1、ICS 67.180.10 X 31 f占2一斗A.=H二/、王门王GB/T 18932. 5 2002 日恶、留目Method for the determination of sulfacetamide,sulfapyridine, sulfamerazine, sulfamethoxypyridazine, sulfameter, sulfachloropyridazine, sulfamethoxazole and sulfadimethoxine residues in honey一Liguidchromatographic method 2002-12-30发布2003-06-01
2、实施-AVd叫dvpJE -中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布L一一一一一G/T 18932. 5-2002 前GB/T 18932-2002分为12个部分，本部分为第5部分.GB/T 18932的本部分修改采用加拿大国家标准ACC-019-V3.0蜂蜜中磺胶哇哇和政胶类兽药残留量测定方法一一高效液相色谱荧光法队修改的主要内容是:一一-测定品种所有调整s一一增加了苯磺殴型阳离子交换柱和OasisHLB柱净化步骤g一一使用的液相色谱柱和流动相不同.本部分遵循GB/T1. 1-2000标准化工作导则第1部分s标准的结构和编写规则和GB/T 20001. 4-2001标准编写规则第4部分z化
3、学分析方法的编写规则。本部分的附录A、附录B为资料性附录.本部分由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出.本部分由中华全国供销合作总社归口.本部分起草单位g中华人民共和国秦皇岛出人就检验检疫局.本部分主要起草人2庞国芳、曹彦忠、范春林、张进杰、李学民、林忠.本部分系首次发布的国家标准.G/T 18932. 5-2002 氧甲服中醋氯甲蜜应蜂酣、明肢E比脏、磺肢甲基、E黄眼对甲氧晤脏、阴阳甲基异口恶瞠、磺肢二眩睫残留量的测定方法液相色谱法1 范固GB/T 18932的本部分规定了蜂蜜中磺胶醋股、联胶毗院、破肢甲基II!;院、磺胶甲氧眩嗦、磺胶对甲氧眩院、iji胶氯昵嗦、愤胶甲基异口恶也、磺胶
4、二甲氧略院残留量液相色谱测定方法.本部分适用于蜂蜜中磺胶il酸、政胶毗院、政胶甲基II!;皖、政肢甲氧眩嗦、磺胶对甲氧暗院、政胶氯由主嗦、磺胶甲基异略略、磺胶二甲氧眩咬残留莹的测定.本部分的方法检出限z磺胶醋肤、政胶毗院、政胶甲基II!;吭、磺胶甲氧盹嗦、磺胶对甲氧喀庭、磺胶氯自主嗦、政胶甲基异略哇、磺胶二甲氧喀吭均为0.010mg/kg. 2 规范性引用文件下列文件中的条款通过GB/T18932的本部分的引用而成为本部分的条款.凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的
5、引用文件，其最新版本适用于本部分.GB/T 6379一1986测试方法的精密度迈过实验室间试验确定标准测试方法的重复性和再现位(neq ISO 5725:1981) GB/T 6682一1992分析实验室用水规格和试验方法(neqISO 3696: 1987) 3 原理试样中磺胶类药物残留用磷般在军液(pH=2)提取，过滤后.经阳离子交换柱和OassHLB或相当的团相萃取柱净化，用甲醉洗脱并蒸干，残滥用。.1mol/L盐股浓液溶解.用荧光肢衍生后，样品溶液供配有荧光检测的高效液相色谱测定，外标法定量.4 试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682-1992规定的一级水.4
