1、ICS 65.020.20 B 41 备案号： 56063-2017 DB11 北京市地方 标准 DB11/T 1429 2017 动物养殖场消毒效果评价规范 Regulation of disinfectant effect evaluation of farms 2017 - 06 - 29发布 2017 - 10 - 01实施 北京市质量技术监督局 发布DB11/T 1429 2017 I 目 次 前 言 . II 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 样品采集 . 1 4 检测 . 2 5 检测数据处理 . 3 6 检测结果判定 . 4 DB11/T 1429 2017 I
2、I 前 言 本标准按照 GB/T 1.12009 给出的规则起草。 本标准由北京市农业局提出并归口。 本标准由北京市农业局组织实施。 本标准起草单位：北京市兽药监察所、北京农学院、北京市动物疫病预防控制中心、北京市实验动 物管理办公室。 本标准主要起草人：杜继红、吕涛、刘钧、崔德凤、刘晓冬、李根 平、 周德 刚、张永 红、 张小飞、 马志军 、任伟 、刘文 菊、 沈红、 孙志 文、 王亚芳 、王海良 、孙化一 。DB11/T 1429 2017 1 动物养殖场消毒效果评价规范 1 范围 本标准规定 了动物 养殖场消毒后 样品采集、检测、检测数据处理 和检测结果判定的 方法 。 本标准 适用 于
3、北京 地区畜禽养殖场和普通级 实验动物 养殖场 。 2 规范性引用文件 下列文件 对于 本文件的 应用 是必不可少 的。 凡是注日期的引用文件 ，仅 所 注日期的 版本 适用 于 本文 件。凡是不注日期 的引用文件，其最新版 本（包括 所有的 修改 单）适 用于 本文件。 GB 4789.2 食 品安全国家 标准 食 品微生 物学检验 菌落总 数测定 GB/T 18204.32013 公 共场所 卫生 检验 方法 第3 部分： 空气微生 物 3 样品采集 3.1 舍内物体表面样品 3.1.1 时间 分别于消毒 处理前 后 15 min30 min( 或根据 消毒剂作 用 效果 产生时间自 定）
4、进 行 采样。 3.1.2 面积 被 采 面积 100 cm 2 的取 全部表面；被 采面积 100 cm 2 的至 少要 取 100 cm 2 。 3.1.3 采样点 采样区 域包括 舍内墙壁 和设备设 施 （笼具、 水线 、 料槽 ） 。 墙壁选择 4 点 （ 东 、 南 、 西、北 墙各 1 点 ）， 距地面垂直高度为 0.8 m 1.5 m，分别 位 于墙壁 的中央 平整 处，避开 通 风和 降温设 施；笼具 选择 4 点， 位于整体 中央平 整 处；水线选择均匀 分 布 4 点 ，位 于整体 中央 平 整处；料槽选择 4 点， 位于槽 的外壁 中央 平整 处。 3.1.4 方法 将边
5、长 10 cm 的正方形 规板用火焰灭菌后，放置 于 物品表面 ， 用 蘸取适 量灭菌生理 盐水的棉拭子 在规板 范围内横 、竖各 5 次滚动 涂抹取 样(同 一采样拭子不应 在同 一表面重复涂抹)， 无菌 操作放入装 有 10 mL含适宜中和剂（中和剂的验 证试验参见附录A ）的灭菌生理盐水试 管中，塞紧试 管 ， 标 记 并记 录 。 3.2 舍内空气样品 3.2.1 时间 DB11/T 1429 2017 2 分别于消毒 处理前 和消毒 处理后 1530 min （或 根据 消毒剂作 用效 果产生时间自定 ）进 行 采样( 消 毒时要 关闭 畜舍门窗 )。 3.2.2 采样点 采用 5
6、点法 布置测 点，布置 方法 按 GB/T 18204.3 2013中 附录A 的规定 执行 ， 采样高度 根据 养殖 场情况 设定 ，地 面 养殖 动物 为 地面 ， 笼 养动物 高度为笼架 高度 的中 央水 平面 。 舍内面积 不大 于 50 m 2 的 布置 5 个测 点， 每增加 20 m 2 增加 2 个 测点 。 3.2.3 方法 采用空气 沉降 菌法 检测 ，按 GB/T 18204.3 2013进 行操作 。 3.3 场区道路样品（硬化道路或土路） 3.3.1 时间 分别于消毒 处理前 和消毒 处理后 1530 min （或 根据 消毒剂作 用效 果产生时间自定 ）进 行采样。
7、 3.3.2 采样点 采样区 域为 养殖场 主干道 ，选择均匀 分布 4 点， 位 于道路 中央 平整 处。 3.3.3 方法 硬化道路 样品采集 方法 同 3.1.4 ；土路 为用 灭菌不 锈钢勺铲 取道路 表面 土样 20 g 30 g,装于 含适 宜中和剂（ 中和剂 的验 证试 验 见附录 A） 的灭 菌容器内 ， 盖好 ，标 记并 记录 。 4 检测 4.1 消毒前后样品检测 4.1.1 舍内物体表面 用 力震荡 采样 试管 10 15 次 或用 漩涡混合器混 匀 样品， 使样品中的 细菌 洗入灭菌生 理盐水 中， 用灭菌 吸管 或加 样器吸 取 0.5 mL ，加 入装 有 4.5
