1、GB/T 18932.18-2003 前言GB/T 18932的本部分修改采用加拿大标准方法ACC-021-V2. 0蜂蜜中短甲基糠醒含量的测定方法高效液相色谱法队修改的主要内容是2一一二极管阵列检测器改为紫外检测器;一一样品称样质量由12.50g改为10.00g; 方法检出限由2.0mg/kg改为1.0 mg/kgo 本部分的附录A和附录B为资料性附录。本部分由中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局提出。本部分由中华全国供销合作总社归口。本部分起草单位g中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局.本部分主要起草人z庞国芳、刘永明、曹彦忠、范春林、张进杰、李学民、贾光群、李元.本部分系首次发布的国家标
2、准。1 范围蜂蜜中提甲基穰醒含量的测定方法液相色谱-紫外检测法GB/T 18932的本部分规定了蜂蜜中经甲基糠隆含量的液相色谱测定方法.本部分适用于蜂蜜中经甲基橡隆含量的测定。本部分的方法检出限，1.0 mg/险。2 规范性引用文件GB/T 18932.18-2003 下列文件中的条款通过GB/T18932的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注目期的引用文件，其最新版本适用于本部分.GB/T 6379 测试方法的精密度通过实验室间试验确定
3、标准测试方法的重复性和再现性(GB/T6379-1986 ,neq 150 5725巳1981)GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682 1992 , neq 150 3696 ,1987) 3 原理蜂蜜样品中的经甲基糠醒经HPLC反相色谱柱分离，用液相色谱仪紫外检测器检测。用标准曲线外标法定量。4 试剂和材料4.1 水，GB/T6682规定的一级水。4.2 甲薄g色谱纯。4.3 甲蹲溶液，10%，吸取100mL的甲醇到1000mL的容量瓶中，用水稀释至刻度。4.4 标准物质2渥甲基糠隆纯度99%。4.5 标准储备溶液=准确称取适量的资甲基糠回事标准物质于100mL容
4、量瓶，用10mL甲醇溶解，用水稀释至刻度，配成0.20mg/mL的标准储备液。此溶液可在温度低于4(;冰箱中冷藏保存两个月。4.6 标准工作溶液分别吸取适量的经甲基糠隆标准储备溶液至100mL容量瓶中，用10%甲蹲溶液释稀至刻度，配成0.10g/mL，0.20g/mL，l.Og/mL.2.0g/mL.4.。g/mL.6.。g/mL，lOg/mL标准工作溶液。当天新鲜配制。5 仪器5.1 高效液相色谱仪z配有紫外检测器。5.2 分析天平感量。.01go 5.3 注射器，10mL。5.4 过滤膜，0.45moGB/T 18932.18-2003 6 试样帘j备与保存6.1 试样的制备元论有无结晶的
5、实验室样品，都不要加热。将其搅拌均匀，分出0.5kg作为试祥。常l备好的试样置于样晶瓶中，密封，并做上标记。6.2 试样的保存将试样于室温下保存。7 测定步醺7.1 试样处理称取10g试样，精确至O.Olg，置于100mL烧杯中，加入10mL甲醇(4.2)，用玻璃棒轻轻搅拌均匀，使试样完全溶解。转移至100mL容量瓶中，用水释稀至刻度，充分III匀。用0.45m的滤膜过滤，滤液用于液相色谱仪紫外检测器测定.7.2 色谱测定7.2.1 液徊色谱条件a) 色谱柱:Diamonsil Cl8 5m，250 mmX4. 6mm(i. d)或相当者;b) 流动相g甲醇+水(10+90); c) 流速:1
6、. 0 mL/min; d) 检测波长285nm; e) 柱温:30.C;f) 进样量:10L。7.2.2 渡相色谱测定首先测定七个标准工作溶液(4.们在上述色谱条件下的峰面积，以峰面积对相应浓度绘制标准工作曲线，然后测定未知样品，用标准工作曲线对样品进行定量。样品溶液中经甲基糠隘的响应值应在仪器的线性范围内。在上述色谱条件下，经甲基糠醒的参考保留时间约为12min.经甲基糠豁标准物质色谱图和含有瓷甲基糠霞的蜂蜜样品色谱图参见附录A中图A.l、图A.2。7.3 平行试验按上述步骤，对同一试样进行平行试验测定。7.4 空白试验按上述步骤，对10%，的甲薛溶液进行测定。7.5 添加试验每批样品应至
7、少进行一个样品的添加试验.称取10g试样，精确至O.Olg，添加1.0mL经甲基糠醒标准储备溶液，加9.9mL甲醇溶解，其他步骤按试样处理步骤进行。B 结果计算结果按式(1)计算s式中.x = c !:_ 1 000 = C. -. m 1000 X一-试样中渥甲基糠醒含量，单位为毫克每千克(mg/kg); c一一-从标准工作曲线上得到的被测组分溶液浓度，单位为微克每毫升(/Lg/mL)，V一一定容体积，单位为毫升(mL)，m一一样液所代表试样的质量，单位为克(g)。.( 1 ) GB/T 18932.18-2003 注2计算结果应扣除空白值。9 精密度本部分的精密度数据是按照GB/T6379
8、的规定确定的，其重复性和再现性的值是以95%的可信度来计算。9.1 重复性在重复性条件下，蜂蜜中资甲基糠酶的含量在2.0 mg/kg40 mg/kg范围内，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限(吵，本部分的重复性限按式(2)计算z19r = O. 649 51gm一1.304 3 ( 2 ) 式中zm 两次测定值的平均值，单位为毫克每千克(mg/kg)。如果两次测定值的差值超过重复性限，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。9.2 再现性在再现性条件下，蜂蜜中瓷甲基糠醒的含量在2.0 mg/kg40 mg/kg范围内，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限(R)，本部分
9、的再现性限按式(3)计算R = 0.068 2 m + 0.124 3 ( 3 ) 式中zm一一两次测定值的平均值，单位为毫克每千克(mg/kg)。附录A(资料性附录)标准物质色谱固和含有短甲基穰醒的鳞样晶色遭圄GB/T 18932.18-2003 HSJNHlhEZ 经甲基糠自主(HMF)标准物质色谱图，见图A.l。回08A.1 o.田0.0004 o.胁。2。曲曲14.回12.00 10.00 6.00 8回圈A.1A.2 含有经甲基糠隘的蜂蜜样品色谱图，见图A.2.4.00 2.00 0.007 。因0.005 =。-Ehhzz0.004 0.003 0.002 0.001 14.00 12 10.00 8.00 6. 圈A.24.00 2.00 0.000 附录B(资料性附亵)回收率本方法中经甲基糠M添加浓度及其回收率的试验数据g在添加量为1.0 mg/kg时，平均回收率为93.78%, 在添加量为10.0mg/同时，平均回收率为94.88%; 在添加量为40.0mg/kg时，平均回收率为95.76%, 在添加量为100mg/同时，平均回收率为94.68%。GB/T 18932.18-2003
