1、DB11/T 1432 2017 1 ICS 65.020 B 15 备案号： 56066-2017 DB11 北京市地方标准 DB11/T 1432 2017 生物防治产品应用技术规程 舞毒蛾核型多角体病毒 Technical regulations for applying of biocontrol production Lymantria dispar L. nuclear polyhedrosis virus 2017 - 06 - 29发布 2017 - 10 - 01实施 北京市质量技术监督局 发布DB11/T 1432 2017 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.12009
2、 给出的规则起草。 本标准由北京市园林绿化局提出并归口。 本标准由北京市园林绿化局组织实施。 本标准起草单位：北京市西山试验林场。 本标准主要起草人：梁洪柱、陈倩、宁少华、赵洪林、赵京芬、张宝增、安玉涛、蒋薇、成新新、 李学燕、张博、焦进卫。 DB11/T 1432 2017 1 生物防治产品应用技术规程 舞毒蛾核型多角体病毒 1 范围 本标准规定了舞毒蛾亚洲亚种核型多角体病毒（ Lymantria dispar asiatica Vnukovskij Nuclear Polyhedrosis Virus，简称 LdNPV）制剂的制备和应用、防治效果调查等技术内容。 本标准 适用 于北京 地区
3、利 用舞毒蛾亚洲亚种 幼虫 的防治。 2 术语和定义 下列术语 和定 义适 用于 本文件。 2.1 舞毒蛾亚洲亚种 Lymantria dispar asiatica Vnukovskij 属鳞翅目 （Lepidoptera ）毒蛾科 （Lymantriidae）， 是重 要的 森林 害虫 ，其识别特征参见附录 A。 北京地区为亚洲亚种，该虫以幼虫为害叶片 ，寄主 可达500 余种， 危害 多种林木 、 果树等，主要 危害植 物 种 类参见附录 B。 2.2 多角体 polyhedral inclusion body(PIB) 包埋病毒 粒子 的包涵 体，用 于表示 病毒制备和应用 过程中 的
4、计数 。 2.3 舞毒蛾核型多角体病毒 Lymantria dispar asiatica Vnukovskij nuclear polyhedrosis virus 一 种 具有较高宿 主特异性 的昆虫 病毒， 属于杆状病毒 科双环状DNA病毒，病毒粒子无 规则地包埋在 多角体 中。 2.4 标准枝法 branch sampling method 用 于抽样调查 舞毒蛾 幼虫发生情况 的一 种方法 。即低龄幼虫 期， 在树 冠按 上、 中 、下 三个部 位， 东、西、 南、北、 中五个 方位， 分别 随机 抽取 50cm长的样 枝1 个， 调查 各样 枝上 舞毒蛾 幼虫数 量。 2.5 阻隔
5、法 blocking method 利 用 4龄以 上舞毒蛾 幼虫具有 上 下树 的 特性 ，用 塑料薄膜、 塑料胶带缠绕 树 干胸径处从而阻隔 幼虫 的 方法 ，围 环宽度不小 于10cm。 3 LdNPV制剂的制备和应用 3.1 LdNPV制剂的制备 DB11/T 1432 2017 2 LdNPV制剂的制备 参见附录 C。 3.2防治对象 舞毒蛾亚洲亚种 幼虫 。 3.3防治适期 最佳防治龄 期 为 1 3龄幼虫 。 在正常年份 ，3 月中 旬舞毒蛾亚洲亚种 幼虫 陆续孵化， 3月 中旬 4 月中旬 为最佳 防治 时期；也 可 依据常 见植物 的物 候期预测最佳 防治 时期 ，该虫 13
