1、ICS 67. 180. 10 X 31 道国中华人民共和国国家标准GB/T 18932.24-2005 蜂蜜中映喃它醋、映喃西林、映喃妥因和映喃略目同代谢物残留量的测定方法液相色谱-串联质谱法Method for the determination of the metabolite residues of furaltadon , nitrofurazone, nitrofurantoin and furazolidone in honey Liquid chromatography - tandem mass spectrometry method 2005蛐02-04发布2005-08
2、-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检痊总局也企中国国家标准化管理委员会0.IJ 前GBjT 18932本部分的附录A、附录B为资料性附录。本部分由中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局提出。本部分由中华全国供销合作总社归口。本部分起草单位z中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局。GB/T 18932.24-2005 本部分主要起草人z庞国芳、张进杰、曹彦忠、郭彤彤、范春林、李学民、刘永明、曹亚平。本部分系首次发布的国家标准。GB/T 18932.24-2005 1 范围蜂蜜中映喃它丽、映喃西林、肤喃妥因和映喃瞠酣代谢物残留量的测定方法液相色谱-串联质谱法GB/ T 18932的本部分规定了蜂
3、的代谢物氨基腮、映喃妥因的代M-t氨基物3-氨基-2-嗖烧基酣残留量液相色谱-串联质谱的测定方本部分适用于蜂蜜中残留量的测定。本部分的方法检2 规范性引用文下列文件中件，其随后所有协议的各方研究部分。GB/ T 6379 6379- 1986 ,neq GB/ T 6682 3 原理4 试剂和材料除另有说明外，所用4. 1 甲醇:色谱纯。4.2 乙睛:色谱纯。4. 3 乙酸乙醋:色谱纯。4. 4 磷酸氢二饵:优级纯。4.5 乙酸:优级纯。4.0 二甲亚枫:优级纯。4. 7 盐酸:优级纯。4.8 氢氧化铀:优级纯。4. 9 2-硝基苯甲醒(2-NP):含量二三99%。o. 2月/kg;氨基服和注
4、日期的引用文据本部分达成版本适用于本再现性CGB/T4.10 磷酸氢二饵溶液:0.1mol/L。称取17.4g磷酸氢二饵(4.4) ，用水溶解，定容至1000mL。4. 11 盐酸:0.2mol/L。量取17mL浓盐酸(4.7)用水定容至1000 mL。GB/T 18932.24-2005 4. 12 氢氧化纳溶液:1mol/L。称取40g氢氧化铀(4.肘，用水溶解，定容至1000 mLo 4. 13 衍生剂z含2-硝基苯甲醒0.05mol/L。称取o.075 g 2-硝基苯甲醒(4.9)溶于10mL二甲亚枫(4.的，现用现配。4. 14 样品定容榕液z乙睛(4.2)+0.4%乙酸(4.5)水
5、榕液。+9)。4. 15 Oasis HLB固相萃取柱或相当者:60mg ,3 mL。使用前分别用5mL甲醇(4.1)和10mL水预处理，保持柱体湿润。4. 16 0.45m滤膜。4. 17 5-甲基吗琳-3-氨基2瞠烧基酣、氨基服、1-氨基-2-内酷服和3氨基-2-瞠皖基酣标准物质z纯度二三99%。4.18 5甲基吗琳3氨基-2-瞠皖基酣、氨基服、1-氨基-2-内酷腮和3-氨基-2-瞠皖基酣标准储备溶液:1. 0 mg/mL。称取适量的四种硝基映喃代谢物标准物质(4.17)，分别用甲醇配成1.0mg/mL的标准储备液。储备液避光贮存在一18C冰柜中，保存期为三个月。4. 19 5-甲基吗琳3
