1、昌ICS 67.200.10 X 14 中华人民共和国国家标准GB/T 31579-2015 粮油检验芝麻油中芝麻素和芝麻林素的测定高效液相色谱法In年ectionof grain and oiIs-Detennination of s臼aminand sesamolin in sesame oil一High performance Iiquid chromatography 2015-11-28实施2015-05-15发布中华人民共和国国家质量监督检验检菇总局也士中国国家标准化管理委员会。叩4+甸莓.人. ，/1/，1飞、电二2、;j)t，孟属撞w，工:-:扩盹恕E咽，E 号:前本标准按照G
2、B/Tl.1-2009给出的规则起草。本标准由国家粮食局提出。本标准由全国粮油标准化技术委员会(SACjTC270)归口。本标准负责起草单位z上海市粮食科学研究所。GB/T 31579-2015 本标准参加起草单位z上海三添食品有限公司、中国食品药品检定研究院食品化妆品检定所、中国标准化研究院食品与农业标准化研究所、安徽华安食品有限公司、东莞顶志食品有限公司、安徽国家农业标准化与监测中心。本标准主要起草人z曹文明、薛斌、陈凤香、曹进、丁宏、李坤戚、何俊、徐彦辉、郭海英、袁超。I F GB/T 31579-2015 1 范围粮油检验芝麻油中芝麻素和芝麻林素的测定高效液相色谱法本标准规定了高效液相
3、色谱法测定芝麻油中的芝麻素和芝麻林素的术语和定义、原理、试剂和起材、仪器设备、试样的制备、分析步骤、结果计算以及精密度。本标准适用于芝麻香油、芝麻原油和成品芝麻油中芝麻素和芝麻林素的测定。本标准方法的检出限为z芝麻素0.01mg/g;芝麻林素0.02mg/g. 2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本包括所有的修改单适用于本文件。GB/T 6379.1-2004 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分z总则与定义GB/T 6379.2-2004 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度第
4、2部分z确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682-2008/1S0 3696: 1987 ,MOD) GB/T 15687动植物油脂试样的制备(GB/T15687-2008/1S0 661:2003 , IDT) 3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1 芝麻素翩翩nin又称芝麻脂素，芝麻主要的天然木脂素(木酷素类物质之一，CAS编号，607-80-7;分子式，CzoH!8 06; 分子量，354.35.分子结构参见附录A.3.2 芝麻林蠢跚跚.olin又称芝麻酷林，芝麻主要的天然木脂素木酣素类物质之一，CAS编号，52
5、6-07-8;分子式，CzoH!8 07; 分子量，370.35.分子结构参见附录A。4 原理样品中的芝麻素和芝麻林素采用固相萃取技术，提取、净化和富集后，用高效液相色谱仪进行测定，紫外检测器外标定量。5 试剂和辑材5.1 甲晖z色谱纯。1 GB/T 31579-2015 5.2 三氯甲烧。5.3 丙酣。5.4 环己皖。5.5 正己烧。5.6 异丙障。5.7 SPE上样液E正己烧+三氯甲烧=70+30，取30mL的三氯甲烧(5.2)，加入70mL的正己烧(5.5)中握匀，现用现配。5.8 SPE淋洗液z环己烧+丙圃=90+10，取10mL的丙圃(5.3)，加人90mL的环己烧(5.4)中混句，
6、现用现配。5.9 SPE洗脱液z环己烧+丙圃=80+20，取20mL的两酣(5.3)，加人80mL的环己烧(5.的中混匀，现用现配。5.10 流动相z甲醇+水平75十衍。取250mL的水，加入750mL的甲晖().1)中混匀，通过0.45m的滤膜(6.4)过滤并脱气。5.11 标准物质z芝麻素，纯度注98%;芝麻林素，纯度注98%。5.12 标准储备液=精确称量20mg的芝麻素(5.11)标准物质，加入适量的甲醇(5.1)，搅拌至完全溶解后转移至100mL棕色容量瓶中，再用甲醇(5.1)定容，配制成浓度为200mg/L的芝麻素标准储备攘，冷藏保存。采用同样的方法，精确称量20吨的芝麻林素(5.