6、 龄幼虫发生 期与物 候关系 参见附录 D。 3.4使用剂量 防治 13 龄期 幼虫 ，每 hm 2 用 1.5 10 12PIB， 即 1500mlLdNPV制剂；防治 4龄以上幼虫，用量加 倍 ，每 hm 2 用 3.010 12 PIB，即 3000mlLdNPV制剂。 3.5施用方法 使 用 时，用 水稀释 制剂， 均匀喷洒到 树叶 上。 具体施用方法见表 1。 表 1 舞毒蛾亚洲亚种核型多角体病毒制剂施用方式及施用浓度 喷雾类型 地面喷雾/ 飞机喷雾 防治 13 龄幼虫 稀释倍数 防治 4龄以上幼虫 稀释倍数 常量喷雾 地面喷雾 1000 500 飞机喷雾 30 15 低 量喷雾 地
7、面喷雾 100 50 飞机喷雾 10 4 超 低容量喷雾 地面喷雾 4 1.5 4 防治效果调查 4.1调查指标 检 查 校正 虫口 减退率 表示防治效果 。校正 虫口 减退率越高 ，表示防治效果 越好 。 4.2调查时间 制剂喷 施前 调查一 次， 喷施 后第 20d再调查一 次。 4.3调查方法 DB11/T 1432 2017 3 在幼虫发生期 ，针对 舞毒蛾 危害 的树木 进行 调查， 调查表参见附录 E。选择 有 代表性 的地块设立 标 准地。标准 地面积一般为 0.2hm 2 。人工林每 100hm 2 设立标准地 1块，天然林每 300hm 2 设立标准地1 块。在 标准地内 随
8、机选取 20株树为 标准 株， 采用标准 枝法 和阻隔 法调查防治 前后 的幼虫数 量。 4.4计算公式 虫 口 减退率 、校正 虫口 减退率计 算方法 分别见 公式 （1）、（2 ）： 虫 口 减退率 （% ）= 100 （ 1） 校正虫 口减退率 （% ）= （ 2） 防治前 活虫数 防治前 活虫数 -防治 后活 虫数 100-对 照区虫 口减退率 防治区虫 口减退率 -对 照区虫 口 减退率 DB11/T 1432 2017 4 附 录 A （资料性附录） 舞毒蛾亚洲亚种的形态特征 A.1 卵 圆形， 两侧稍扁 ，直 径 1.3mm； 初期 杏黄色 ，以 后转为 褐色 ；数 百粒 到千
9、余粒 卵产在一 起，成 为 一卵块 ，上 被黄褐色绒毛 。 A.2 幼虫 1龄幼虫 头宽 0.5mm，体 黑褐色， 刚毛亦 长， 刚毛 中间 具有 呈泡 状扩大 的毛 ，称 为 “风帆” ，是 减 轻身体 重量 易被风吹摇摆 进行扩散 的构造 。2 龄幼虫 头宽 1.0mm、 黑色 ，体 黑褐色 ，胴 部显现 出两块黄 色斑纹 。3 龄幼虫 头宽 1.8mm，头黑色 ，胴 部花纹 增多。4 龄幼虫 头宽 2.9mm， 头暗褐色 ，出 现两条黑斑 纹。5 龄幼虫 头宽 4.4mm， 头黄褐色 ，两条黑斑纹更鲜明。 老熟 幼虫 体 长 50mm 70mm，头 宽 6mm、 黄褐 色，具 “八”字形
10、灰黑色条纹； 背线灰黄色 ，亚 背线 、 气门 上线及气门 下线 部位各 体节 均有 毛瘤 ，共 排成 6纵列 ，背 面两侧毛瘤 上 的刚毛短 、黑褐色 ，气门下 线一列 毛瘤 上的 刚毛 最长 、灰褐色 ，背 上两 列毛瘤色泽鲜艳 ， 前 5对 为蓝色 ， 后 7对 为红色 。 A.3 蛹 体长 19mm34mm 。红褐色或黑褐色 ，被 有锈黄色毛丛 。 A.4 成 虫 雌雄异 型。 雄蛾体 长约 16 mm21mm ，翅 展 37 mm 54mm； 头部 黄褐色 ，复眼 黑色， 下唇须向 前 伸，第 2节长 ，第 3节短；后足胫 节有 2对距 ；前翅 暗褐色或褐色 ，有 深色 锯齿状 横线
