1、ICS 点 击 此 处 添 加 ICS 号点 击 此 处 添 加 中 国 标 准 文 献 分 类 号中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准G BGB 23200.922016代 替 SN/T 24452010食 品 安 全 国 家 标 准动 物 源 性 食 品 中 五 氯 酚 残 留 量 的 测 定液 相 色 谱 -质 谱 法National food safety standardsDetermination of pentachlorophenol residue in animal-derived foodsLiquid chromatography - mass spectrome
2、try2016-12-18 发 布 2017-06-18 实 施中 华 人 民 共 和 国 国 家 卫 生 和 计 划 生 育 委 员 会中 华 人 民 共 和 国 农 业 部 发 布国 家 食 品 药 品 监 督 管 理 总 局GB 23200.922016I前 言本 标 准 代 替 SN/T 2445-2010 进 出 口 动 物 源 食 品 中 五 氯 酚 残 留 量 检 测 方 法 液 相 色 谱 -质 谱 /质 谱法 。本 标 准 与 SN/T 2445-2010相 比 ， 主 要 变 化 如 下 ： 标 准 文 本 格 式 修 改 为 食 品 安 全 国 家 标 准 文 本 格 式
3、 ； 标 准 名 称 和 “ 进 出 口 动 物 源 食 品 ” 改 为 “ 动 物 源 食 品 ” ； 标 准 范 围 中 增 加 “ 其 它 食 品 可 参 照 执 行 ” 。本 标 准 所 代 替 标 准 的 历 次 版 本 发 布 情 况 为 ： SN/T 2445-2010。GB 23200.9220161食 品 安 全 国 家 标 准动 物 源 食 品 中 五 氯 酚 残 留 量 的 测 定 液 相 色 谱 -质 谱 法1 范 围本 标 准 规 定 了 动 物 源 食 品 中 五 氯 酚 残 留 量 的 制 样 、 液 相 色 谱 -质 谱 测 定 方 法 。本 标 准 适 用 于
4、 猪 肝 、 猪 肾 、 猪 肉 、 牛 奶 、 鱼 肉 、 虾 、 蟹 等 动 物 源 食 品 中 五 氯 酚 残 留 的 测 定 。 其 它 食品 可 参 照 执 行 。2 规 范 性 引 用 文 件下 列 文 件 对 于 本 文 件 的 应 用 是 必 不 可 少 的 。 凡 是 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 仅 所 注 日 期 的 版 本 适 用 于 本 文件 。 凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 最 新 版 本 （ 包 括 所 有 的 修 改 单 ） 适 用 于 本 文 件 。GB 2763 食 品 安 全 国 家 标 准 食 品 中 农 药 最 大 残 留
5、限 量GB/T 6682 分 析 实 验 室 用 水 规 格 和 试 验 方 法3 原 理试 样 中 的 五 氯 酚 残 留 用 碱 性 乙 腈 水 溶 液 提 取 ， 经 MAX固 相 萃 取 柱 净 化 ， 浓 缩 、 定 容 后 ， 用 液 相 色 谱 -质 谱 仪 检 测 和 确 证 ， 外 标 法 定 量 。4 试 剂 和 材 料除 另 有 说 明 外 ， 所 用 试 剂 均 为 分 析 纯 ， 水 为 GB/T 6682规 定 的 一 级 水 。4.1 试 剂4.1.1 甲 醇 （ CH3OH） ： 色 谱 纯 。4.1.2 乙 腈 （ CH3CN） ： 色 谱 纯 。4.1.3
