1、ICS 67250C 53 a园中华人民共和国国家标准GBT 232961 52009食品接触材料 高分子材料食品模拟物中2，4，6一三氨基一1，3，5一三嗪(三聚氰胺)的测定高效液相色谱法Food contact materials-Polymer-Determination of 2，4，6-triamino-1，3，5一triazine(melamine)in food simulants-High performance liquid chromatography2009-03-3 1发布 2009-09-01实施宰瞀嬲紫瓣警糌瞥星发布中国国家标准化管理委员会厘11前 言GBT 232
2、96152009本标准参照欧盟技术规范CENTS 1313027：2005(食品接触材料及其制品 塑料中受限物质第27部分：食品模拟物中2，4，6-三氨基一1，3，5-三嗪(三聚氰胺)的测定(英文版)制定。本标准的附录A为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出。本标准由全国进出口食品安全检测标准化技术委员会(SACTC 445)归口。本标准起草单位为：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国湖北出入境检验检疫局、中华人民共和国山西出入境检验检疫局、国家环保产品质量监督检验中心。本标准主要起草人：陈志锋、崔海容、孙利、马钰、宋欢、李挥、张岩、张庆。食品接触材料 高分子材料食品模拟物中2
3、，4，6一三氨基一1，3，5一三嗪(三聚氰胺)的测定高效液相色谱法GBT 232961520091范围本标准规定了食品模拟物中三聚氰胺的测定方法。本标准适用于水、3(质量浓度)乙酸溶液、10(体积分数)乙醇溶液和橄榄油四种食品模拟物中三聚氰胺含量的测定。水、3(质量浓度)乙酸溶液和10(体积分数)乙醇溶液三种水基食品模拟物中三聚氰胺的测定低限为500 mgL，橄榄油中三聚氰胺的测定低限为400 mgkg。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究
4、是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法(GBT 6682-2008，ISO 3696：1987，MOD)GBT 232961 2009食品接触材料塑料中受限物质 塑料中物质向食品及食品模拟物特定迁移试验和含量测定方法以及食品模拟物暴露条件选择的指南3原理食品模拟物中的三聚氰胺通过高效液相色谱柱进行分离，采用紫外检测器进行检测。水基食品模拟物直接进样，橄榄油通过水一异丙醇溶液萃取后进样。采用外标法定量。4试剂和材料除另有规定外，水为GBT 6682规定的一级水，试剂均为分析纯。41三聚氰胺(C3H。N。，CAS号
5、：108781)，纯度大于99。42冰乙酸。43无水乙醇。44精制橄榄油。45乙腈(色谱纯)。46异丙醇。47异辛烷。48磷酸二氢钠一水合物(NaHzPqHzO)。49氢氧化钠。410 3(质量浓度)乙酸溶液：称取30 g(精确至01 g)冰乙酸(42)，移入1 L容量瓶中，用水定容。411 10(体积分数)乙醇溶液：量取100 mL无水乙醇(43)于1 L容量瓶中，用水定容。412 10(质量浓度)氢氧化钠溶液：称取10 g氢氧化钠(49)溶解在100 mL水中。GBT 23296152009413磷酸缓冲溶液(o005 molL，pH一65)：称取690 mg磷酸二氢钠一水合物(48)，用
6、900 mL水溶解，用10(质量浓度)氢氧化钠溶液(412)调整其pH=6502。414 10(体积分数)异丙醇溶液：量取10mL异丙醇(46)于100mL容量瓶中，用水定容。415三聚氰胺储备液(10 mgmL)：准确称取50 mg三聚氰胺于50 mL容量瓶中，精确至01 mg，加入40 mL水，在水浴(温度为70)中超声15 min30 min，使三聚氰胺能够充分溶解，冷却至室温后用水定容。在-2020条件下密封避光保存，3个月内浓度保持稳定。416水基食品模拟物配制的三聚氰胺标准溶液(o10 mgmL)：吸取5 mL三聚氰胺储备液(415)于50 mL容量瓶中，用水定容，混合均匀，得到水
7、中三聚氰胺浓度为01 mgmL。采用同样方式，分别用3(质量浓度)乙酸溶液(410)和10(体积分数)乙醇溶液(411)配制同样浓度的三聚氰胺标准溶液。417异丙醇一水混合溶液配制的三聚氰胺标准溶液：分别量取00 mL、05 mL、10 mL、20 mL、40 mL、80 mL三聚氰胺储备液(415)于25 mL容量瓶中，每个容量瓶中加入125 mL异丙醇，用水定容，得到三聚氰胺浓度分别为000 mgL、200 mgL、400 mgL、800 mgL、160 mgL、320 mgL。5仪器与设备51高效液相色谱仪：配置紫外吸收检测器。52超声恒温水浴。53离心机：转速大于4 000 rrain
