1、ICS 67.180.10 X 31 f岳2一I. =1:1二./、王GB/T 18932.4 2002 环四、留目、强Method for the determination of oxytetracycIine , tetracycline, chlortetracycIine , and doxycycline residues in honey一Liquid chromatographic method 2002-12-30发布2003-06-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检痊总局发布一-GB/T 18932. 4-2002 古目GB/T 18932-2002分为12个部分，本
2、部分为第4部分。GB/T 18932的本部分是修改采用加拿大国家标准ACC-042-VI. 0(蜂蜜中四环素残留量测定一一高效液相色谱法.其修改的主要内容是:一一淋洗液由甲醇改为乙酸乙黯$一一增加了援酸型阴离子交换柱净化;一一质谱检测器或二极管阵列检测器改为紫外检测器。本部分遵循GB/T1. 1-2000 (标准化工作导则第1部分2标准的结构和编写规则和GB/T 20001. 4一2001(标准编写规则第4部分2化学分析方法的编写规则。本部分的附录A、附录B为资料性附录.本部分由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出。本部分由中华全国供销合作总社归口。本部分起草单位2中华人民共和国秦皇岛出
3、人镜检验检疫局.本部分主要起草人z庞国芳、曹彦忠、范春林、张进杰、李学民、林忠.本部分系首次发布的国家标准。前L一一范围蜂蜜中土霉素、四环素、金霉m、强力霉素残留量的测定方法在相色谱法GBjT 18932. 4-2002 GBjT 18932的本部分规定了蜂蜜中土霉素、四环索、金霉素、强力霉素残留量液相色谱测定方法。本部分适用于蜂蜜中土霉素、四环索、金霉素、强力霉素残留量的测定.本部分的方法检出限g土霉素、四环素、金霉素、强力霉素均为0.010mgjkg. 2 规范性引用文件下列文件中的条款通过GBjT18932的本部分的引用而成为本部分的条款.凡是注日期的引用文件.其随后所有的修改单不包括勘
4、误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本运用于本部分.GBjT 6379-1986 (neq IS 5725 :1 981) 测试方法的精密度通过实验室问试验确定标准测试方法的重复性和再现性GB/T 6682-1992 分析实验室用水规格和试验方法(neqIS 3696:1987) 3 原理试样中四环素族抗生素残留用0.1mol/L Na, EDTA-Mcllvaine(pH = 4. 0士0.05)缓冲浪液提取，经离心后，上消液用asisHLB或相当的困相萃取柱和阴离子交换柱净化，紫外检测器高效
5、液相色谱仪测定，外标法定量.4 试剂和材料除另有说明外，所用试m均为分析纯，水为GB/T6682-1992规定的一级水.4. 1 甲醇2一级色谱纯.4.2 乙脐z一级色谱纯.4.3 乙股乙1!1l:重蒸馄.4.4 磷股氢二锅(Na，HP. 2H，):优级纯.4.5拧股(C，H， H, ). 4.6 乙二胶囚乙酸二钩(Na，EDTA.2H,). 4. 7草E盘。4. 8 磷酸氢二制溶液:0.2mol/L.称取28.41g磷酸氢二纳(4.的，用水溶解，定容至1000 mL。4.9 拧饺股溶液:0.1 mol/L.称取21.01 g拧核酸(4.5) .用水溶解，定容至1000mL. 4. 10 Mc
6、llvaine缓冲溶液g将1000 mL O. 1 mol/L拧核酸然液(4.的与625mL O. 1 mol/L磷酸氢二纳洁液(4.8)混合，必要时用氮氧化纳或盐酸榕液调节pH=4.0+0. 05. 4. 11 Na, EDTA-Mcllvaine绥冲溶液:O. 1 mol/L。称取60.5 g乙二胶四乙酸二销(4.6)放入_., 一一一 G/T 18932.4-2002 1 625 mL Ilcllvaine缓冲溶液(4.10)中，使其溶解，摇匀。4. 12 甲西?+水(1+19)，最l&.5 mL甲醇(4.1)与95mL水混合.4. 13 Oasis H LIl固相萃取位或相当者，500
