1、湖南省地方标准DB43DB43/T 10242015 ICS 65.020B 17湖南省质量技术监督局 发 布2015-05-08 实施2015-04-08 发布农药对蜜蜂影响半田间试验技术规程Guideline on semi-field test methods for evaluation the side-effectsof pesticides on honey beesDB43/T 10242015 I 目 次 前言1 范围 12 术语和定义 13 试验概述 14 试验条件 14.1 供试物 14.2 供试生物 24.3 试验仪器设备 24.4 环境条件 24.5 试验场地 24.
2、6 试验时间 35 试验蜂群管理 36 试验设计 36.1 试验蜂群 36.2 施药 36.3 调查 47 观察与记录 47.1 蜜蜂死亡数 47.2 蜜蜂飞行情况 47.3 蜜蜂行为 57.4 蜂群调查 57.5 其它 58 试验有效性 59 统计分析与评估 510 试验记录 5附录A（资料性附录） 死蜂收集箱示意图 6附录B（资料性附录） 蜜蜂死亡数和飞行情况调查表 7附录C（资料性附录） 蜂群调查记录表 8附录D（资料性附录） 喷雾器校准记录表 9附录E（资料性附录） 施药记录表10DB43/T 10242015 II 前 言 本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。 请注意本
3、标准中的某些内容可能涉及专利。本标准的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由湖南省植物保护研究所提出。 本标准由湖南省农业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：湖南省植物保护研究所。 本标准主要起草人：刘勇、李瑞喆、陈源、严清平、陈昂、罗香文、张德咏、刘建宇。 DB43/T 10242015 1 农药对蜜蜂影响半田间试验技术规程 1 范围 标准规定了农药对蜜蜂影响半田间试验的试验条件、试验蜂群管理、试验设计、观察与记录、试验有效性、统计分析评估和试验记录等。 本标准适用于农药对意大利蜜蜂影响的半田间试验。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 供试物 Test subs
4、tance 试验中需要测试的物质。 2.2 制剂 Formulation 使农药有效成分能有效达到所称防效的、具有一定组分的农药加工形态。 2.3 参比物质 Reference substances 在测试中为证实或否定供试物的某种特性或判断测试系统有效性而使用的化学物质或混合物。 2.4 暴露 Exposure 指蜜蜂通过试验设计的途径接触或摄入供试药剂的状态。 2.5 半田间试验 Semi-field test 在半封闭的条件下模拟田间土壤、自然气候等环境条件进行试验。 3 试验概述 农药对蜜蜂影响半田间试验一般分为暴露前阶段、暴露阶段和暴露后阶段3个部分。暴露前阶段包括试验地、试验用蜂群
5、和供试物的准备工作，并按照试验设计对试验小区的作物进行施药处理；暴露阶段，将试验蜂群移至各小区大棚内，并使其暴露于施药中或施药后的作物上，观察记录蜜蜂死亡数、飞行活动和觅食情况；暴露后阶段一般包括数次蜂群调查和蜜蜂死亡数和行为等数据的观察记录，以了解供试物对蜂群整体发育和恢复的持续影响。试验的每个阶段都应进行蜂群调查，以获得具有可比性的蜂群变化的数据。 4 试验条件 4.1 供试物 DB43/T 10242015 2供试物应为农药制剂，同时需提供该供试物的详细信息，例如在试验作物上的最大推荐施用量、密度、对环境影响数据、生物安全性等数据。 4.2 供试生物 试验蜂种为品系明确的意大利蜜蜂(Ap
6、ismelliferaL.)，应保证其来源质量可靠。 4.3 试验仪器设备 4.3.1 蜂箱 蜂箱推荐使用当地通用的意蜂蜂箱，或根据试验目的调整选择。 4.3.2 死蜂收集箱 每个试验蜂箱应安装死蜂收集箱，收集箱应使用天然木材等无刺激性的材料制作，具有一个孔径仅允许同时爬出1只工蜂的网罩和一个封闭的箱体，箱体与蜂箱口连通。试验以外的日常饲养时无需安装死蜂收集箱，试验期间在蜜蜂死亡数调查开始至少3 d 前安装，直至死亡数调查结束后拆除。死蜂收集箱的示意图请参见附录A。 4.3.3 大棚 试验大棚可选择钢架尼龙网大棚，推荐使用孔径需小于3 mm的防虫网覆盖大棚。 4.3.4 其他仪器设备 天平，量
