1、GB/T 18932.19-2003 前言GB/T 18932的本部分是修改采用加拿大标准ACC-062-Vl. 0(蜂蜜中氯霉素残留量测定一一液相色谱质谱法)，修改的主要内容是.一一净化柱由Cl8固相萃取柱改为OasisHLB固相萃取柱g淋洗液由乙脯十水(3+7)改为乙酸乙醋;单四极杆质谱检测器改为串联四极杆质谱检测器;一一内标法改为外标法。本部分的附录A和附录B为资料性附录。本部分由中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局提出。本部分由中华全国供销合作总社归口。本部分起草单位E中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局。本部分主要起草人s庞国芳、曹彦忠、张进杰、贾光群、范春林、李学民、刘永明、石玉秋
2、。本部分系首次发布的国家标准。1 范围蜂蜜中氯毒素残留量的测定方法液相色谱-串联质谱法GB/18932.19-2003 GB/T 18932的本部分规定了蜂蜜中氯霉素残留量液相色谱串联质谱测定方法。本部分适用于蜂蜜中氯霉素残留量的测定。本部分的方法检出限z氯霉素为0.10g/kgo2 规范性引用文件下列文件中的条款通过GB/T18932的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注目期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。GB/T 6379 测试方
3、法的精密度通过实验室间试验确定标准测试方法的重复性和再现性(GB/T6379-1986 .neq ISO 5725 :1 981) GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682-1992. neq ISO 3696 ,1987) 3 原理试样用乙酸乙醋提取，提取液浓缩后再用水榕解.OasisHLB固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。4 试剂和材料4.1 水:GB/T6682规定的一级水。4.2 甲醇:色谱纯。4.3 乙腊色谱纯。4.4 乙酸乙酶z色谱纯。4.5 乙腊+水(十7):量取20mL乙腊(4.3)与140mL水混合。4.6 Oasis HLB固相
4、萃取柱或相当者:60mg.3 mL。使用前分别用3mL甲醇和5mL水预处理，保持柱体湿润。4. 7氯霉素标准物质纯度99%。4.8 氯霉素标准储备溶液:0.1mg/mL。准确称取适量的氯霉素标准物质(4.7).用甲醇配成0.1mg/mL 的标准储备液。储备液贮存在4(:冰箱中，可使用两个月。4.9 氯霉素标准工作溶液用空白样品提取液分别配成氯霉素浓度为O.5 ng/mL. 1. 0 ng/mL. 5.0 ng/mL. l0 ng/mL.50 ng/mL.100 ng/mL标准工作滚液，标准工作溶液在40C保存，可使用一周。5 仪器5.1 液相色谱串联囚极杆质谱仪z配有电喷雾离子源。5.2 分析
5、天平=感量0.1mg和0.01g各一台。5.3 自动浓缩仪或相当者。GB/T 18932.19-2003 5.4 氮气吹于仪e5.5 振荡器。5.6 液体混匀器。5.7 团相萃取装置。5.8 贮液器.50mL。5.9 真空泵z真空度应达到80kPao 5.10 离心机。5.11 刻度离心管.10mL，精度为0.1mL。5.12 移液器.10mLo 5.13 离心管.50mL，具塞。6 t式样的制备与保存6.1 试样的制备对无结晶的实验室样品，将其搅拌均匀。对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过60C的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，冷却至室温。分出0.5kg作为试样。制备好的试样置于
6、样品瓶中，密封，并做上标记。6.2 试样保存将试样于常温下保存。7 测定步骤7.1 提取称取5g试样，精确J0.01 go置于50mL具塞离心管中，加入5mL水，于液体混匀器上快速混合1min，使试样完全溶解。准确加入15mL乙酸乙酶，在振荡器上振荡10min，以3000 r/min离心10 mn，准确吸取上层乙酸乙酣12mL转入自动浓缩仪的蒸发管中，用自动浓缩仪在55C减压蒸干，加入5mL水溶解残渣，待净化。7.2净化将提取液(7.1)倒人下接OasisHLB柱(4.们的贮液器中，溶液以小于等于3mL/min的流速通过Oasis HLB困相萃取柱，待溶液完全流出后，用2X5mL水洗蒸发管和贮