6、三 乙 胺 （ C6H15N） 。4.1.4 甲 酸 （ HCOOH） ： 色 谱 纯 。4.1.5 乙 酸 铵 （ CH3COONH4） 。4.1.6 氨 水 （ NH3H2O） 。4.2 溶 液 配 制4.2.1 乙 腈 -水 溶 液 （ 7+3） ： 准 确 量 取 70mL 乙 腈 和 30mL 水 ， 混 合 摇 匀 。4.2.2 5 三 乙 胺 乙 腈 -水 溶 液 ： 准 确 量 取 50 mL 三 乙 胺 ， 转 移 入 1000 mL 容 量 瓶 ， 用 乙 腈 -水 溶 液 （ 7+3）定 容 至 刻 度 ， 混 合 均 匀 。4.2.3 5 氨 水 溶 液 ： 量 取 2
7、00mL 浓 氨 水 （ 25 ） ， 转 移 入 1000 mL 容 量 瓶 ， 用 水 定 容 至 刻 度 ， 混 合均 匀 。4.2.4 4 甲 酸 甲 醇 溶 液 ： 量 取 10 mL 甲 酸 ， 转 移 入 250 mL 容 量 瓶 ， 用 甲 醇 定 容 至 刻 度 ， 混 合 均 匀 。4.2.5 2 甲 酸 甲 醇 水 溶 液 ： 取 一 定 量 4 甲 酸 甲 醇 溶 液 与 水 等 体 积 混 合 均 匀 。4.2.6 5 mmol/L 乙 酸 铵 水 溶 液 ： 准 确 称 取 0.3854 g 乙 酸 铵 ， 溶 于 水 中 ， 转 移 到 1000 mL 容 量 瓶
8、 中 ， 定容 至 刻 度 ， 混 和 均 匀 。4.3 标 准 品4.3.1 五 氯 酚 钠 标 准 品 （ Pentachlorophenol sodium salt， CAS 号 ： 131-52-2） ： 纯 度 94.5 ， 或 相 当 。4.4 标 准 溶 液 配 制4.4.1 标 准 储 备 溶 液 （ 200mg/L） ： 称 量 经 折 算 相 当 于 10 mg（ 精 确 到 0.1 mg） 五 氯 酚 的 标 准 品 ， 用 甲醇 溶 解 并 定 容 至 50 mL 棕 色 容 量 瓶 中 。 此 储 备 液 可 在 -18 以 下 避 光 存 放 12 个 月 。4.4
9、.2 标 准 工 作 溶 液 ： 标 准 工 作 溶 液 根 据 需 要 使 用 前 用 空 白 样 品 基 质 溶 液 配 制 。 保 存 于 4 冰 箱 内 。4.5 材 料4.5.1 固 相 萃 取 （ SPE） 柱 ： Oasis MAX， 60 mg, 3 mL， 或 相 当 。 使 用 前 依 次 用 5 mL 甲 醇 和 5 mL 水活 化 。4.5.2 氮 气 ： 纯 度 99.99%。GB 23200.92201625 仪 器 和 设 备5.1 液 相 色 谱 串 联 四 极 杆 质 谱 仪 ： 配 电 喷 雾 离 子 源 。5.2 分 析 天 平 ： 感 量 0.01 g
10、和 0.0001 g。5.3 旋 涡 混 合 器 。5.4 离 心 机 ， 5 000 r/min。5.5 固 相 萃 取 真 空 装 置 。5.6 机 械 真 空 泵 。5.7 组 织 捣 碎 机 。5.8 均 质 器 。5.9 超 声 波 仪 。5.10 吹 氮 浓 缩 仪 。6 试 样 制 备 与 保 存6.1 试 样 制 备制 样 操 作 过 程 中 必 须 防 止 样 品 受 到 污 染 或 发 生 残 留 物 含 量 的 变 化 。6.1.1 动 物 肌 肉 、 肝 脏 、 肾 脏 、 鱼 肉 、 虾 和 蟹从 所 取 全 部 样 品 中 取 出 有 代 表 性 样 品 约 500