7、具，农用喷雾器，温湿度监控记录设备，雨量计，风速仪等。 4.4 环境条件 试验应在当地正常的气候环境条件下开展。如遇非常规环境条件，如剧烈的气温变化、反常气候等，应评估其对试验的影响。 4.5 试验场地 试验场地分为暴露阶段的试验田地和蜜蜂在预养及暴露后恢复观察阶段的监测点，两者之间的直线距离应大于3 km，防止蜜蜂在大棚暴露前后飞至暴露阶段试验地。 4.5.1 暴露阶段试验地 试验地的大棚最高点距地面至少2.5 m，面积大小可根据自然环境条件、作物的蜜粉量、蜂群大小、研究目的（短期或长期影响试验研究）等因素选择，但最少应保证大棚内具有40 m2的作物覆盖面积。 每个大棚之间应相距2 m 以上
8、，处理组与空白对照大棚之间应3 m 以上，整个试验区域边界与周边田地也应相距3 m以上。 试验中不宜在试验地作物上使用杀虫剂，如需控制虫害，推荐使用拟除虫菊酯类农药并尽可能增加施药时间与试验的间隔。 4.5.2 监测点 需寻找一个有充足蜜源（如野花）的场所作为监测点，作为蜂群在暴露阶段前后的饲养观察地点，但其周围不能有吸引蜜蜂觅食的正处于花期的农作物，以避免蜜蜂采食含有农药的花粉和蜂蜜，并对试验结果造成干扰。 DB43/T 10242015 3 4.6 试验时间 蜜蜂半田间试验适合选择蜜蜂主要繁殖期，或活动频繁期进行。 5 试验蜂群管理 5.1 试验前如需培育新王建立蜂群，应控制培育时间以确保
9、在第一次蜂群调查时各试验蜂群的工蜂全部为本群蜂王的后代。 5.2 试验蜂群迁移的时间可选择在蜂群结束当天飞行活动的傍晚或晚上，也可在蜜蜂开始飞行活动之前的早晨进行。 5.3 蜂群置于试验大棚期间，需为蜜蜂提供1个无污染的水源（最好于蜂箱外单独准备，必要时也可直接添加至蜂箱内的食槽中）。当供试作物蜜（粉）源不足时应对蜂群饲喂适量糖（蜂蜜）水和（或）花粉，但为了保证蜜蜂采集活动的积极性，不应饲喂过量的食物。 5.4 蜂群置于监测点期间，可遵照当地养蜂人的经验进行饲喂管理，但在整个试验过程中，都不应对试验蜂群进行以下操作： a) 使用对蜂王或工蜂有毒性的药物进行病虫害防治; b) 调换、加减蜂脾等严
10、重影响种群结构和数量的行为。 6 试验设计 根据试验目的不同可设置一个或多个供试物处理、空白对照处理和参比物质处理，每个试验处理一般需重复3次，重复数也可根据试验小区面积适当增减。每次重复使用1个大棚和1个蜂群。空白对照处理以相同条件施用清水，参比物质处理应施用一个毒性已知并且对蜜蜂具有高危险性的农药（例如乐果，苯氧威等）。 6.1 试验蜂群 所有试验蜂群的蜂王应年轻健康（推荐于试验开始前培育新蜂王），并来自同一母系，以确保所有蜂群的遗传背景相同。按照试验设计的要求，每箱蜂应具有至少1个巢脾及适合其繁殖发展的相应群势（工蜂数量），同时每个蜂群应包括蜜蜂的卵、幼虫和蛹等所有生命阶段的蜂及适量食物
11、储备（蜂巢中保存有蜂蜜和花粉），各试验蜂群应尽可能的均匀一致。如果蜂群间各发育阶段蜂的数量不一致，需确保在各处理组间均匀分配。 6.2 施药 6.2.1 施药时间 施药时间至少应设计至作物花期和供试物推荐施用时间两个阶段内进行，同时应确保蜜蜂在大棚中得到适当地暴露，但在最终决定施药时期时仍应充分考虑试验的目的。 当蜂群位于大棚内需要达到施药的最大暴露量时，施药应选择在白天蜜蜂外出活跃期间进行。其它情况施药可按照当地一般农事活动规律进行，但也应根据试验目的进行调整。 6.2.2 气象条件 施药时大棚内风速应小于 2m/s。施药不应在下雨时进行，如需雨后施药，则需至植株表面水分干燥后进行，施药后2
12、h内作物不应被雨水淋湿。 DB43/T 10242015 46.2.3 施用量 供试物的用量一般为最高田间推荐施用量，但也应根据试验目的调整。各处理施用体积一般为每公顷600 L药液。 6.2.4 试验施药 6.2.4.1 供试物和参比物质均需在施药前用清水现场进行配制。 6.2.4.2 施药前需对使用的喷雾器进行校准，并计算施用设计药液量的时间。每个试验小区在施药结束后都应测量喷雾器中药液的剩余量，用以计算实际施药量是否符合试验要求。一般要求实际施药量与理论施药量相差不超过理论值的10%。 6.2.4.3 施药结束后，供试物及参比物质的废液应按相关规定进行回收或处理。 6.3 调查 6.3.
