1、ICS 67. 180. 10 X 31 道冒中华人民共和国国家标准GB/T 18932.27-2005 蜂蜜中泰乐菌素残留量测定方法酶联免疫法Method for the determination of tylosin residue in honey一Enzyme-Iinked immunosorbent assay method 2005-02-04发布2005-08-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检瘦总局砸士中国国家标准化管理委员会a叩050928068712 中华人民共和国国家标准蜂蜜中泰乐菌素残留量测定方法酶联免疫法GB/T 18932.27-2005 ￥中国标准出版社出
2、版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045 网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销4传开本880X12301/16 印张0.5字数8千字2005年2月第一版2005年2月第一次印刷等书号:155066 1-22374 定价8.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533 前言GB/T 18932本部分的附录A为资料性附录。本部分由中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局提出。本部分由中华全国供销合作总社归口。本部分起草单位:中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局。本部分主要起草人z庞国芳、付
3、宝莲、张进杰、肖艳霞。本部分系首次发布的国家标准。GB/T 18932.27-2005 1 范围蜂蜜中泰乐菌素残留量测定方法酶联免疫法GB/T 18932的本部分规定了蜂蜜中泰乐菌素残留量酶联免疫测定方法。本部分适用于蜂蜜中泰乐菌素残留量的测定。本部分的方法检出限:泰乐菌素为10.0g/址。2 规范性引用文件GB/T 18932.27一2005下列文件中的条款通过GB/T18932的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最
4、新版本适用于本部分。GB/T 6379测试方法的精密度通过实验室间试验确定标准测试方法的重现性和再现性(GB/T 6379-1986,neq ISO 5725:1981) GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682-1992 , neq ISO 3696: 1987) 3 原理试样中残留的泰乐菌素与试剂盒中的泰乐菌素酶标记物共同竞争泰乐菌素抗体，形成的酶标记抗原抗体复合物与显色剂发生反应，用酶标仪测定吸光度，根据吸光度值得出试样中泰乐菌素的含量。4 试剂和材料4. 1 泰乐菌素试剂盒:4. 1. 1 96孔板:12条X8孔。4.1.2 泰乐菌素标准溶液。4. 1. 3
5、标准和样品缓冲榕液z浓缩液。4.1.4 泰乐菌素酶标记物。4. 1.5 酶标记物缓冲榕液。4. 1.6 洗板溶液z浓缩液。4. 1.7 显色剂。4.1.8 反应停止液。4.2 缓冲榕液z将标准和样品缓冲溶液(4.1.3)按泰乐菌素试剂盒(4.1)中规定的比例用水稀释，棍匀后备用。4.3 泰乐菌素标准工作溶液z根据泰乐菌素试剂盒的线性范围，用稀释的缓冲溶液(4.2)将泰乐、菌素标准溶液(4.1.2)稀释成不同浓度(g/L)的标准工作溶液。每次测定均应现配现用。4.4 泰乐菌素酶标记物溶液z根据泰乐菌素试剂盒中说明，用酶标记物缓冲溶液(4.1.5)将泰乐菌素酶标记物(4.1.4)榕解，混匀后备用。