7、液管并过柱，然后再用5mL 乙腊+水(4.5)洗柱，弃去全部淋出液。在65kPa的负压下，减压抽干10min，最后用5mL乙酸乙醋(4.4)洗脱，收集洗脱液于10mL刻度离心管(5.11)中，于500C用氮气吹干仪吹子，用乙府十水(20十80)定容至0.8mL，供液相色谱串联质谱仪测定。7.3 测定7.3.1 液相色i曹条件a) 色谱柱:Pinnacle II C18 5m， 150 mmX2. 1 mm(i. d)或相当者pb) 流动相=乙脯十水(20+汩汩c) 流速.0.2mL/min. d)柱温.30oC.e) 迸样量40L。7.3.2 质谱条件a) 离子源:电喷雾离子源gb) 扫描方式
8、E负离子扫描pc) 检测方式z多反应监测;d) 电喷雾电压.-4500V，GB/T 18932.19-2003 e) 雾化气压力0.069MPa, f) 气帘气压力:0.069MPa, g) 辅助气流速:6L/min, h) 离子源温度:450C, i) 去簇电压:一55V , j) 定性离子对、定量离子对和碰撞气能量2定性离子对/(m/z)321/176 321/152 321/194 7.3.3 液相色谱-串联质谱测定定量离子对/(m/z)32 1/152 碰撞气能量/V21 -23 20 氯霉素标准工作溶液(4.9)在液相色谱-串联质谱设定条件下分别进样，以峰面积为纵坐标，工作溶液浓度(
9、ng/mL)为横坐标，绘制七点标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中氯霉素的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下，氯霉素参考保留时间为12.31 min。氯霉素标准物质总离子流图和质谱图参见附录A中的图A.1、图A.2.7.4 平行试验按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。7.5 空白试验除不称取试样外，均按上述步骤进行。B 结果计算结果按式(1)计算2式中zx = c 1 000 = C. -.一一一-一m 1000 X 试样中被测组分残留量，单位为微克每千克(fLg/kg), C 一从标准工作曲线上得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升(ng/mU，V一一
10、样品溶液定容体积，单位为毫升(mL)，m-一一样品溶液所代表试样的质量，单位为克(g)。注2计算结果应扣除空白值.9 精密度.( 1 ) 本部分的精密度数据是按照GB/T6379的规定确定的，其重复性和再现性的值是以95%的可信度来计算。9.1 重复性在重复性条件下，蜂蜜中氯霉素的含量在O.1g/kg4. 0g/kg范围内，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限(吵，本部分的重复性限按方程式(2)计算:19r = 0.972 91gm - 1. 007 0 .( 2 ) 式中:m 两次测定值的平均值，单位为微克每千克(g/kg)。如果差值超过重复性限，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试
11、验的测定。GB/T 18932.19-2003 9.2 再现性在再现性条件下，蜂蜜中氯霉素的含量在0.1g/kg4.0g/kg范围内，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限(扣，本部分再现性限按方程式(3)计算19R = 1. 032 21gm - O. 797 9 H H .( 3 ) 式中2m 两次测定值的平均值，单位为微克每千克(Ig/kg)。附录A(资料性附录)标准物质质谱圈A.1 氯霉素标准物质总离子流图，见图A.l。4.0e4 3.5e4 3.0e4 2.5e4 2. Qe4 1. 5e4 1. Oe4 50.0 2.63 0.0 A.2 氯霉素标准物质质谱图，见图A.2o
12、5.3e6 5.0e6 4.5e6 4.0e6 3.5e6 3.0e6 2.5e6 2.0e6 1. 5e6 1. Oe6 5.0e5 70.7 - 83.8 50 151. 7 125.6 1417 100 150 12.23 10 15 20 图A.1175.7 200 250 m/z.amu 固A.2GB/T 18932.19-2003 25 30 t /min 320.7 300 350 400 GB/T 18932.19-2003 附录B(资料性附录)回收率蜂蜜中氯霉素添加浓度及平均回收率的试验数据2在添加量为0.1g/同时，平均回收率为103.3%; 在添加量为0.3g/kg时，平均回收率为98.2%; 在添加量为1.0g/kg时，平均回收率为96.4%; 在添加量为5.0g/kg时，平均回收率为97.2%。