13、1 暴露前阶段 试验蜂群在迁至试验田大棚之前需提前数天进行第1次蜂群调查，以此选定各个处理对应使用的蜂群。第1次蜂群调查后即开始进行蜜蜂死亡数和行为调查，每天至少1次，直至蜂群迁往试验大棚。 在蜂群已搬入大棚后进行施药时，施药开始前需进行一次针对蜜蜂觅食活动情况的调查（蜜蜂飞行活动和行为调查），确保待施药大棚中具有正在飞行和采集的蜜蜂，以证明蜜蜂暴露在施药过程中。 6.3.2 暴露阶段 蜜蜂在田间暴露阶段一般为7 d 左右，整个暴露阶段每天至少需进行一次蜜蜂死亡数、飞行情况和行为的调查。对飞行情况的调查应选择正常情况下蜜蜂飞行活跃的时间段进行。 根据供试物的特性，有时暴露首日或前几日可能需进行
14、多次调查。在暴露阶段的最后1天，需在大棚中进行1次蜂群调查，蜂群调查后暴露阶段结束，所有蜂群迁往监测点。 6.3.3 暴露后阶段 暴露后阶段一般持续3周左右（根据试验目的进行调整），此过程包括数次蜂群调查，一般每次间隔7d左右，以期获得各处理蜂群在试验期间的群势变化状况。蜜蜂结束暴露迁至监测点后，根据试验要求可每天继续进行蜜蜂死亡数和行为调查，每天1次，直至最后一次蜂群调查时结束。 整个试验中，每天的蜜蜂死亡数、飞行情况和行为调查应尽可能在同一时间段进行。 7 观察与记录 7.1 蜜蜂死亡数 7.1.1 通过计数死蜂收集箱内、蜂箱底部和大棚地面掉落的死亡蜜蜂数量得到蜜蜂死亡数。每次调查需分别记
15、录死亡的成年工蜂、工蜂蛹、幼虫、雄蜂、雄蜂蛹、畸形蜂的数量。每次调查后，所有死蜂需全部移除。 7.1.2 调查蜂箱底部死蜂一般是在蜜蜂大量死亡，工蜂已经无法及时清理蜂箱内的死蜂时进行，需同时对所有试验蜂群进行。通过计数铺设在地面的纱网上的死蜂得到大棚地面掉落的死蜂数，根据试验目的和作物的不同，可调查大棚的部分或全部地面区域（水田无需调查地面掉落的死蜂数）。 7.2 蜜蜂飞行情况 DB43/T 10242015 5 蜜蜂置于大棚内期间需进行飞行情况调查。调查时，选择一定大小的区域，计数一定时间内（至少需15 s）在花上采食和飞过该区域的蜜蜂数量，每个大棚随机选取至少3个观察点（应避开蜂箱口前的区
16、域）。 7.3 蜜蜂行为 在调查蜜蜂死亡数和飞行情况的过程中，应同时调查蜜蜂在作物上和蜂箱周围的行为。与空白对照相比，应观察记录以下行为： a) 中毒症状； b) 在蜂箱入口处聚集； c) 攻击性； d) 其它非正常行为。 7.4 蜂群调查 在良好的天气条件下，调查各试验蜂群群势（蜜蜂数量），蜂王状况，卵、幼虫、蛹、花粉和蜂蜜在巢脾上所占的比例，以及蜜蜂的病害。 7.4.1 调查蜜蜂数量时，将一块蜂脾的一面布满蜜蜂时定为100%的覆盖率，通过肉眼观察或拍照测算等方式估计并记录一面蜂脾上蜜蜂的比例。位于蜂脾外的蜜蜂应进行粗略估计并单独记录。 7.4.2 调查卵、幼虫、蛹、花粉和蜂蜜的比例时，将一
17、块蜂脾的一面中的蜂房总面积定为100%，通过肉眼观察或拍照测算等方式估计并记录以上各项的蜂房占总面积的比例。 7.4.3 如实记录观察到的蜂王状况和蜜蜂病害及任何可见的非正常现象。 7.5 其它 7.5.1 试验过程中应详细记录可能对试验活动造成影响的环境条件，如每天的气温和相对湿度极值、降雨情况、云层覆盖率、施药时的风速等，如每次施药时均需记录空气温湿度、风速、天气状况。 7.5.2 试验前应记录蜜蜂来源情况及对蜂群的主要操作，试验中人为干涉蜂群活动的任何操作都应详细描述并记录。 8 试验有效性 参比物质对照组的死亡数应该与空白对照处理死亡数具有统计学上的显著性差异。如果空白对照组死亡数过高
