1、ICS 65.120B 46DB13河 北 省 地 方 标准DB13/T 1098-2009饲料中蛋白质的测定2009-06-17发布2009-07-02实施河j匕省质量主v_术监督局 发布DB13/T 1098-2009前 月巨 口习本标准由河北省畜牧兽医局提出。本标准起草单位:河北省饲料产品质量监督检验站、河北农业大学。本标准主要起草人:武英利、王萍、赵国先、李海龙、霍韶瑜、武利勇。DB13/T 1098-2009饲料中蛋白质的测定范围本标准规定了饲料中蛋白质(俗称真蛋白质)的测定方法。本标准适用于饲料蛋白原料、浓缩饲料和配合饲料中蛋白质(俗称真蛋白质)的测定。2规范性引用文件下列文件通过
2、本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注明日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 601-2002化学试剂 标准滴定溶液的制备GB/T 6432-1994饲料粗蛋白质测定方法GB/T 6682-2008分析实验室用水规格和试验方法3原理试样水溶液经煮沸后在碱性条件下加人硫酸铜溶液使蛋白质变性凝结而沉淀，用热水洗涤沉淀，得到的沉淀物再用凯氏定氮的方法测定其含氮量，然后，将结果乘以6.25即为试样的蛋白质含量。4仪器和设备4.，分析天
3、平:感量为0.000 1 g4.2样品粉碎机。4.3分析筛:孔径0.50 mm o4.4电炉:温度可调1 500 W2 000 W或消煮炉:410土5cCo4.5刻度吸管，5 mL, 10 mLo4.6烧杯，250 mLo4.7三角漏斗。4.8中速定量滤纸:直径9 cm-11 cmo4.9电热式恒温干燥箱:可控温度75土29C 04.10凯氏烧瓶:100 mL或250 mL或消解管。4.11凯氏蒸馏装置或定氮仪(以凯氏定氮原理制造的各种类型半自动、全自动蛋白测定仪)。4.12锥形瓶，250 mLo4.13酸式滴定管，25 mLo5试荆方法中所用试剂，除另有规定外均为分析纯试剂，所用水应符合GB
4、/T 6682三级以上用水要求。5.1浓硫酸，无氮。5.2五水硫酸铜(CuSO4.5H2O )5.3无水硫酸钠或无水硫酸钾。5.4氢氧化钠。DB13/T 1098-20095.5硼酸。5.6甲基红。5.7澳甲酚绿。5.8乙醇，95%05.9盐酸。5.10氯化钡。6溶液6.，混合催化剂称取0.4 g五水硫酸铜，6g无水硫酸钠或无水硫酸钾，研碎混匀。6.2复教化钠溶液，浓度400睡称取氢氧化钠400.0 g，加水1 000 mL溶解，摇匀。6.3硼酸溶液，浓度20 g/L称取硼酸20.0 g，加水1 000 mL溶解，摇匀。6.4混合指示剂甲基红乙醇溶液(1叭):称取甲基红0.10 g，加乙醇10
5、0 mL溶解，摇匀;澳甲酚绿乙醇溶液(5昨):称取甲基红0.50 g，加乙醇100 mL溶解，摇匀;上述两溶液等体积混合或按照仪器要求配制，阴凉处保存期为3个月。6.5氮舰化钠溶液，浓度25叭称取氢氧化钠2.5 g，加水溶解定容至100 mL，摇匀。6.6硫酸铜溶液，浓度100 g/L称取五水硫酸铜10.0 g，加水溶解定容至100 mL，摇匀。6.7盐酸标准滴定溶液，浓度0.1 moUL按GB/T 601的规定制备、标定。6.8抓化钡溶液，浓度50叭称取氯化钡5.0 g，加水100 mL溶解，摇匀。7试样的选取和制备选取具有代表性的试样，用四分法缩减至200 g，粉碎至0.50 mm，装人密
6、封容器中备用。8分析步骤8.1准确称取试样0.5 g- 1 g，放人250 mL烧杯中，加水75 mL，搅匀;置于电炉上加热煮沸30 min,期间应不断搅拌，并补加热水以保持水溶液体积不少于75 mL o8.2将煮过的试样溶液稍冷，慢慢滴加2 mL氢氧化钠溶液(6.5)，边加边缓慢搅拌，使试样溶液呈碱性，然后，慢慢滴加5 mL硫酸铜溶液，边加边缓慢搅拌。重复上述操作三次，每次加人氢氧化钠溶液(6.5) 6 mL，硫酸铜溶液5 mL。静置陈化2h以上或过夜。8.3沉淀用中速定量滤纸采用倾泻法过滤，沉淀用80以上的热水洗涤7-10次，直至用氯化钡溶液检验滤液无沉淀或浑浊产生为止。沉淀物连同滤纸置7
7、5干燥箱中干燥1 ha8.4干燥后的沉淀物连同滤纸放人凯氏烧瓶(或消化管)中，加人巧mL浓硫酸，6.4 g混合催化剂，按照GB/T 6432的规定进行消解并测定其中氮的含量。同时做空白试验。8.5结果计算与表述8.5.1结果计算DB 13/T 1098-2009蛋白质含量按(1)式进行计算:(V2一V1)x C x 0.0140“6.25x 100(1)M式中:P蛋白质含量，%;V,空白消耗盐酸标准滴定溶液体积，mL;V2试样消耗盐酸标准滴定溶液体积，mL;C盐酸标准滴定溶液浓度，moUL;M试样质量，g;0.0140每毫摩尔氮的克数;6.25氮换算成蛋白质的平均系数。8.5.2结果表述每个样品应取2份平行样进行测定，以其算术平均值为分析结果，结果保留两位小数。9重复性当蛋白质含量在10%以上时，允许相对偏差不超过2%;当蛋白质含量在10%以下时，允许相对偏差不超过3%0
