1、DB33 浙江省 地方标准 DB 33/ 3007 2015 食品安全地方标准 食品中 4-己基间苯二酚残留量的测定 2015 - 09 - 10发布 2015 - 12 - 10实施 浙江省 卫生和计划生育委员会 发布 DB33/ 3007 2015 I 前 言 本标准为首次发布。 本标准的附录 A为资料性附录。 DB33/ 3007 2015 1 食品安全地方标准 食品中 4-己基间苯二酚 残留量的测定 1 范围 本标准规定了 虾、蟹类水产 品 和果蔬 中 4-己基间苯二酚（ 4-HR）残留量 的 高效液相色谱 测定方法。 本标准适用于 虾、蟹类水产 品 和果蔬 中 4-己基间苯二酚 的测
2、定 。 2 原理 用乙腈 -二氯甲烷溶液提取样品中 4-己基间苯二酚，提取液经氨基固相萃取柱净化、浓缩，残渣用流动相溶解，液相色谱 -荧光检测器检测，外标法定量。 3 试剂和材料 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯， 水为 GB/T 6682规定 的一级水。 3.1 乙腈 （ CH3CN） ：色谱纯。 3.2 二氯甲烷 （ CH2Cl2）。 3.3 甲醇 （ CH3OH）。 3.4 丙酮 （ CH3COCH3）。 3.5 正己 烷 （ C6H14） 。 3.6 乙腈水溶 液 （ 6+4， V/V） ：量取 60 mL 乙腈 （ 3.1） 和 40 mL 水，混匀后备用。 3.7 甲 醇 -
3、丙酮溶液 （ 1+1， V/V） ：量取 50 mL 甲醇和 50 mL 丙酮，混匀后备用。 3.8 乙腈 -二氯甲烷溶液 （ 7+3， V/V） ：量取 70 mL 乙腈和 30 mL 二氯甲烷，混匀后备用。 3.9 4-己基间苯二酚标准品： CAS136-77-6，纯度大于 99.0%。 3.10 4-己基间苯二酚标准 溶 液：准确称取 100 mg（精确到 0.1 mg）的标准品 于 100 mL 容量瓶中， 用乙腈水溶液（ 3.6）溶解并定容至刻度，配制成 浓度为 1 mg/mL 标准 储备液， 贮存于 0 4 冰箱中密封 保存 ，溶液有效期 1 个月 。 临用前，取此储备液，用 乙腈
4、水溶液（ 3.6）稀释成所需浓度的标准工作液。 3.11 氨基固相萃取柱： 500 mg， 3 mL，或相当者 。使用前用 6 mL 甲醇丙酮 溶液 （ 3.7）和 6mL 正己烷活化。 3.12 微孔滤膜： 0.45 m，有机系。 3.13 氮气：纯度大于等于 99.9%。 4 仪器 4.1 高效液相色谱仪：配荧光检测器。 4.2 天平：感量 0.01 g。 4.3 分析天平：感量 0.000 1 g。 4.4 离心机：最大转速 10 000r/min。 DB33/ 3007 2015 2 4.5 旋涡混合器。 4.6 旋转蒸发仪。 4.7 固相萃取装置。 4.8 氮 气 吹 干 仪。 4.