8、。54分析天平：感量0000 1 g、001 g。6试液的制备61标准工作溶液的制备611水基食品模拟物标准工作溶液分别准确量取00 mL、10 mL、20 mL、40 mL、80 mL和120 mL三聚氰胺标准溶液(416)于6个20mL容量瓶中，用水定容，混合均匀，得到水中三聚氰胺浓度分别为000 mgL、500 mgL、100 mgL、200 mgL、400 mgL和600 mgL。采用同样方式，分别用3(质量浓度)乙酸溶液(410)和10(体积分数)乙醇溶液(411)配制同样浓度系列的三聚氰胺标准工作溶液。612橄榄油标准工作溶液分别准确称取5 g(精确至01 g)精制橄榄油(44)于
9、6个25 mL具塞试管中，向每个试管中依次加入1 mL异丙醇一水溶液配制的三聚氰胺标准溶液(417)，充分混合，得到橄榄油中三聚氰胺浓度为000 mgkg、400 mgkg、800 mgkg、160 mgkg、320 mgkg和640 mgkg。在每个试管中再加入5 mL异辛烷(47)和40 mL水，在恒温水浴中(温度70)超声萃取约30 min，然后离心3 min使两相分层，用移液器吸取下层水溶液2 mL，通过02 pm滤膜过滤后供高效液相色谱进样。62食品模拟物试液的制备621 总则食品模拟物试液应按照GBT 2329612009的要求从迁移试验中获取，应避光保存在4冰箱中。622水基食品
10、模拟物准确量取迁移试验中得到的水基食品模拟物约1 mL，通过02,um滤膜过滤后供高效液相色谱进样。平行制样两份。2GBT 23296152009623橄榄油准确称取迁移试验中得到的橄榄油模拟物5 g(精确至01 g)于25 mL具塞试管中，加入5 mL异辛烷(47)，充分混合，再加入50 mL 10(体积分数)的异丙醇溶液(414)，将试管放到恒温水浴中(温度70)超声萃取约30 rain，然后离心3 rain使两相分层，用移液器吸取下层水溶液2 mL，通过02,um滤膜过滤后供高效液相色谱进样。平行制样两份。63空白试液的制备按照62的操作处理未与食品接触材料接触的食品模拟物。7测定71测
11、定条件a)色谱柱：氨基柱，柱长200 mm，柱内径46 mm，粒度5 pm，或性能类似的分析柱；b)柱温：室温；c) 流动相：乙腈(45)一磷酸缓冲溶液(413)(75+25)；d)流速：1 mLmin；e)进样体积：20 pL；f)检测波长：230 12ITt。72绘制标准工作曲线按照71所列测定条件，对标准工作溶液(61)进行检测。以食品模拟物标准工作溶液中三聚氰胺浓度为横坐标，以对应的峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，得到线性方程。标准溶液色谱图参见附录A。按式(1)计算回归参数：Yaz+b (1)式中：Y食品模拟物标准工作溶液中三聚氰胺的峰面积；n回归曲线的斜率；-z食品模拟物标准工作
12、溶液中三聚氰胺浓度，单位为毫克每升或毫克每千克(mgL或mgkg)；6回归曲线的截距。73试液检测对空白试液(63)和食品模拟物试液(62)依次进样，扣除空白值，得到三聚氰胺色谱峰峰面积。8结果计算81 食品模拟物试液中三聚氰胺浓度的计算食物模拟物试液中三聚氰胺浓度C按式(2)计算。式中：c食品模拟物试液中三聚氰胺的浓度，单位为毫克每升或毫克每千克(mgL或mgkg)；y食品模拟物试液中三聚氰胺的峰面积；6回归曲线的截距；a回归曲线的斜率。3GBT 2329615200982三聚氰胺特定迁移量的转化计算由81得到的食品模拟物试液中三聚氰胺的浓度，根据迁移试验中所使用的食品模拟物的体积和测试试样
13、与食品模拟物接触面积，通过数学换算计算出三聚氰胺的特定迁移量，单位以“mgkg或mgdm2”表示。详见GBT 232961 2009的第13章。计算结果以平行测定值的算术平均值表示，保留三位有效数字。9重复性在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10。mAU80mAU80附录A(资料性附录)食品模拟物中三聚氰胺标准色谱分离图GBT 23296152009图A1 水中三聚氰胺(30 mgL)标准色谱图图A2 3(质量浓度)乙酸溶液中三聚氰胺(30 mgL)标准色谱图5们oGBT 232961520096IrAU908070605040302010图A3 10(体积分数)乙醇溶液中三聚氰胺(30 mgL)标准色谱图图A4橄榄油中三聚氰胺(30 me,L)标准色谱图