18、或参比物质对照组死亡数过低都应质疑试验的有效性。 9 统计分析与评估 蜜蜂飞行强度通过计算每平米内每分钟活动的蜜蜂数的平均值得到，单位为：只/m2min。根据试验方案，统计并比较施药前后各处理蜜蜂飞行强度的变化可作为判断蜜蜂在施药后是否获得充足的暴露的依据。蜂群调查中根据蜂脾尺寸等数据，选择合适的算法可将观察记录的蜜蜂覆盖率换算成数量。 根据实际情况选择适当的统计方法分析不同情境和时点下的各组蜜蜂死亡数平均值、飞行强度和蜂群调查结果，可比较对照组与处理组是否具有显著差异性，为后期进行风险评估提供数据支持。 10 试验记录 记录表格参见附录部分。 DB43/T 10242015 6附录A （资料
19、性附录） 死蜂收集箱示意图 图A1 图A2 DB43/T 10242015 7 附录B （资料性附录） 蜜蜂死亡数和飞行情况调查表 蜜蜂死亡数和飞行情况调查表 处理编号： 死蜂数（只） 飞行情况（只） 日期 时间 收集箱中 地面掉落 蜂箱内 1 2 3 4 5 温湿度极值* 蜜蜂行为及备注 签名 无异常。 有，请具体描述： 备注： 无异常。 有，请具体描述： 备注： 无异常。 有，请具体描述： 备注： 无异常。 有，请具体描述： 备注： 无异常。 有，请具体描述： 备注： 无异常。 有，请具体描述： 备注： 无异常。 有，请具体描述： 备注： 无异常。 有，请具体描述： 备注： 无异常。 有，
20、请具体描述： 备注： DB43/T 10242015 8附录C （资料性附录） 蜂群调查记录表 蜂群调查记录表 日 期 调查时间 蜂箱编号 处理编号 覆盖面积（%） 蜂脾编号 蜜蜂 覆盖率 （%） 卵 幼 虫 蛹 蜂 蜜 花 粉 1号脾A面 1号脾B面 2号脾A面 2号脾B面 3号脾A面 3号脾B面 4号脾A面 4号脾B面 5号脾A面 5号脾B面 6号脾A面 6号脾B面 蜂脾外的蜜蜂覆盖率 是否发现蜂王 o是 o否 是否发现王台 o是 o否 蜂群的攻击性 o普通 o较强 o很强 是否发现病害 o是 o否 病害描述 备 注 记录人 日 期 调查人 DB43/T 10242015 9 附录D （资
21、料性附录） 喷雾器校准记录表 喷雾器校准记录表 喷雾器编号 喷嘴型号 施药编号 （第几次） 校准编号 第1次校准 第2次校准 第3次校准 第4次校准 第5次校准 喷雾器中的水量 （L） 喷雾时间 （S） 喷雾量 （mL） 每秒流量 （mL/s） 是否能用于计算施药时间 o是 o否 o是 o否 o是 o否 o是 o否 o是 o否 施药方案计算过程记录 备 注 记录人 日 期 其它参与人员 DB43/T 10242015 10 附录E （资料性附录） 施药记录表 施药记录表 施药日期 施药编号 （第几次） 处理编号 供试物名称/编号 供试物的量 og omL og omL og omL og omL og omL （助）溶剂名称 （助）溶剂的量 og omL og omL og omL og omL og omL 施药开始时间 施药结束时间 理论应施药体积 （mL） 总施药体积 （mL） 施药后剩余药液体积（mL） 偏离比例 （%） 施药后是否清理 喷雾器 o是 o否 o是 o否 o是 o否 o是 o否 o是 o否 施药期间环境条件 风速极值 有无降雨 o是 o否 温度极值 风 向 降雨量（mm） 湿度极值 备 注 记录人 日 期 其它参与人员