6、. 1 甲醉z一级色谱纯.4.2 乙腊s一级色谱纯.4.3 磷酸g优级纯.4. 4 庆倪磺酸的(c，H NaO, S H2 0):一级色谱纯.4.5 盐股.4.6 乙酸纳.l G/T 18932. 5-2002 4.7 4.8 丙阁。荧光胶.4.9 磷酸二氢例:优级纯。4. 10 磷酸氢二何z优级纯.4. 11 磷酸洛液:pH=2.1000 mL水中加人1mL 磷酸(4.3) ，在pH计上再滴加磷酸以调节溶液pH=2. 4. 12 磷酸盐缓冲溶液:0.2moI/L，pH=8.分别称取1.05 g磷酸二氢梆(4.9)和33.46 g磷酸氢二何(4.10) ，用水游解，定容至1000mL 4. 1
7、3 庚饺磺酸锅溶液:o. 5 moI/L。称取llg庚烧磺酸纳(4.4).用水溶解，定容至100 mL. 4. 14 盐酸溶液:0.1 mol/L。吸取盐酸(4.5)8.25mL用水稀释至1000 mL. 4. 15 乙酸纳缓冲溶液:0.6mol/L。称取4.92g乙酸制(4.6) ，用水溶解，定容100mL.并用盐l!li调至p!l=3.0. 4. 16 荧光胶丙翻滚液:0.02%.称10.0mg荧光胶(4.8)，用丙阴溶解，定容至50mL.溶液有效期为30天。4. 17 阳离子交换柱g苯磺酸型，500mg , 3 mL。用前分别用5mL甲醉和10mL水处理，保持柱体湿润.4. 18 Oas
8、is HLB位或相当者:60mg.3 mL.用前分别用3mL甲醇和6mL水处理，保持柱体湿润.4. 19 磺胶酣肤、破股毗皖、硕胶甲基暗院、磺胶甲氧隧嗦、磺胶对甲氧瞎咬、磺胶氯盹嗦、磺胶甲基异嗯瞠、硕胶二甲氧略咬标准物质g纯度二99%.4.20 磺胶醋肤、政胶毗皖、质胶甲基暗院、政胶甲氧隧嗦、磺胶对甲氧暗咬、磺胶氯隧嗦、磺胶甲基异略嗖，1Ii胶二甲氧晤皖标准溶液:o. 1 mg/mL.准确称取适量的每种磺胶标准物质，用甲醉配成0.1 mg/mL的标准储备液。根据需要用流动相或O.1 mol/L盐酸溶液稀释成混合标准工作溶液.5 5 1 5.2 5. 3 5. 4 5.5 5. 6 5. 7 5
9、.8 仪器高效液相色谱仪z配有荧光检测器.囡相萃取真空装置.旋转蒸发器.玲却吸气机.液体混匀L分析天平z感是0.1mg , O. 01g. 冷热恒温水浴z精度士O.5.C. 真空泵.5. 9 微量注射器:25L.100L.5. 10 移液1i:O.2 mL,1 mL,2 mL. 5. 11 鸡心瓶:150 mL. 5. 12 样品瓶:2mL.带聚囚氟乙烯旋盖.5. 13 玻璃贮液器:50mL. 5. 14 pH计g测量精度:1:0.02.6 试样串j备与保存6. 1 试样的制备对无结晶的实验室样品，将其搅拌均匀.对有结品的样品，在密闭情况下，置于不超过60.C的水浴中温热，振荡，待样品全部融化
10、后搅匀，迅速冷却至室温.分出0.5kg作为试样.制备好的试样置于样品瓶中.密封，并标明标记.6.2 试样的保存将试样子常沮下保存。7 测定步骤7. 1 提取G/T 18932. 5-2002 称取5g试样，精确至O.01 g.置于150mL三角瓶中.加入25mL磷酸溶液(4.11)，于液体混匀器上快速混匀1min，佼试样完全溶解.7.2 净化将塞有玻硝棉塞的玻硝贮液连到阳离子交换柱上，把样液(7.1)倒入玻稿贮液器中，在减压情况下佼样液以;3mL/min的流速通过苯磺酸型阳离子交换柱，待样液完全流出后，分别用5mL磷酸溶液和5mL水洗柱，弃去全部流出液。最后用40mL磷般盐缓冲溶液(4.12)
11、洗脱，收集洗脱液于100 mL平底烧瓶中.在洗脱液中加入1.5 mL庆饺磺酸钩溶浓(4.13)，然后用磷股(4.3)词至pH=6.按上述方法将调好pH的洗脱液过OasisHLB或相当的固相萃取柱，调节流速;3mL/min，待洗脱液完全流出后，再用3mL水洗柱，弃去全部流出液.在65kPa负压下，减压拍干5min，最后用10 mL甲醇(4.1)洗脱，洗脱液收集于150mL鸡心瓶中.用旋转蒸发器于45C水浴中减压蒸发至干.准确加入1.0 mL盐酸溶液(4.14)洛解残渣，待衍生.7.3 衍生化用1mL移液器准确移取0.5mL样品溶液(7.2)或标准黯液，放入2mL样品瓶中，加入0.5mL 乙般的缓