11、 g， 用 组 织 捣 碎 机 充 分 捣 碎 均 匀 ， 均 分 成 两 份 ， 分 别 装入 洁 净 容 器 中 ， 密 封 ， 并 标 明 标 记 。6.1.2 牛 奶 样 品从 所 取 全 部 样 品 中 取 出 有 代 表 性 样 品 约 500 g， 充 分 混 匀 ， 均 分 成 两 份 ， 分 别 装 入 洁 净 容 器 中 ， 密封 ， 并 标 明 标 记 。注 ： 以 上 样 品 取 样 部 位 按 GB 2763附 录 A执 行 。6.2 试 样 保 存样 品 于 -18 以 下 冷 冻 保 存 。7 分 析 步 骤7.1 提 取7.1.1 肌 肉 、 鱼 肉 、 肝 脏
12、 、 肾 脏 、 虾 和 蟹称 取 均 质 试 样 2 g（ 精 确 到 0.01 g） ， 置 于 10 mL具 螺 旋 盖 聚 丙 烯 离 心 管 中 ， 加 入 6 mL 5%三 乙 胺 的乙 腈 -水 溶 液 。 肌 肉 和 鱼 肉 样 品 均 质 提 取 2min； 肝 脏 、 肾 脏 、 虾 和 蟹 样 品 旋 涡 混 合 1 min， 超 声 提 取 5 min。3 000 r/min离 心 5 min， 收 集 上 清 液 于 一 具 刻 度 离 心 管 中 。 离 心 后 的 残 渣 用 约 6 mL 5%三 乙 胺 的 乙 腈 -水 溶 液 重 复 上 述 提 取 步 骤
13、1次 ， 合 并 上 清 液 ， 混 匀 。7.1.2 牛 奶称 取 均 质 试 样 2 g（ 精 确 到 0.01 g） ， 置 于 10 mL具 刻 度 螺 旋 盖 聚 丙 烯 离 心 管 中 ， 加 入 10 mL 5%三 乙胺 的 乙 腈 -水 溶 液 ， 旋 涡 混 合 1 min， 超 声 提 取 5 min， 5 000 r/min离 心 5 min， 收 集 上 清 液 于 一 具 刻 度离 心 管 中 。7.2 固 相 萃 取 净 化将 7.1中 所 得 提 取 溶 液 转 入 经 过 预 处 理 的 MAX固 相 萃 取 柱 中 ， 以 约 1滴 /秒 流 速 使 样 品
14、溶 液 全 部 通 过 固相 萃 取 柱 ， 弃 去 流 出 液 。 依 次 用 5 mL 5%氨 水 溶 液 、 5 mL甲 醇 、 5mL 2 甲 酸 的 甲 醇 -水 溶 液 淋 洗 ， 淋洗 液 完 全 通 过 小 柱 后 ， 弃 去 流 出 液 ， 用 真 空 泵 抽 干 固 相 萃 取 柱 5 min以 上 。 以 4 mL 4 甲 酸 甲 醇 溶 液 洗脱 ， 洗 脱 液 用 干 净 的 15 mL具 刻 度 试 管 收 集 ， 40 水 浴 下 吹 氮 浓 缩 至 1mL， 用 水 定 容 至 2 mL， 混 匀 。 溶液 以 0.22m有 机 滤 膜 过 滤 ， 供 测 定
15、。7.3 仪 器 参 考 条 件7.3.1 液 相 色 谱 参 考 条 件a) 色 谱 柱 ： ZORBAX Eclipse XDB-C18， 1.8m， 50 x 2.1 mm（ i.d.） ， 或 相 当 者 ；b) 流 动 相 ： 甲 醇 +5mmol/L乙 酸 铵 溶 液 ， 梯 度 洗 脱 （ 梯 度 时 间 表 见 表 1） ；c) 流 速 ： 250 L/min；d) 柱 温 ： 30 ；e) 进 样 量 ： 30 L。GB 23200.9220163表 1 液 相 色 谱 的 梯 度 洗 脱 条 件时 间 （ min） 流 速 (L/min) 5mmol/L 乙 酸 铵 溶 液