7、11)标准物质，配制成浓度为200mg/L的芝麻林素标准储备液，冷藏保存。5.13 标准工作液z分别准确移取芝麻素和芝麻林素的标准储备液(5.12)各0.2mL、0.4mL、1mL、2 mL和5mL，分别用甲酶(5.1)稀释定容至10mL，得到一系列浓度不同的芝麻素和芝麻林素的混合标准工作溶液芝麻素和芝麻林素浓度均分别为4mg/L、8mg/L、20mg/L、40tng/L和100mg/L)。5.14 25 mL棕色容量瓶。5.15 15 mL平口试管。5.16 5 mL、10rnL一次性塑料注射器。5.17 硅胶固相萃取柱，规格:1g/6 mL，非键合硅胶固定相，粒径40m60m及其配套转接头
8、。5.18 氨基固相萃取桩，规格t500mg/3 mL，氨丙基键合硅肢固定相，粒径40m.，60m及其配套转接头。5.19 以上所用试剂，除特殊注明外均为分析纯试剂，水为符合GBjT6682规定的一级水。6 仪器设备6.1 分析天平z感量0.0001 g. 6.2 高效液相色谱仪t配备紫外检测器。6.3 碟形过滤器z尼龙，有机相，直径13mm，孔径0.45m。6.4 滤膜z孔径0.45m，直径45mm的尼龙膜或相当者。6.5 微量进样器:20L.6.6 氯气吹干仪z选配。7 试样的制备按GB/T15687规定的方法制备试样。2 8 分析步骤8. 1 样晶的提取、净化和富集8.1.1 固相萃取柱
9、的活化GB/T 31579-2015 取硅胶固相萃取柱(5.17)和氨基固相萃取柱(5.18)各一支，用10mL的塑料注射器(5.16)分别吸取10mL和5mL的SPE上样液(5.7)，分别冲洗硅肢固相萃取柱和氨基固相萃取柱，使固相吸附剂完全被液体溶剂浸润，应防止干捆，但溶剂的液面也不能高于固相吸附剂。然后将氨基固相萃取柱连接在硅胶固相萃取柱的上端，形成串联双柱。8.1.2 固相萃取/ / 称取0.5g芝翩翩，精确至1吨，用2mL SPE上样液(5.7)充分榕解，用5mL的塑料注射器(5.16)吸取样液后，以0:2)滴/s的速度通过串联双柱(8.1.1)。上样过程中应保持串联双柱处于潜剂浸润状
10、态，防止干泪。弃去流出的液体s再用同一支5mL的塑料注射器吸取5mL的SPE上样液，以2滴/s左右的速度洗涤双柱，并用空气吹干上端的氨基固相萃取柱，同时保持下层的硅胶固相萃取柱处于溶剂浸润状态，弃去洗涤液，取下上端氨基固相萃取柱;仍用同一支5mL的塑料注射器吸取3mL的SPE上样液，以(1-2)滴/s的速度单独洗涤硅胶固相萃取柱，并保持硅肢固相萃取柱处于榕剂浸润状态，弃去洗操液;仍用同一支5mL的塑料注射器吸取2mL的SPE淋洗液(5.肘，以(1-2)滴/s的速度单独洗涤硅胶固相萃取柱，并用空气吹干硅胶固相萃取柱，弃去洗捺液;最后取1支干净的10mL的塑料注射器(5.16)吸取10mL的SPE
11、洗脱液(5.的，以(2-3)滴/s的速度洗脱硅胶固相萃取柱，并用空气吹干硅胶固相萃取柱，收集全部洗脱液于一个25mL的棕色容量瓶(5.14)中，并用异丙薛(5.6)定容，作为样品提取液或者收集全部洗脱液于一支15mL的试管(5.15)中，然后置于50-C的氯气吹干仪(6.6)的水浴中，氮气吹干溶剂后，用异丙醇溶解残留物，转移人25mL棕色容量瓶，再用异同晖定容为样品提取液。样品提取被用碟形过滤器(6.3)过撞后进行液相色谱测定。8.2 高效施相色谱副定8.2.1 高效液相色谱参考条件高效液相色谱检测的参考条件如下za) 色谱柱:Venusil XBP Cta柱(长250mm，内径4.6mm，填
12、料粒径5m)及其配套保护柱(也可使用其他品牌等效的C18液相色谱柱hb) 进样量:20L;c) 流动相z甲酶+水(5.13); d) 流速:1mL/min; e) 柱温:30C; f) 紫外检测器波长:287nm. 8.2.2 样晶测定用微量进样器(6.5)分别吸取等体积的各个芝麻素和芝麻林素标准工作溶液(5.13)以及样品提取液(8.1.2)进行分析，测定峰面积，以各个标准工作液的芝麻素或芝麻林素的浓度为横坐标，对应的芝麻素或芝麻林素的峰面棋为纵坐标，分别绘制芝麻素和芝麻林素的标准工作曲线，并求得样品提取液相应的芝麻素或芝麻林素的浓度。芝麻素和芝麻林素的标准品及样品测定的色谱固见附录B。3