12、冲熔液(4.15)，拧好旋羞，摇匀.再加入0.2mL荧光胶丙回溶液(4.16)，再拧好旋盖，摇匀，放入18C水浴中衍生30min.衍生后的样品溶液用液相色谱荧光检测器测定。7.4 色谱测定7. 4. 1 波相色谱条件a) 色诸位:Symmetry Shield PR18, 5m，3.9 mmX 150 mm戎相当者sb) 流动相z乙腊+0.01mol/L 磷殷二氢何溶液(27+73)，流速:1.0mL/min , c) d) 检测波长2激发波长405nm，发射波长495nm, e) 柱混:55 C , f) 迸样量2100L.7.4.2 液相色谱到定根据样液中礁胶类药物种类和含量情况，选定峰高
13、相近的标准工作溶液.标准工作溶液和样品溶液中磺胶类药物的响应值均应在仪器测定的线性范围内.对标准工作溶液和样品在于液等体积参插进行测定.在上述色谱条件下，八种磺胶类药物色谱峰的分离度应大于1.其出峰顺序和参考保留时间如下.药物名称保留时间/min磺胶醋股9. 1 胶毗院9.9 磺胶甲基III咬11. 1 政胶甲氧眩嗦13.5 胶对甲氧喀咬15.3 砍胶氯险嗦16. 6 磺胶甲基异哪瞠20.4 胶二甲氧畸咬29.4 八种磺胶标准物质色谱图见附录A中图A.l.3 G/T 18932. 5-2002 本方法的添加囚收率数据参见附录B.7.5 平行试验按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。7.6 空
14、白试验除不称取样品外，均按上述步骤进行.B 结果计算结果按式(1)计算2V一-m 一- Th zn-= X .( 1 ) 式中2X一一试样中被测组分残留盘，单位为毫克每千克(mg/kg)I h-一一样品溶液中被测组分的峰高，单位为毫米(mm)，C，一一标准工作溶液中被测组分的浓度，单位为微克每毫升(g/mL)号V一一样品溶液定容体积，单位为毫升(mL), h.一-标准工作洁液中被测组分的峰高，单位为毫米(mm)，m-一-Ji厅称样品的质量，单位为克(g).注.计算结果应扣除空白植.9 精密度GB/T 18932的本部分精密度数据是按照GB/T6379一1986的规定，通过13个实验室、四个添加
15、水平的试样所做的试验中确定的.获得重复性和再现性的值是以95%的可信度来计算.9. 1 重复性在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的测定值，在以下给出的平均值的范围内，这两个测试结果的绝对差值不超过重复性限(r)，蜂蜜中m胶醋肤、政胶毗院、政胶甲基暗院、磺胶甲氧贴嗦、政胶对甲氧昭院、m胶氯险嗦、m胶甲基异口恶瞠、政胶二甲氧暗院含量范围及重复性方程见表1.表1含量范国及重复性和再现性方程单位为毫克每千克名称古E范围/(mg/kg)重复性限F再现住眼R磺胶黯眈0.010-0.20 19r= 1. 0167 19m-O. 905 2 R=O. 2520 m+O. 001 3 政胶口比咬。.010-
16、0.20Igr=O. 8512 Igm-1. 158 2 IgR=O. 878 3 Igm-O. 991 0 质股甲基眩睫0.010-0.20 Igr=O. 6858 Igm-1. 4476 IgR=O. 821 71gm一1.042 2 磺胶甲氧盹嗦0.010-0.20 Igr= 1. 0516 Igm-O. 8977 IgR=O. 7816 Igm-O. 989 1 磺胶对甲氧唔旋0.010-0.20 Igr=O. 9547 Igm-O. 9971 IgR=O. 7902 Igm-O. 9530 磺胶氯自主嗦0.010-0.20 Igr=O. 615 1 Igm一1.394 0 R=0.1