5、9 高速组织捣碎机。 5 操作方法 5.1 样品处理 5.1.1 试样制备和保存 从原始样品中取出代表性样品 500g， 虾去头、去壳、去附肢，取可食部分 ； 蟹 去壳、去鳃等取可食部分；果蔬去皮。用组织捣碎机捣碎混匀，均分成两份分别装入洁净容器中作为试样，密封并标识。将试样放入 -18 以下保存。 制样和试样保存过程中，应防止试样受到污染或发生残留物含量的变化。 5.1.2 提取 称取 5 g（精确到 0.01 g） 样品置于 50 mL 离心管中，加入 10 mL 乙腈二氯甲烷 溶液 （ 3.8），高速组织捣碎机匀浆 2 min，盖塞，旋涡混匀 1 min，超声提取 10 min， 850
6、0 r/min 离心 5 min，取上清液转入 100 mL 旋 转蒸发 瓶中 ，重复上述操作一次 。合并提取液于 45 旋发至近干，取 7.5 mL 二氯甲烷分三次超声溶解 ，合并，待净化 。 5.1.3 净化 将 5.1.2 中的待净化液转移至固相萃取柱（ 3.11）中。用 6 mL 正己烷淋洗，将固相萃取小柱抽至近干，用 6mL 甲醇丙酮溶液（ 3.7）洗脱，流速不超过 1 mL/min，收集洗脱液。洗脱液于 50用氮气吹干，残留物用 1.0 mL 流动相溶解，过微孔滤膜（ 3.12），供液相色谱测定。 5.2 样品测定 5.2.1 色谱条件 a) 色谱柱： C18柱 ， 150 mm
7、4.6mm（内径）， 5m。 b) 流动相：乙腈 +水（ 6+4， V/V）。 c) 流速： 1.0 mL/min。 d) 柱温： 35 。 e) 激发波长： 280 nm。 f) 发射波长： 310 nm。 g) 进样量： 10 L。 5.2.2 标准工作曲线的绘制 用流动相将 4-己基间苯二酚标准溶液（ 3.10）稀释成为 0.05 g/mL、 0.50 g/mL、 2.0 g/mL、 5.0 g/mL、10.0 g/mL、 20.0 g/mL、 50g/mL系列标准工作液，供高效液相色谱分析。 5.2.3 色谱分析 分别注入 10 L 4-己基间苯二酚标准工作溶液及样品溶液于液相色谱仪中
8、，按 5.2.1 色谱条件进行分析，记录峰面积，响应值均应在仪器检测的线性范围之内。根据 4-己基间苯二酚标准品的保留时间定性，外标法定量。标准品色谱图见附录 A。 6 空白试验 DB33/ 3007 2015 3 除不加试样外，均按上述测定步骤进行。 7 结果计算 样品中 4-己基间苯二酚 的残留量按公式（ 1）计算，计算结果需扣除空白值。结果保留 2位有效数字。 1000 1000- 0 m VCCX （ 1） 式中： X 试样中 4-己基间苯二酚的含量，单位为 毫 克每千 克 (mg/kg)； C 试样溶液中 4-己基间苯二酚的含量，单位为微克每毫升 (g/mL)； C0空白试验 中 4
9、-己基间苯二酚的含量 ， 单位为微克每毫升 (g/mL)； m 试样质量，单位为克 (g)； V 试样溶液体积，单位为毫升 (mL)。 8 方法灵敏度、准确度和精密度 8.1 灵敏度 本方法 检出限为 0.002 mg/kg， 定量限为 0.010 mg/kg。 8.2 准确度 本方法添加浓度为 0.010 mg/kg 10 mg/kg时，回收率为 70% 110%。 8.3 精密度 本方法批内相对标准偏差 10%， 批间相对标准偏差 15%。 DB33/ 3007 2015 4 A A 附 录 A （资料性附录） 4-己基间苯二酚标准物质色谱图 m in0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10、L U 11 . 2 51 . 51 . 7 522 . 2 52 . 52 . 7 533 . 2 5F L D 1 A , E x = 2 8 0 , E m = 3 1 0 ( 4 - H R 2 0 1 4 - 0 3 - 1 7 # 1 1 6 0 0 4 - 0 4 0 1 . D )6.42 8A.1 4-己基间苯二酚标准物质液相色谱图（ 1.0 g/mL） m in0 1 2 3 4 5 6 7 8 9L U 11 . 2 51 . 51 . 7 522 . 2 52 . 52 . 7 533 . 2 5F L D 1 A , E x = 2 8 0 , E m = 3 1 0
11、 ( 4 - H R 2 0 1 4 - 0 3 - 1 7 # 1 1 6 0 0 8 - 0 8 0 1 . D )6.43 6A.2 4-己基间苯二酚海捕虾中加标色谱图（ 0.080 mg/kg） DB33/ 3007 2015 5 m in0 0 .5 1 1 .5 2 2 .5 3 3 .5 4 4 .5L U 01020304050F L D 1 A , E x = 2 8 0 , E m = 3 1 0 (4 -H R 2 0 1 4 -0 5 -2 1 # 4 1 0 4 3 -1 9 0 1 .D )3.704A.3 4-己基间苯二酚花蟹中加标色谱图（ 2.0 mg/kg） A.4 4-己基间苯二酚苹果中加标色谱图（ 0.8 mg/kg） _