6、-氨基-2-嗖烧基酣、氨基服、1-氨基-2-内酷服和3-氨基-2-略烧基酣混合标准工作溶液:1. 0g/mL。吸取适量四种硝基映喃代谢物的标准储备溶液(4.18)，用甲醇配成1.0g/mL的混合标准工作溶液，标准工作溶液避光贮存在一180C冰柜中，保存期为三个月，使用前回温到室温。4.20 5-甲基吗琳-3-氨基-2-瞠烧基嗣、氨基腮、1-氨基-2-内酷服和3-氨基-2-瞠烧基酣棍合基质标准校准榕液z称取七个蜂蜜空白样品(称样量为4g)于50mL棕色离心管中，其中六个空白样品中分别加人适量四种硝基映喃代谢物的混合标准工作溶液(4.19)，按照样品操作步骤同步操作。使最终样液中5-甲基吗琳3氨基
7、-2-唾烧基酣和3-氨基-2-唾烧基酣的浓度均分别为ong/mL, O. 5 ng/mL, 1. 0 ng/mL. 2. 0 ng/mL, 5. 0 ng/mL, 10. 0 ng/mL,20. 0 ng/mL;氨基腮、1-氨基-2-内酷腮的浓度均分别为ong/mL ,1. 0 ng/mL,2. 0 ng/mL, 5. 0 ng/mL, 10. 0 ng/mL, 20. 0 ng/mL, 50. 0 ng/mL作为基质标准校准榕液，该基质标准校准榕液即配即用。5 仪器5. 1 掖相色谱-串联四极杆质谱仪，配有电喷雾离子源。5.2 分析天平:感量0.1mg和0.01g各一台。5.3 液体棍匀器。
8、5.4 固相萃取装置。5.5 氮气吹干仪。5.6 恒温箱。5. 7 真空泵:真空度应达到80kPa。5.8 微量注射器:25L，100L。5.9 棕色具塞离心管:25mL , 50 mL。5.10 pH计z测量精度士0.0205. 11 贮液器:50mL。6 试样的制备与保存6. 1 试样的制备对无结晶的实验室样品，将其搅拌均匀。对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过600C的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，迅速冷却至室温。分出0.5kg作为试样。制备好的试样置于样品瓶中，密封，并做上标记。6.2 试样保存将试样于常温下保存。2 GB/T 18932.24一20057 测定步骤7.
9、1 水解和衍生化称取4g试样(精确到0.01g)于50mL棕色离心管中(5.9)，加入5mL O. 2 mol/L盐酸榕液(4.11)和0.15mL衍生剂(4.13)，涡旋混合1min，置于370C恒温箱(5.6)中保持16h。7.2 净化将上述衍生潜液(7.1)取出放置至室温，加入3mL O. 1 mol/L磷酸氢二怦榕液(4.10)，用1mol/L 氢氧化铀溶液(4.12)调节榕液pH约7.4，倒入下接OasisHLB固相萃取柱(4.1日的贮液器(5.11)中，在固相萃取装置(5.4)上使样液以小于2mL/min的流速通过OasisHLB柱，待样液全部通过固相萃取柱后用6mL水洗固相萃取柱
10、，弃去全部流出液。用真空泵(5.7)在65kPa负压下抽干OasisHLB固相萃取柱10mino再用4mL乙酸乙醋(4.3)洗脱被测物，洗脱液全部收集于25mL棕色离心管中，并在氮气吹干仪(5.5)上400C水浴吹干，1mL样品定容液(4.14)定容。定容液1昆匀后过O.45m滤膜(4.16) ，滤液供液相色谱-串联质谱测定。7.3 测定7.3. 1 液相色谱条件a) 色谱柱:ZORBAXSB-C18 , 3. 5m，150 mmX2. 1 mm(内径)或相当者pb) 柱温:30oC;c) 进样量:40L;d) 流动相及流速见表1。表1液相色i曾梯度洗脱条件时间/min流速/(L/min)0.