16、 （ %） 甲 醇 （ %）0.00 250 60 401.00 250 0 1007.00 250 0 1007.50 250 60 4012.00 250 60 407.3.2 质 谱 参 考 条 件a) 离 子 化 模 式 ： 电 喷 雾 电 离 负 离 子 模 式 （ ESI-） ；b) 质 谱 扫 描 方 式 ： 多 反 应 监 测 （ MRM） ；c) 分 辨 率 ： 单 位 分 辨 率 ；d) 其 它 参 考 质 谱 条 件 见 附 录 A。e) 定 量 离 子 对 ： 262.7262.7， 定 性 离 子 对 ： 264.7264.7、 266.7266.7、 268.726
17、8.7。7.4 测 定7.4.1 定 性 测 定选 择 4对 母 离 子 进 行 MRM监 控 ， 在 相 同 实 验 条 件 下 ， 样 品 中 待 测 物 质 的 保 留 时 间 ， 与 基 质 标 准 溶 液的 保 留 时 间 偏 差 在 2.5%之 内 ； 且 样 品 中 各 组 分 定 性 离 子 的 相 对 丰 度 与 浓 度 接 近 的 基 质 混 合 标 准 工 作 溶液 中 对 应 的 定 性 离 子 的 相 对 丰 度 进 行 比 较 ， 偏 差 不 超 过 表 2规 定 的 范 围 ， 则 可 判 定 为 样 品 中 存 在 对 应 的待 测 物 。 表 2 定 性 确
18、证 时 相 对 离 子 丰 度 的 最 大 允 许 偏 差相 对 离 子 丰 度 50% 20%至 50% 10%至 20% 10%允 许 的 最 大 偏 差 20% 25% 30% 50%7.4.2 定 量 测 定在 仪 器 最 佳 工 作 条 件 下 ， 对 基 质 混 合 标 准 工 作 溶 液 进 样 ， 以 峰 面 积 为 纵 坐 标 ， 基 质 混 合 标 准 工 作 溶液 浓 度 为 横 坐 标 绘 制 标 准 工 作 曲 线 ， 用 标 准 工 作 曲 线 对 样 品 进 行 定 量 ， 样 品 溶 液 中 待 测 物 的 响 应 值 均 应在 仪 器 测 定 的 线 性 范
19、围 内 。 五 氯 酚 标 准 物 质 的 多 反 应 监 测 (MRM)色 谱 图 参 见 附 录 B中 的 图 B.1。7.5 空 白 实 验除 不 加 试 样 外 ， 均 按 上 述 测 定 步 骤 进 行 。8 结 果 计 算 和 表 述采 用 外 标 法 定 量 ， 按 式 （ 1） 计 算 五 氯 酚 残 留 量 。10001000 mVcX (1)式 中 ：X 试 样 中 被 测 组 分 残 留 量 ， 单 位 为 微 克 每 千 克 ， g/kg；c 从 标 准 工 作 曲 线 得 到 的 被 测 组 分 溶 液 浓 度 ， 单 位 为 微 克 每 升 ， g/L；V 样 品
20、溶 液 最 终 定 容 体 积 ， 单 位 为 毫 升 ， mL；m 最 终 样 品 溶 液 所 代 表 的 试 样 质 量 ， 单 位 为 克 ， g。注 ： 计 算 结 果 须 扣 除 空 白 值 ， 测 定 结 果 用 平 行 测 定 的 算 术 平 均 值 表 示 ， 保 留 两 位 有 效 数 字 。9 精 密 度9.1 在 重 复 性 条 件 下 获 得 的 两 次 独 立 测 定 结 果 的 绝 对 差 值 与 其 算 术 平 均 值 的 比 值 （ 百 分 率 ） ， 应 符 合附 录 D的 要 求 。9.2 在 再 现 性 条 件 下 获 得 的 两 次 独 立 测 定 结