6、4.5 洗板工作溶液:将洗板溶液(4.1.6)按泰乐菌素试剂盒中规定的比例用水稀释，混匀后备用。4.6 7.J : GB/T 6682规定的一级水。GB/T 18932.27一20055 仪器5.1 酶标仪。5.2 8道移液器:50L300L。5.3 单道移液器:5L50L，100L1 000L和2mL10 mL。5.4 液体棍匀器。5. 5 离心机。5.6 注射过滤器:2mL，并带有孔径为0.45m的水相针头式过滤膜。5. 7 具塞试管:10mL, 20 mL。6 试样的制备与保存6. 1 试样的制备7 分析步骤7. 1 提取称取1g试样，快速1昆匀1min，使、过滤至10mL的具7.2 测
7、定条件以下所有操作应7.2. 1 酶标仪测定条17.2.2 7.2.3 7.3. 1 分别吸取50L泰乐菌素标孔底部。体?昆匀器上注射过滤器7.3.2 分别吸取100L泰乐菌素酶标记物恪液(4.4)于每一个微孔底部，然后，用封口膜密封孔口以防溶液挥发。持微孔板在台面上以圆周运动方式混匀后，于20.C24.C避光孵育10min。7.3.3 倒出孔中的液体，将微孔架反扣在吸水纸上反复拍打，以除去孔中过多的残液，但不能使微孔干燥，然后，立即用洗板工作溶液(4.5)按7.2.2要求进行洗板，每次弃去洗板榕液后，均应将微孔架反扣在吸水纸上反复拍打，以除去孔中过多的残液，但不能使微孔干燥。7.3.4 迅速
8、加入100L显色剂(4.1.7)于每一个微孔底部，然后，持微孔板在台面上以圆周运动方式温匀后，于20.C24.C避光孵育10min。7.3.5 迅速加入100JlL反应停止液(4.1.8)于每一个微孔底部，然后，持微孔板在台面上以圆周运动方式海匀后，将微孔架置于酶标仪中，在450nm处测量吸光度(加入反应停止液后应在60min内读取GB/T 18932.27一2005吸光度)。7.4 平行试验按以上步骤，对同一标准、同一样品榕液均应进行平行试验测定。7.5 空白试验除不称取试样外，均按上述步骤进行。7.6 监控试验每次测定均应做一个添加泰乐菌素标准的显色剂样品。8 结果计算在半对数坐标纸上，以
9、吸光度值为纵坐标(%)，泰乐菌素标准工作溶液浓度(g/L)为横坐标，绘制标准工作曲线。从标准工作曲线上得到试样中相应的泰乐菌素浓度后，结果按公式(1)计算:式中zx = c.互.L旦旦旦m 1000 X一一试样中泰乐菌素残留量，单位为微克每千克(g/kg);C一一从标准工作曲线上得到的试样中泰乐菌素浓度，单位为微克每升(g/L); V一一样品榕液的体积，单位为毫升(mL); m一一样品榕液所含的试样质量，单位为克(g)。结果表示到小数点后两位。注g计算结果应扣除空白值。9 确证试验如被测样品中泰乐菌素残留量的值大于检出限时，应用LC-MS-MS法进行确证。10 精密度( 1 ) 本部分的精密度
10、数据是按照GB/T6379的规定确定的，其重复性和再现性的值是以95%的可信度来计算。10. 1 重复性在重复性条件下，蜂蜜中泰乐菌素的含量在10.0问/kg-100.0g/kg范围时，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限(r)，本部分的重复性限按方程式(2)计算:19 r = 1. 285 5 19 m - 1. 752 9 . ( 2 ) 式中zm一一两次测定值的平均值，单位为微克每千克(g/kg)。如果差值超过重复性限，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。10.2 再现性在再现性条件下，蜂蜜中泰乐菌素的含量在10.0g/kg-100.0g/kg范围时，获得的两次独立测试
11、结果的绝对差值不超过再现性(岛，本部分的再现性限按方程式(3)计算zR = 0.121 7 m十0.7176 ( 3 ) 式中zm一一两次测定值的平均值，单位为微克每千克(g/kg)0 的CON-hN.N的户GB/T 18932.27一2005附录(资料性附录)回收率A 同阁。本方法中泰乐菌素添加浓度及回收率的试验数据z在添加量为10.0g/同时，平均回收率为97.20%。在添加量为30.0g/同时，平均回收率为102.50%。在添加量为50.0g/同时，平均回收率为97.80%。在添加量为100.0g/同时，平均回收率为104.35%。侵权必究 书号:155066. 1-22374 定价z8.00元版权专有GB/T 18932.27-2005