17、46 4 m+O. 001 5 磺胶甲基异g也0.010-0.20 Igr=O. 6742 Igm-1. 2860 IgR=O. 826 8 Igm-O. 836 2 磺胶二甲氧略院0.010-0.20 Igr=O. 999 8 Igm-O. 914 3 IgR=O. 9109 Igm-O. 891 5 注，m为两次测定结果的算术平均值.如果差值超过重复性限(疗，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定.9.2 再现性在再现住条件下，获得的两次独立测试结果的测定值，在以下绘出的平均值的范回内，这两个测试结果的绝对差值不超过再现性限(R)，蜂蜜中磺胶醋肤、政胶毗院、磺胶甲基暗咬、磺胶甲氧啦嗦、
18、政胶对甲氧眩院、磺胶氯盹嗦、硕胶甲基异昭瞠、m胶二甲氧暗旋的含量范围及再现性方程见表1.4 1 G/T 18932. 5-2002 附录资料性附录l标准物质色谙图A 0.40 0.20 0.00 -0.20 -0.40 为磺眩酷限ohm-凹峙。-m-mw-0.60 的00-0.80 -1. 00 为磺肢唯R磺眩甲革嘈庭为磺肢甲氧隧曙为磺眩时甲氧吧睫为磺肢氧耻嚓为磺肢甲革异咽哩为磺眩二甲氧嘈眶9.053min 9.898min l t. 170min 13. 532min 15. 289min 16.811 min 20. 386min 29.409min aodymN 也肉。N同同团，-。EN
19、e的时N凹的阴阳-1. 20 -1. 40 -1. 80 -1. 60 -2.00 -2.20 -2.40 -2.60 5 m n 21 3m Mm g m2 6 2m 4 回22 囚m g -m 6 01 0 4 1 2 1 0 0 0。0 0 6 m 4 m z 图A.1 八种磺肢标准物质液相色谱图 -2.80 GjT 18932. 5一2002附录B资料性附录回收$本方法中Ji胶Ul:、政胶毗院、磺胶甲基略院、政胶甲氧即生嗦、政胶对甲氧暗皖、wi胶氯贴嗦、政胶甲装异嗯瞠、wt胶二甲氧暗咬添加浓度及其回收率的试验数据，见表B.L表.1 药物名称添加浓度I(mg/kg)回收率1(%)0.01
20、0 81.4 股股!l酸0.050 88.6 0.20 88.2 0.010 81. 1 股01比咬0.050 85.4 0.20 86.7 0.010 81. 6 E黄股甲基畸睫0.050 84.8 0.20 88.8 0.010 84.2 磺胶甲氧眩嚓0.050 84.6 0.20 83.7 0.010 80.9 磺眩对甲氧暗昵0.050 86.2 0.20 87.8 0.010 78.0 磺胶氯咕嚓0.050 82.4 0.20 84.6 0.010 84.4 股股甲基异昭瞠0.050 89.2 0.20 85.3 0.010 79.9 胶二甲氧嗒咬0.050 85.4 0.20 85.
21、2 NOON 的.NmmFH白。华人民共和国家标准蜂蜜中磺肢醋散、磺眩目比晓、磺胶甲基瞪院、磺胶甲氧lIi5蝶、磺眩对甲氧咆院、磺胶氯P达蝶、磺胶甲基异P!i!瞠、磺胶二甲氧略院残留量的测定方法法相色谱法GB/T 18932. 5-2002 国中 中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码，100045电话，6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经售4峙开本880X 1230 1/16 印张3/4字数15千字2003年3月第一版2003年3月第一次印刷印数1-400 书号，155066. 1.19297 网址版权专有侵权必究举报电话:(010 )68533533