8、mL 灭菌生 理盐水 的试 管中 ，10 倍系 列倍比稀释 ，每 个稀释 度分别 取 0.5 mL 混合液 于灭 菌平 皿， 用倾 注法倒 入培 养基 ，36 1 培 养 48 h 进行 细 菌计数。 每个稀释 度均 需作平行 样， 计算 样品 平均 菌落数。 细 菌 计数采用 平板 计数 法， 按 GB 4789.2 的规定 操 作。 4.1.2 舍内空气 将 采样平 皿置 36 1 培 养 48 h 进行 细 菌计 数 ， 按 GB/T 18204.32013 计算 舍内 空 气平均 菌落 数。 4.1.3 场区道路 4.1.3.1 硬路 按4.1.1 检测。 4.1.3.2 土路 DB1
9、1/T 1429 2017 3 无 菌 称 取 混合后土样 10 g，放入 100 mL 灭菌生理盐水中 ，用力震荡， 混匀，静置 片刻，待泥沙 下 沉 后， 取 上清液 作 10 倍系列 倍比稀释 。根据土壤 中 含菌 情况 ，选择 3 个 适宜稀释 度 ，每个稀释 度 分别取 0.5 mL 混合液 于灭 菌平 皿， 用倾 注法 倒入 培养基 ，36 1 培 养 48 h 进 行细 菌计 数。 每个稀释 度均 需作平 行样 ，计算 样品 平均 菌落 数。 4.2 对照试验 4.2.1 空白对照 将 未 用的 同批培 养基 置 36 1 培养 48 h ，若 有菌生 长， 说明 所用 培养 基
10、有污染 ，试 验无 效，更换 后重 新进 行。 4.2.2 阴性对照 取 0.5 mL 稀释液 （ 即灭菌生理 盐水 ）放入灭 菌平 皿中， 用倾 注法 倒入 培养 基，36 1 培 养 48 h， 若有菌生 长， 说明 所用 稀释液 有污染 ，试 验无效， 更换 后重 新进 行。 4.2.3 阳性对照 4.2.3.1 标准菌 检测使 用标准 菌为 金黄色葡萄球 菌（ ATCC6583）和 大肠杆 菌（ ATCC25922）。 4.2.3.2 方法 取过夜培 养的标准 菌悬液 ，10 -7稀释 后取 0.5 mL 稀释液 放入灭 菌平 皿中 ，用 倾 注法 倒入 培养基， 36 1 培 养 4
11、8 h，细 菌 计数 约为 50 cfu/皿 ，表明 标准 菌状态 良好 ，所用培 养基 适用性 好。 5 检测数据处理 5.1 杀菌率的计算 平 板 计数 方法 见GB 4789.2 ，以全部 采样 点的 平均菌落 数 作为 样品 平均 菌落数 ，根据 消毒前 后样品 平 均 菌落 数 计算杀 菌率， 见公式(1)， 以杀菌 率评价消毒效 果。因现 场试 验 环境条件 变化较 多， 难以 统 一，无 法测定准 确的 自然 沉降率 ，故 不考虑 自然衰亡 因 素。 % 100 0 1 0 - = N N N R (1) 式 中： R 杀菌 率； N0 消毒 前样品 平均 菌落 数 ； N1 消
12、毒后 样品 平均 菌落 数。 示例： 某鸡舍，消毒前采样， 舍内墙壁上的平均菌落数为 99 cfu/100m 2 。用 某 消毒剂喷雾消毒 30 min后 采样，菌落数减 至 10 cfu/100m 2 。则该消毒剂处理 30 min后，舍内墙壁上自然 菌的杀菌率可按下法计算： % 9 . 89 % 100 99 10 99 = - = R DB11/T 1429 2017 4 5.2 数据选择范围 按 GB 4789.2 规定 进行 。 6 检测结 果判定 动物养殖场 依据 平均 杀菌 率判定 消毒效 果的 方法 见表 1。 表 1 动物养殖场消毒效果评价表 评价等级 平均杀菌率（% ） 舍
13、内物体 舍内空气 厂区道路 优 90.0 90.0 90.0 良 85.0 90.0 85.0 90.0 85.0 90.0 合 格 80.0 84.0 80.0 84.0 80.0 84.0 不 合 格 80.0 80.0 80.0 注 ： 表内为有动物舍的判定标准；除特殊要求外，无动物舍的判定标准，舍内空气平均杀菌率90.0%为 合 格 。 DB11/T 1429 2017 5 A A 附 录 A （ 资料 性附录 ） 中和剂 验证 试验 A.1.1 中和剂 验证 试验方法 通过设 定下列 实验 来确 定所 选 的中 和剂是 否合 适（ 见表A.1 ）。 表 A.1 中和剂 验证 试验方法
14、 试验组别 说明问题 1. （消毒剂 +菌液）+ 中和剂 证明中和剂能否中和残留消毒剂的抑菌作用 2. 中 和剂+ 菌液 证明中和剂有无抑菌作用 3. （消毒剂 +中和剂）+ 菌液 证明消毒剂与中和剂的反应产物有无抑菌作用 4. 消毒剂+ 菌液 证明消毒剂在试验浓度下是否有杀菌或抑菌作用 5. 菌 液 证 明 菌 种与培养基是否适宜 6. 未 接种的培养基 证明培养基是否污染 A.1.2 试验原则 A.1.2.1 该项试 验所用 试验标准 菌应 为 消毒 试验 选用 菌株 中抗 力 最弱者 。 A.1.2.2 所用试 剂、 培养 基及 其他材 料 都应一 致。 A.1.2.3 应以消毒剂 未用中 和剂 中和时的 最低 有效 浓度 作为试 验 浓度 。 _