11、 ，中 室中 央有 1 个黑褐色 点， 横脉 上有一 弯曲形黑褐色纹 ，前 、后 翅反面 黄褐色 。雌 蛾体长 22mm30mm ，翅 展 58 mm 80mm左右 ；前 翅黄 白色 ， 横脉明显 具有 “ ”形黑褐色斑纹 一个 ，其 他斑纹 与雄 蛾 近似 ，前后 翅外缘 每 两 脉间有 1个黑褐色斑 点；腹 部肥 大， 末端着 生黄褐色毛丛 。 DB11/T 1432 2017 5 附 录 B （资料性附录） 北京地 区舞毒蛾 主要危害植 物种 类 北京地区 舞毒蛾主要 危害植物种 类见表 B.1 表 B.1 北京地 区舞毒蛾 主要危害植 物种 类（ 以拉丁学名为序 ） 寄主中文名称 寄主
12、拉丁学名 复 叶 槭 Acer negundo L. 杏 Armeniaca vulgaris Lam. 白桦 Berula platyphylla Suk. 构 树 Broussonetia papyifera Linn. 黄 杨 Buxus sinica (Rehd.et Wils) Cheng ex M.Cheng 黄 栌 Cotinus coggygria Scop. 山 楂 Crataegus pinnatifida Bunge 柿 Diospyros kaki L.f. 银 杏 Ginkgo biloba L. 核 桃 Juglans regia L. 华北落叶松 Larix pr
13、incipis-rupprechtii Mayr 苹 果属 Malus Mill. 桑 Morus alba L. 加 杨 Populus X canadensis Moench 樱桃 Prunus pseudocerasus Lindl. 李 Prunus salicina Lindl. 榆 叶 梅 Prunus triloba Lindl. 枫杨 Pterocarya stenoptera C. DC. 蒙古栎 Quercus mongolica Fisch. ex Ledeb 麻栎 Quercus acutissima Carruth. 柳 属 Salix L. 蒙椴 Tilia mog
14、olica Maxim. 榆 属 Ulmus L. DB11/T 1432 2017 6 附 录 C （资料性附录） 制剂制备 C.1 LdNPV的室内增殖 C.1.1 室内条件 温 度 25， 光照 时间 与黑暗 时 间比例 为 14:10，光源 为 白炽灯 。 C.1.2 饲 料 为 人 工饲 料。 C.1.3 饲养工具 透 明 塑料 养虫 杯， 底直 径3.5cm， 顶直 径5.0cm ，杯 高 5cm。 C.1.4 增殖方法 在 养 虫杯 内放入 约 200粒 已消毒 即将 孵化的舞毒蛾 卵粒， 每 3d更换 一次 新鲜饲 料 和养 虫杯 ，并 将 幼虫分 至 40头 /杯 ， 待 幼
15、虫发 育至 3龄末 时， 开始喂饲带 毒 饲料 ， 将 1ml浓度 为 1.010 7 PIB/ml的 LdNPV 液体倒入养虫 杯内 的人工 饲料表 面，阴 干后 待其取 食，5d 后更 换带毒 饲料 ， 及时清理养虫 杯内虫 粪， 防 止 虫体 感染杂菌 。待 80%幼虫 死亡 时， 收集所 有幼虫 ， -10长期 贮存 。 C.2 LdNPV的提纯 C.2.1 LdNPV的提取 将 C.1.4中 收集 的幼虫加 2倍 无菌 水稀释 ，在高 速组织捣碎 机上 ，粉碎 3min后取出， 先用 三层纱 布初步 过滤 ，然 后再 用 80目 筛 子进 一步 过滤 ，滤 液用 16000r/min
