1、 ICS 67.050 B 20 备案号： 天津市地 方 标 准 DB12 DB12/T 650 2016 转基因植物及其产品成分筛查 Cry1Ab/Cry1Ac 试纸条法 Screening method for genetically modified plant Cry1Ab/Cry1Ac test strip 2016-09-27 发布 2016-11-01 实施 天津 市 市场和质量监督管理委员会发布 DB12/T 650 2016 2 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 2009 给出的规则起草。 本标准由 天津 市农村工作 委员会提出 。 本标准起草单位： 天津市农业质量标准与
2、检测技术研究所 、中国农业科学院生物技术研究所 、 天津市东丽区产品质量监督检验所 。 本标准主要起草人： 兰青阔、李亮、 黄凤军、刘雪岩、赵新、 宛煜嵩 、易萌、陈锐、 徐石勇 。 本标准 2016 年 9 月首次发布。 DB12/T 650 2016 3 转基因植物及其产品成分筛查 Cry1Ab/Cry1Ac 试纸条法 1 范围 本标准规定了转基因植物及其产品成分 Cry1Ab/Cry1Ac试纸条法的 术语 和定义、检测方法、结果 判断 。 本标准适用于 表达 Cry1Ab/Cry1Ac蛋白的 转基因 大豆 MON87701，转基因玉米 MON810、 Bt11、Bt176，转基因水稻 T
3、T51-1、克螟稻、科丰六号，转基因棉花 MON531、 MON15985等主要 植物及其 初级加工产品 中 Cry1Ab/Cry1Ac蛋白的试纸条筛查。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分 析实验室用水规格和试验方法 3 原理 转基因快速检测试纸应用双抗体夹心免疫层析的原理，样本中的抗原在侧向移动的过程中与标记的特异性单克隆抗体 1结合，形成抗原 -抗体复合物，继续向前方流动和 NC膜检测线上特异性单克隆抗体 2 结合形成双抗
4、体夹心复合物，并显色。如果样本中 转基因作物 含量大于 5%，控制线（ Control Line，简称 C）和检测线（ Test Line，简称 T）显色，结果为阳性；反之，控制线（ C）显色，检测线（ T）不显色，结果为阴性。 4 仪器设备及试剂 4.1 仪器设备 匀浆器 ；天平；移液枪；振荡器；离心管等。 4.2 试剂 提取缓冲液；实验用水为重蒸馏水或符合 GB/T 6682规定的一级水 等 。 5 方法步骤 5.1 样品的采集和 预处理 使用离心管盖夹取或者打孔的方式 ，采集 植物新鲜组织 样品生长点附近 约 3 cm幼嫩组织 100 mg-200 mg，置于 2 mL离心管中 。 作物
5、籽粒 可使用铁钳夹碎，取较碎部分 置于 2 mL离心管中。 5.2 样品 研磨 加 1 mL纯水或 提取缓冲液 于 离心管中 ，使用一次性研磨杵手工研磨或电钻研磨 ，确保上层液体体积应至少占总体积三分之一。 DB12/T 650 2016 4 对于混合样品，应称 重 后使用大容量研磨仪器 研磨至 100目 大小 粉末 ， 然后 加入水 或提取缓冲液。 5.3 涡旋 震荡 在振荡器上用力震荡 30 s-1 min，确保样品充分混匀。 5.4 试纸条检测 震荡后，静置 1 min待固体物质沉淀 分层 ，尽快从包装中取出试纸条，按照箭头方向插入离心管，开始计时。 5.5 读取结果 5-10 min底色褪去后，将 试纸条水平放置于观察者正面 读取 结果 。 5.6 结果判断 测试结果分为阴性、阳性和无效三种。 阴性（ ）：控制线 C 显色，检测线不显色； 阳性（）：控制线 C 显色，检测线显色肉眼可见； 无效： C 线未出现，可能操作不当 或试纸失效。表明操作过程不正确或试纸条已变质损坏。在此情况下，应重新测试。 _