13、GB/T 31579-2015 9 结果计算芝麻素和芝麻林素的含量分别按式(1)进行计算zX=- m X 1000 式中zX一一样品中芝麻素或芝麻林素的含量，单位为毫克每克(mg/g); . ( 1 ) c -一通过标准工作曲线获得的样品提取液中的芝麻素或芝麻林素的浓度，单位为毫克每升(mg/L);V一一样品提取液的定容体积，单位为毫升(mL);m 样品的称样量，单位为克(g)。计算结果保留至小数点后两位。10 精密度根据GB/T6379.1-2004和GB/T6379.2-2004的相关要求，芝麻素和芝麻林素的检测精密度以实验室间的比对实验的统计分析结果表示，详见表1和表2.表1芝麻蠢的栓测
14、精密度项目样品1样品2样品3参加比对的实验室的数量10 10 10 可接受结果的实验室的数量8 10 10 获得可靠检测结果的数量38 48 48 平均值/(mg/g)4.88 3.35 1.1 4 重复性标准偏差(Sr)/(mg/g)0.18 0.13 0.05 重复性变异系数/%3.65 3.89 4.78 重复性限(2.8XSr)/(mg/g)0.50 0.36 0.15 再现性标准偏差(SR)/(mg/g)0.23 0.16 0.07 再现性变异系数/%4.65 4.80 5.82 再现性限(2.8XSR )/(mg/g) 0.64 0.45 0.19 表2芝麻林素的栓测精密度项目样品
15、1样品2样品3参加比对的实验室的数量10 10 10 可接受结果的实验室的数量9 9 9 获得可靠检测结果的数量43 45 45 平均值/(mg/g)3.32 1.49 0.59 重复性标准偏差(Sr)/(mg/g)0.08 0.06 0.02 重复性变异系数/%2.45 4.18 4.16 4 GB/T 31579-2015 表2(续项目样品1样品2样品3重复性限(2.8XSr)/(mg/g) 0.23 0.17 0.07 再现性标准偏差(SR)/(mg/g) 0.10 0.08 0.03 再现性变异系数/%3.01 5.11 5.07 再现性限(2.8XSR)/(mg/g)0.28 0.2
16、1 0.08 5 GB/T 31579-2015 。./-.0。Oa) 芝麻素附录A资料性附录)芝麻章和芝麻林素的分子结构圄在b) 芝麻林素圄A.1 芝麻素和芝麻林蠢的分子结构图6 附录B(资料性附录)芝麻素和芝麻林蠢的班相色谱圄AU 57.5 血啊锺M例GB/T 31579-2015 制啊恭候制1. 0 10.3 15.0 保留时间/min12. 7 M响等候制12.7 15.0 保留时间/min35.0 12.5 一10.03.3 5. 7 8.0 圄B.1芝麻章和芝麻林囊标准色谱固AU 阳响键M刑207.5 135.0 62.5 一10.01.0 3.3 5.7 8.0 10.3 圄B.
17、2样晶提取班中芝麻素和芝麻林素色谱圄mFON-mhmFmH筒。华人民共和国家标准粮油检验芝麻油中芝麻素和芝麻林寰的测定高效液相色谱法GB/T 31579-2015 国中* 中国标准出版社出版发行北京市辍阳区和平里西街甲2号(100029)北京市西城区三里河北街16号(10004日网址总编室:(010)68533533发行中心:(010)51780238读者服务部1(010)68523946中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销* 开本880X12301/16 2015年5月第一版印张0.75字数14千字2015年5月第一次印刷* 书号:155066. 1-50557定价16.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68510107打印日期:2015年6月4日F002