21、果 的 绝 对 差 值 与 其 算 术 平 均 值 的 比 值 （ 百 分 率 ） ， 应 符 合附 录 E的 要 求 。GB 23200.922016410 定 量 限 和 回 收 率10.1 定 量 限本 方 法 对 五 氯 酚 的 定 量 限 为 1.0 g/kg。10.2 回 收 率当 添 加 水 平 为 1.00、 2.00、 4.00g/kg时 ， 猪 肉 、 猪 肝 、 猪 肾 、 牛 奶 、 鱼 肉 、 虾 、 蟹 中 五 氯 酚 的 回收 率 数 据 参 见 附 录 C。GB 23200.9220165附 录 A（ 资 料 性 附 录 ）参 考 质 谱 条 件a) 气 帘 气
22、 压 力 （ CUR） ： 20.00 psi（ 氮 气 ） ；b) 电 喷 雾 电 压 （ IS） ： -4 500 V；c) 离 子 源 温 度 （ TEM） ： 550 ；d) 雾 化 气 压 力 35 psi（ 氮 气 ） ；e) 辅 助 气 压 力 60 psi（ 氮 气 ） ；f) 其 它 质 谱 参 数 见 表 A1。 附 表 A1 主 要 参 考 质 谱 参 数化 合 物 母 离 子(m/z) 子 离 子(m/z) 驻 留 时 间(msec) DP EP CE(eV) CXP五 氯 酚 262.7* 262.7* 100 -75 -10 -23 -5264.7 264.7 10
23、0266.7 266.7 100268.7 268.7 100注 ： 附 表 A1中 带 *的 离 子 为 定 量 离 子 ； 对 于 不 同 质 谱 仪 器 ， 仪 器 参 数 可 能 存 在 差 异 ， 测 定 前 应 将 质 谱 参 数 优 化 到 最佳 。 非 商 业 性 声 明 ： 附 录 A 所 列 参 考 质 谱 条 件 是 在 API4000QTrap 型 液 质 联 用 仪 上 完 成 的 ， 此 处 列 出 试 验 用 仪 器 型 号 仅为 提 供 参 考 ， 并 不 涉 及 商 业 目 的 ， 鼓 励 标 准 使 用 者 尝 试 不 同 厂 家 或 型 号 的 仪 器 。
24、GB 23200.9220166附 录 B（ 资 料 性 附 录 ）标 准 品 的 多 反 应 监 测 （ MRM） 色 谱 图图 B1 5.0g/L 五 氯 酚 的 多 反 应 监 测 （ MRM） 色 谱 图GB 23200.9220167附 录 C（ 资 料 性 附 录 ）不 同 基 质 中 五 氯 酚 药 物 的 添 加 回 收 率表 C.1不 同 基 质 中 五 氯 酚 药 物 的 添 加 回 收 率物 质 种类 添 加 浓 度（ g/kg） 回 收 率 范 围 （ %）猪 肉 猪 肝 猪 肾 牛 奶 鱼 肉 虾 蟹五 氯 酚 1.0 94.9-109 75.8-104 88.0-1
25、08 79.0-98.7 80.0-94.1 79.2-104 66.7-94.12.0 82.1-108 81.0-97.5 80.6-103 87.1-98.5 78.4-90.5 77.4-89.6 77.0-99.54.0 91.6-96.7 83.4-90.2 74.7-89.3 92.8-99.0 79.8-92.6 76.8-87.9 83.0-97.2GB 23200.9220161附 录 D（ 规 范 性 附 录 ）实 验 室 内 重 复 性 要 求表 D.1 实 验 室 内 重 复 性 要 求被 测 组 分 含 量mg/kg 精 密 度%0.001 36 0.0010.01 32 0.010.1 22 0.11 18 1 14GB 23200.9220162附 录 E（ 规 范 性 附 录 ）实 验 室 间 再 现 性 要 求表 E.1 实 验 室 间 再 现 性 要 求被 测 组 分 含 量mg/kg 精 密 度%0.001 54 0.0010.01 46 0.010.1 34 0.11 25 1 19