7、mg, 6 mL，使用前分别用5mL甲醉和10mL水预处理，保持ttf丰湿润。4. 14 日j离子交换柱2括:酸型.500m日，3mL，使用前用5mL乙酸乙酣预处理，保持住体湿润.4. 15 土霉素、四町、素、金霉素、强力霉素标准物质=纯度95%。4. 16 土霉素、四环索、金霉素、强力霉素标准溶液，0.1 mg/mL。准确称取适量的土笃素、四环素、金霉素、强力霉素标准物质(4.15)，分别用甲醉配成0.1mg/mL的标准储备液.储备液贮存在-18C根据需要用流动相逐级稀释成适当浓度的混合标准工作溶液，混合标准工作溶液在4C保存，可使用3夭。5 5 1 5. 2 5. 3 5. 4 5 5 5
8、. 6 5. 7 5. 8 仪器高效?在相色谱仪2配有紫外检测器.分析天平z!感量0.1mg,O. 01日。液体混匀器。固相萃取真空装置。贮液S,50 mLo 微h1注射it，25L，100L。要IJ度样品管:5mL，精度为O.1 mLo 真空泵z真空度应达到80kPa, 5. 9 离心管，50mLo 5. 10 平底烧瓶，100mLo 5. 11 pH计:测量将度士0.02。6 试样的制备与保存6. 1 试样的制备对无结晶的实验室样品，将其搅拌均匀。对有结晶的样品.在密闭情况下，置于不超过60C的水浴中温热.振荡，作样品全部融化后搅匀，迅速冷却至室温。分出0.5kg作为试样.和l备好的试样置
9、于样品瓶中.密封，并标明标记.6.2 试样保存将试样于常温下保存.7 测定步骤7. 1 提取称取6g试样，fri lijfJ到0.01日.置于150mL三角瓶中.加入30mL Na，EDTA-Mcllvaine缓冲溶液(4.11)，于液体混匀iI&上快速混合1min.使试样完全m解。样液jJ人50mL离心管中，以3000 r/min 离心5mm.待泞化。7.2 净化将上消液(7.1)倒入下t1:Oasis HLIl柱或相当者(4.13)的贮液器中.上清液以3mL/min的流速通过Oasis或相当的回相萃取柱，1.1上清液完全流出后，用5mL甲醉+水(4.12)洗柱，弃去全部流出液。在65kPa
10、的负压下，减压抽干20min.最后用15mL乙酸乙酣(4.3)洗脱，收集洗脱液于100mL 囚底烧瓶中。但按上述方法使洗脱液(7.2)在附压情况下以3mL/min的流速通过阴离子交换柱(4.14)，待洗脱G/T 18932. 4-2002 液全部流出后，用5mL甲醇(4.1)洗柱，弃去全部流出液。在65kPa负压下.压抽干5min，再用4 mL流动相洗脱，收集洗脱液于5mL样品管中，定容至4mL.供相色谱仪测定.7.3 测定7. 3. 1 液相色谱条件a) 色谱拄2BondapakC18 .10.300 mmX3. 9mm或相当者，b) 流动相z乙肪+甲醉+0.01mol/L萃酸溶液(20+1
11、0+70.)，d 流速，1.5 mL/min, d) 柱温，25C, e) 检测波长，350nm, f) 进样:fi!: 100L. 7.3.2 液相色谱il!J,g 根据样品m液中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素含量的情况.选定峰高相近的标准工作溶液，标准工作浴液和样品溶液中土霉素、四环索、金霉素、强力霉素的响应值均应在仪器测定的线性范围内.对标准工作榕液和样品溶液等体和、参插进行测定.在上述色谱条件下，土霉素、四环素、金霉素、强力霉素色话峰的分离度应大于1.2.其参考保留时间如下.药物名称土霉素四环素保留时间/min4.0 4.8 金霉素9.6 强力霉素14.0 土霉素、四环索、金霉素、强
12、力霉素标准物质色谱图见附录A中的图A.l.本方法的添加回收率数据参见附录B。7.4 平行试验按以上步骤对同一试样进行平行试验测定.7.5 空自试验B 9 除不称取试样外，均按上述步骤进行.结果计算结果按式()计算:式中=x=!:.之二Xhs m X一一试样中被测组分残留置，单位为毫克每千克(mg/kg), h一一样品溶液中被测组分的峰高，单位为毫米(mm), C军一一标准工作洛液中被测组分的浓度，单位为微克每毫升(g/mL), V一一样品在军液定容体积.单位为毫升(mL), hf一标准工作溶液中被测组分的峰高，单位为毫米(mm)，m一一所称样品的质量，单位为克(g)。注z计算结果应扣除空白值.