16、离心 机离心 15min， 滤液 分为 三层 ， 上层清液 为水 ，弃之 ；中 间浅褐色 沉淀 为病毒 粗提 物，保留 ；底 部黑色 沉淀 为杂质 ，弃之 。 C.2.2 粗提物的 测定 取 1g病毒 粗提 物稀释 至 1000倍， 然后取 1ml稀释 液滴于 血球 计数 板上 ，盖盖玻片 ，在 显微镜 15 40 倍状 态下计数， 对角 线取样 ， 共 取 80小格， 颗 粒边缘 不在 同一 小格 内的 不计，按 公式 C.1计算 粗 提物内 PIB含 量。 如果 粗提 物 含量 低于 1.010 11 PIB/ml， 表明 病毒 粗提 物中 杂质含 量过高 ，应加 2倍 无 菌 水混 匀，
17、 重新 离心 提纯 ， 除杂 质， 直至 含量 合格 。 每 克 PIB含 量 = 平均每 格颗 粒体 数 4000000 1000 （ C.1） 注 ： 1000为 稀释倍数。 DB11/T 1432 2017 7 C.3 LdNPV制剂的 配制 C.3.1 配 制 将 C.2.1中含 量合格 的 LdNPV加 7% 的盐 水， 与 50%中性甘油混合 ，三 者重 量比 为 1:49:50，制成 甘油病毒 悬浮 液。 C.3.2 LdNPV制剂的质量 检测 用多点抽样的方法 ，取1ml C.3.1 中 配 制的 甘油病毒 悬浮液，按C.2.2 中方法测 定， LdNPV 制剂中 PIB含 量
18、在1.0 10 9 PIB/ml以 上 ，为 合格 。 C.3.3 LdNPV制剂的调制 将 上 述甘油 病毒 悬浮 液加 无菌水 调节 浓度 至1.0 10 9 PIB/ml。 C.4 LdNPV制剂的 运输 和贮存 C.4.1 运输 25以下 ，避免受热 、暴晒 ， 避免紫 外线 照射 。 C.4.2 贮存 密封、 避光 、避紫 外线 照射 。 0 4 条件下 保质 期 2年； 25以下 保质期 6个月 。 DB11/T 1432 2017 8 附 录 D （资料性附录） 舞毒蛾亚洲亚种 13 龄幼虫发生期 与常见植 物物 候关系表 舞毒蛾亚洲亚种 13 龄幼虫发生 期与常 见植物物 候关
19、系表 D.1。 表D.1 舞毒蛾亚洲亚种 13龄 幼虫发生期 与常见植 物物 候关系 表 物候植物中文名称 寄主拉丁学名 物候 毛 白杨 Populus tomentosa Carr. 落 花 期 （ 也 称 落 果 期 ） 榆 树 Ulmus pumila L. 落 果 期 紫藤 Wisteria sinensisi (Sims) Sweet 开 花初期 杏 Armeniaca vulgaris Lam. 始 花 期 DB11/T 1432 2017 9 附 录 E （资料性附录） 舞毒蛾亚洲亚种幼虫调查表 舞毒蛾亚洲亚种 幼虫调查见表E.1 。 E.1舞毒蛾亚洲亚种幼虫调查表 调查地点： 区 县 （ 分 区 ） 乡镇（林 班） 村 （ 小 班 ） 标准地面积（hm 2 ）： 代 表 面 积 （ hm 2 ）： 天气 ：晴阴雨 温 度 （ ）： 相 对 湿 度 （ ） 调查时间： 年 月 日 调查人： 调查项目 调查内容 寄主植物 树种： 树龄（a ）： 平 均胸径（cm）： 平 均 树高（m ）： 调查株数： 有虫 株数： 有虫株率（）： 舞毒蛾 幼虫数（平均）： 虫情级别：轻 中重 立地条件 海拔（m ）： 坡 位： 上 中 下 坡 度 ： 坡 向 ： 郁闭度： 林下环境： 物候 防治情况 备注 _
