11、 molL。425盐酸溶液：c(HCl)一01 molL。426环己烷：若有荧光杂质，需重新蒸后使用。427盐酸羟胺一乙二胺四乙酸二钠(EDTA)溶液：称取10 gEDTA溶于500mL水中，加入25 g盐酸羟胺使其溶解，用水稀释至1 L。428 2，3-二氨基萘(DAN)溶液：称取01 g DAN于250 mL烧杯中，加入100 mL盐酸溶液(425)使其溶解，移入250mL分液漏斗，加入20mL环己烷(426)振荡1rain，待分层后弃去环己烷，水相重复用环己烷处理2次3次。水相放人棕色瓶中上面加盖1 cm厚的环己烷，在暗处保存，此溶液可使用数周。429硒标准工作液：准确量取100mL硒标
12、准工作液(3210)于50mL容量瓶，用水稀释至刻度，摇匀。此标准工作液为每毫升含02 pg硒。现用现配。4210甲酚红指示剂(o4 gL)：称取004 g甲酚红于150mL烧杯中，加少许氨水溶液(423)使其溶解后用水稀释至100 mL，摇匀。43仪器荧光光度计。44试样的制备同34。45测定步骤451试样的处理4511配合饲料、浓缩饲料称取试样10 g，准确至0000 1 g(Seo4 pg)，置人100 mL高型烧杯中，用水润湿试样加10 mL硝酸(422)，加盖表面皿，放在电热板上低温加热，煮沸至硝酸体积减少到5 mL时，取下稍冷加入5 mL高氯酸(421)继续加热至高氯酸冒烟，取下稍
13、冷，用水吹洗表面皿和杯壁，放在电热板上由低温升温至高氯酸冒烟并保持5 min10 min，取下冷却，加入1 mL水和1 mL盐酸溶液(424)煮沸，摇匀，放置10 rain，用水移入50 mL具塞比色管中对于高含量硒样品，将消化液稀释至100 mL容量瓶，量取部分溶液(seo4 g-g)于50mL具塞比色管中，稀释至30mL，加二滴甲酚红指示剂(4210)，用氨水溶液(423)中和至黄色，用盐酸溶液(424)中和至橙色(pill52)，加入3 mL盐酸羟胺溶液(427)摇匀，加入2 mLDAN溶液(428)，盖好塞子，摇匀，打开塞子，置于100沸水中保持5 min。取出冷却至室温，用盐酸溶液(
14、425)稀释至刻度，加5 mL环己烷(426)振荡1 min，静置分层后，用作待测溶液。同时在相同条件下，做试剂空白试验。GBT 13883-20084512预混合饲料对于预混料样品，称取10 g样品(准确到0000 1 g)，置人100 mL高型烧杯中，加入10 mL水和15 mL硝酸(422)，盖上表面皿，放在电热板上低温煮沸30 rain，取下冷却，用水移人100 mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，量取部分上清液(Se04 pg)于100 mL高型烧杯中，加入5 mL高氯酸(421)，以下按4511加高氯酸后的分析步骤进行。452标准曲线的制备分别准确量取000，050，100，200，3
15、00，400 mL硒标准工作液(429)，于50 mL具塞比色管中，加入2滴甲酚红指示剂(4210)，以下按4511“用氨水溶液(423)中和”后的分析步骤进行。453试样的测定将待测溶液(4511)上层的环己烷溶液吸入1 crll石英杯中，用荧光光度计在激发波长为376 nm、发射波长为520 nrlR处分别测定其荧光强度，同时进行标准曲线的测定，绘制标准曲线。从标准曲线上查得溶液中含硒量，试样中硒的测定结果按461计算。46分析结果的计算和表示461结果计算试样中硒含量x，以质量分数计，数值以毫克每千克(mgkg)表示，按式(2)计算。X (m】一mz)XVo X 1 000 (mlm2)Vo”oV11 ooo moV式中：m。自标准曲线上查得样品的硒质量分数，单位为微克(pg)；mz自标准曲线上查得空白的硒质量分数，单位为微克(pg)；yo试液的总体积，单位为毫升(mL)；m。试样的质量，单位为克(g)；y。分取试液的体积，单位为毫升(mL)。测定结果用平行测定后的算术平均值表示，计算结果表示到001 mgkg。462重复性在同一实验室，同一分析者对两次平行测定的结果，应符合以下相对偏差的要求当硒的质量分数小于或等于010 mgkg时，相对偏差40；当硒的质量分数大于010 mgkg而小于040 mgkg时，相对偏差20；当硒的质量分数大于040 mgkg时，相对偏差15。