13、精密度. ( 1 ) GB/T 18932的本部分精密度数据是按照GB/T6379-1986的规定.通过13个实验室对四个添加3 一G/T 18932.4-2002 水平的试样所做的试验中确定的。获得重复性和再现性的值是以95%的可信度来计算.9. 1 重复性在重复性条件下.获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限(吵，蛇蜜中土霉素、四环索、金霉素、强力霉素的含量范围及重复性方程见表1, 表1含量范固及重复性和;再现性方程单位为毫克每千克名称含量范围/(mg/kg)重复性限r再现性限R土霉素0.010-0.20 Igr=O. 852 0 Igm一1.530 7 IgR=O. 9393 1
14、9m-O. 9810 四环章0.010-0.20 Igr=0.52421gm- 1. 9931 IgR=O. 8693 19m-O. 8950 金霉素0.010-0.20 r=O. 026 7 m-O. 001 2 IgR= 0.727 1 Igm- 1. 145 5 强力霉素0.010-0.20 r=0.023 6 m-O.口035 IgR=O. 6227 19m一1.271 6 注，m为两次测定结果的算术平均值.如果差值超过重复性限，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定.9.2 再现性在再现位条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限(R)，蜂蜜中土霉素、四环素、金霉素、
15、强力霉素的含量范围及再现性方程见表1， 4 G/T 18932. 4一2002附录资料性附录A 标准物质色谱图0.0040 KN。，0.0038 Q.0036 0.0034 0.0032 0.0030 0.0028 0.0026 0.0024 hmwLR.-T 0.0022 0.0020 0.0018 0.0016 0.0014 0.0012 为土霉章为四环章为金霉置为强力霉章4.027 min 4.757 min 9.578 min 14.015mn EOJZ mLF囚。0.0010 0.0008 0.0006 0.0004 0.0002 0.0000 16.00 町土霉素、四环索、金霉素、
16、强力霉素标准物质色谱图14.00 12.00 10.00 8.00 6.00 4.00 2.00 图.1 -0.0002 5 G/T 18932 4-2002 6 附录B资料性附录)回收率本方法中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素添加浓度及其回收率的试验数据，见表B.10 表.1 药物名称t在加It(度/(mg/kg)回收率/(%) 0.010 87.8 土霉素0.050 93.0 0.50 99. 5 0.010 89.0 囚环素0.050 87. 2 。.5093.3 。.01084. 6 主霉素0.050 80.9 0.50 87.5 0.010 97.1 强力霉素0.050 85.6 O. 50 85.3 NOON 叮.N的白户民共因家标准蜂蜜中土霉素、囚环索、金霉素、强力霉素残留量的测定方法液相色谱法Gll/T 18932.4-2002 【筐。国和人i 中.唾中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码，100045电话，6852394668517548 中国标准出版社辜皇岛印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经售字数14千字* 印张3/41/1 6 开丰880X 1230 2003年3月第一次印刷2003年3月第一版印数1-400* 书号，155066. 1-19296 网址版权专有侵权必究举报电话:(010)6日533533