11、4%乙酸水溶液/(%)乙脯/(%)0.00 200 70 30 3.00 200 70 30 3.01 200 20 80 8.00 200 20 80 8.01 200 70 30 15.00 200 70 30 7.3.2 质谱条件a) 离子源:电喷雾离子源(ESI); b) 扫描方式:正离子扫描;c) 检测方式:多反应监测(MRM); d) 电喷雾电压(1曰:5500 V; e) 雾化气(NEB)压力:0.076MPa; f) 气帘气(CUR)压力:0.069MPa; g) 碰撞气(CAD)压力:0.030MPa; h) 辅助气(AUX)流速:7L/min; 辅助气温度(TEM):500
12、oC; j) 聚焦电压(FP):200 V; k) 碰撞室出口电压(CXP):11 V; 1) Ql，Q3均为单位分辨率(UNIT); m) 定性离子对、定量离子对、采集时间(DwelD、去簇电压(DP)及碰撞能量(CE)见表2。3 GB/T 18932.24-2005 表2四种硝基映喃代谢物的质i普参数硝基峡喃代谢物名称5-甲基吗琳-3-氨基-2-瞠烧基嗣衍生物氨基腺衍生物I-氨基-2-内服服衍生物3氨基2喽烧基酣衍生物7.3.3 液相色谱-串联质i蕾测定7.3.3.1 定性测定在相同试验条件下，样子相对丰度比相一致，则对丰度比见表305-甲基吗琳3氨氨基腺衍生物1氨基-2-内航腺7.3.3
13、.2 定量测在仪器最佳积为纵坐标，1i昆合品溶液中待测物的参见图A.l。四种7.4 平行试验按以上步骤，对同7.5 空白试验除不称取试样外，均8 结果计算结果按(1)式计算:式中z定性离子对/Cm/ z) 335 / 291;335/128 209 /1 92;209/ 166 249 / 134;249/ 178 定量离子对/I采集时间/I去簇电压/I碰撞能量/Cm/ z) ms V V 335 / 291 100 60 32;18 209 / 166 200 55 17;15 24 9/ 134 I 200 70 22 ;19 100 65 19;20 保留时间，并且所选择的离参考保留时间
14、和离子相保留时间/mm 2.84 4.40 4. 92 6.82 别进样，以峰面品进行定量，样物质总离子流图. ( 1 ) X一一试样中被测组分残留量，单位为微克每千克(g/kg); 4 C 一一从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升(ng/mU;V-样品溶液最终定容体积，单位为毫升(mL); m一一样品洛液所代表最终试样的质量，单位为克(g)。注:计算结果应扣除空白值。GB/T 18932.24-2005 9 精密度本部分的精密度数据是按照GB/T6379的规定确定的，重复性和再现性的值以95%的可信度来计算。9. 1 重复性在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不
15、超过重复性限(吵，蜂蜜中四种硝基吱喃代谢物的含量范围及重复性方程见表4。如果差值超过重复性限，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。9.2 再现性在再现性条件下，获得的两次代谢物的含量范围及再现性方再现性限(R)，蜂蜜中四种硝基映喃3氨基注:m为两再现性R5 8的十0.0119 3 19 m一O.798 2 5 GB/T 18932.24一20056 附录A(资料性附录)四种硝基眼睛代谢物标准物质总离子流圄四种硝基映喃代谢物标准物质总离子流图见图A.10 2.84 1. 5e5 1. 4e5 1. 2e5 1. Oe5 11 6.0e4 4.0e4 2.0e4 0.0 2 3 2.84
16、min为5-甲基吗琳-3-氨基-2-嗖婉基阁$4.40 min为氨基腺;4.92 min为1-氨基-2内酸腺p6.82 min为3-氨基-2-唾烧基酬。4 5 6.82 6 7 8 圄A.1四种硝基睐喃代谢物标准物质总离子流固9 10 t /min 附录B(资料性附录)回收率GB/T 18932.24一2005本方法中四种硝基映喃代谢物的添加浓度及其平均回收率的试验数据见表B.1o裴B.1四种硝基映喃代谢物的添加浓度及其平均回收率的试验数据硝基峡喃代谢物名称添加浓度/Cg/kg) 回收率/c%) 0.2 96. 7 0.4 93.0 5-甲基吗琳-3-氨基-2-嗖烧基酣2 90.9 4 89.
17、 5 0.5 96.4 1. 0 93.3 氨基腺5.0 88. 7 10 88.9 0.5 97.5 1. 0 93.8 1-氨基-2-内酷腺5.0 91. 9 10 87.3 0.2 92. 9 0.4 92.6 3-氨基-2幢幢炕基翻2 89.6 4 88. 1 L-mCON-H可N.Ng户同筒。华人民共和国家标准蜂蜜中眠喃它酣、映喃西林、映喃妥因和映喃瞠酣代谢物残留量的测定方法液相色i曾-串联质谱法GB/T 18932. 24-2005 国中头中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销峙印张O.75 字数13千字2005年2月第一次印刷开本880X1230 1/16 2005年2月第一版定价10.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533岳书号:155066 1-22371
