1、ICS 65. 150B 5 0 D B 1 3河北省地方标准DB13/ T 1127-2009中华鳖穿孔病防治技术规范2009-08-10发布2009-08-25实施河d匕省质量技术监督局发布DB1 3汀1 12 7 - 2 0 0 9月i j青本标准由河北省水产局提出。本标准起草单位：保定市水产技术推）站、廊坊市水产技术推广站。本标准主要起草人：张耀红、刘学军、杨方辉、徐彩利、李盼刚、王艳池、葛京、张修建、韩占江、高倩DB13/ T 1127- 2009中华鳖穿孔病防治技术规范范围本标准规定了由嗜水气单胞菌、产碱假单胞菌引起的中华鳖穿孔病的诊断和防治技术。本标准适用T中华鳖养殖生产中穿孔病
2、的诊断和防治。规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB汀6682-1992分析实验室用水规格和试验方法GB/T 18088-2000出入境动物检疫采样SC/T 1010中华鳖池塘养殖技术规范SC/T 1047中华鳖配合饲料NY 5051无公害食品淡水养殖用水水质NY/T 5067无公害食品中华鳖养殖技术规范NY 5070无公害食品水产品中渔药残留限量NY 5071无
3、公害食品渔用药物使用准则NY 5072无公害食品渔用配合饲料安全限量3流行特点及病因发病期4月一10月，5月一7月为高发期，流行水温25 C-30C；可感染任一阶段的中华鳖，尤其对温室幼鳖危害最大，发病率可达50%；常与腐皮、疖疮病并发：具有流行面广、传染性强、病程长、伴随继发感染等特点；饲养环境恶化、饲料腐败变质、受伤等导致鳖体抗病力下降，是该病发生的主要原因。4病原中华鳖穿孔病的致病菌为气单胞菌属的嗜水气单胞菌（Aeromonas hydr叩hila)和产碱假单胞菌(Pseudomonas pseudoalcaligenes) o5样品采集、保存选择症状明显的中华鳖，按GB/T 18088
4、-2000进行产地采样、保存：在无菌操作下挑取病灶放入盛有无菌水和玻璃珠的二角烧瓶中，120 rpm振荡，4保存。实验室用水符合GB汀6682-1992要求。6诊断6. 1临床诊断发病初期，病鳖的背甲、腹甲及裙边出现直径大约为0. 2 cm-1.0 cm的白色疮痴，其周围出血，疮痴挑开后，内容物呈脓汁状，并伴有腥臭味；随着病情的发展，患部溃烂成洞穴，深者通达体腔，病鳖行动缓慢，反应迟钝，拒食，头不能缩回背甲内；解剖观察，病鳖肝、胰、脾肿大，呈化脓性淤血，颜色趋紫黑色，口腔、咽部淤血发黑，肠充血，肺呈紫黑色，有的腹腔内有腹水。DB13/ T 1127-20096.2病理诊断6.2. 1血细胞形态
5、及生理指标病鳖血液中红细胞总数减少，低于4.5X105个mm3，且形态不规则、破碎的、不成熟的红细胞增多。白细胞总数明显增多，高于1. 5X 10丬个mm3，其中单核细胞明显增加，占白细胞总数的2以上；嗜中性粒细胞明显增加，变形较大，部分细胞内特殊颗粒排列疏松，有的颗粒散落一边；部分淋巴细胞个体增大。6.2.2血液生化特性病鳖的血液中谷草转氨酶、葡萄糖、钙均值分别大于900 IUL一, 5 mmolL一，, 2.2 mmolL ；血液氯、钠、尿素氮均值分别小于80 mmolL, 110 mmolL一，、2.8 mmolL 6.2.3器官组织显微观察特性6.2.3. 1肺局部坏死，肺泡壁上皮细胞
6、和毛细血管内皮细胞肿胀、变性，胞核固缩、碎裂乃至坏死解体。肺泡壁毛细血管破裂、出血。肺泡隔内血管充血，部分红细胞核消失、解体，仅留残骸；并有血浆渗出和嗜中性白细胞。肺泡内有许多组织渗出液、红细胞及嗜中性白细胞。肺组织间嗜中性白细胞大量浸润，核碎裂，坏死成脓细胞，肺组织呈局部化脓灶。6.2.3.2肝脏肝内黑色素增多，淤血：肝细胞混浊肿胀；肝血管充血，血浆渗出；进而细胞核碎裂，溶解，胞质水样变性，并有嗜中性自细胞浸润，白细胞核碎裂，坏死成脓细胞，形成化脓灶。6.2.3.3肾脏肾小管上皮细胞混浊肿胀。随着病情的发展，肾局部坏死，肾小管上皮细胞核碎裂、溶解，管腔内有嗜伊红的蛋自及红细胞。有大量红细胞从
7、血管中渗出，嗜中性白细胞浸润，坏死，形成化脓灶。肾小球萎缩，囊腔相对扩大，并有嗜伊红的浆液渗出物。6.2.3.4脾脏脾包膜出血，脾小叶界限模糊，红髓扩大并聚集大量红细胞，白髓明显缩小。6 . 2 . 3 . 5肠肠壁充血、出血。肠腔内大量嗜中性白细胞浸润，核固缩、碎裂，变成脓细胞。6 . 2 . 3 . 6心心肌间有大量渗出液和红细胞；部分心肌纤维弯曲、断裂。6.3病原学诊断6.3. 1嗜水气单胞菌6.3.1.1分离培养在无菌状态下，取病鳖的肺、脾、肝、血液等病料分别接种于普通肉汤培养基中（接种前加30 g/mL氨苄青霉素），置28C -30C培养6 h-8 h，分别移植普通琼脂平板，再继续培
8、养18 h-24 h，挑选纯化单独大菌落分别移植厌氧培养基、M培养基、SS培养基、EMB培养基、RS培养基、血平板培养基，革兰氏染色，分离菌保存，按Bergeys系统细菌学分类鉴定和检索表程序对分离菌株进行鉴定。6.3.1.2鉴定菌体短杆状，直形略有弯，大小（(0.6-0.9)林mX (1.0-2.0)林m，两端钝圆，单个或两个相连，无英膜、无芽抱，极生单鞭毛，有运动性。结合生理生化特性鉴定分离菌为嗜水气单胞菌。6.3.1.3分离菌的人工感染将分离菌株用无菌生理盐水稀释到5X 10个ml-5. 5 X 10个ml。之后取巧g-20 g的健康幼鳖各10只进行腿部肌肉注射和腹甲划痕后涂抹，每只0.
9、 1 ml, 1 h后分别置于不同的水族箱中，于（30士1)水温中饲养。对照组注射或涂抹相同剂量的生理盐水。6-7 d后试验组幼鳖出现于自然病历相同的感染结果。并从其肝脏、肾脏、皮肤病灶分离出与接种菌相同的细菌。而观察期内对照鳖无异常表现。因此嗜水气单胞菌是穿孔病的致病菌。DB 13汀1127-20096.3.2产碱假单胞菌6.3.2. 1分离培养在无菌状态下，取病鳖的肝、脾、肾等病料接种普通营养琼脂平板28C培养24 h，挑取单个菌落接种普通营养琼脂斜面进行纯培养，28培养24 h。取纯化的细菌接种于肉汤培养基，28培养24 h。观察分离得到的菌落形态并进行革兰氏染色。按Bergey s系统
10、细菌学分类鉴定和检索表程序对分离菌株进行鉴定。6.3.2.2鉴定革兰氏阴性短杆菌，单个或成双排列，链状较少，一般大小为（(0.4-0-6)卩mX (1.0-1.5)阝mo无芽胞，无荚膜，极生单鞭毛，有运动力。结合生理生化特性分离菌为产碱假单胞菌。6.3.2.3人工再感染方法步骤及感染结果同6.3.1.3，因此产碱假单胞菌是穿孔病的致病菌之一。7防治7. 1预防7.1.1水质调控养殖池的水质指标符合NY 5051的要求，室内池水温稳定在28士2C，养殖过程中采用微生态制剂调水：室外池采用鱼鳖混养、移栽水草、接种有益微生物等措施调控水质。7.1.2环境消毒水体、用具、饵料台、晒背台的消毒按照Sc汀
11、1010进行；温室采用甲醛喷雾或紫外灯光照射灭菌，紫外灯设置密度40瓦八Om2，每天照射15 min-20 min.7.1.3饲喂每日投喂2-5次，定点投喂符合SC/T 1047, NY 5072规定的全价配合饲料，以30 min内吃完为宜。7.1.4逐级培育，合理放养根据NY/T 5067，适时分级、分池饲养，避免因争斗产生外伤。7.1.5病鳌隔离发现患鳖，隔离治疗。7.1.6中草药预防7.1.6.1芪参免疫散将芪参免疫散按每kg鳖lg-2g（以5投饵率计）制成药饵，投喂Id-2d，间隔15 d重复给药。7.1.6.2六味地黄散将六味地黄散按每kg鳖0. 1 g（以5投饵率计）制成药饵，连续
12、投喂5 da7. 1.7免疫预防扩大培养分离的嗜水气单胞菌、产碱假单胞菌，制备灭活二联菌苗，菌体浓度2.5 X 108/mL-3X108/mL, 50 g的幼鳖每只注射鳖体。.2 mL-0.3 mL，可获得85以上的保护率。7. 2治疗7.2. 1肌肉注射在后腿肌肉注射庆大霉素或卡那霉素10万IU/kg-20万IU/kgo7.2.2投喂中草药药饵常用中草药药饵品种及用法用量见表10DB1 3厅1127- 2009表1品名主要成分用法用量备注银翘板蓝根散板蓝根、金银花、黄芪、连翘、黄柏按每kg鳖0. 16 g-0. 24 g制成药饵，连续投喂4d-6 do 1、用量均以5投饵率计；2、使用前加适
13、量粘合剂，与饵料混匀、粘合后投喂。大黄芩蓝散大黄、大青叶、地榆、板蓝根、黄芩按每kg鳖0.25g一。.5g制成药饵，连续投喂3 d-5 do三黄散黄芩、黄柏、大黄、大青vi-按每kg鳌0.25g制成药饵，连续投喂7do大黄五倍子散大黄、五倍子按每kg鳖0. 5 g-1. 0 g制成药饵，连续投喂5 d-7 de7.2.3投喂抗菌药饵7.2.3. 1有效抗菌药物筛选通过新分离的菌株采用药敏片直接扩散法筛选对其敏感的药物，抑菌圈直径大于16 mm，可以作为优选药物。优选药物有庆大霉素、诺氟沙星、妥布霉素、多粘菌素、氟苯尼考、阿米卡星、盐酸多西环素等。7.2.3.2药饵投喂常用抗菌药饵及使用方法见表
14、2.表2名称规格用法用量备注氟苯尼考粉100: 10按每kg鳌用本品0. 1 g-0.巧g制成药饵，一日一次，连续投喂3d-5 de 1、用量均以5投饵率计；2,使用前加适量粘合剂，与饵料混匀、粘合后投喂。3、使用及休药期遵循NY 5071, NY5070的规定。诺氟沙星粉100: 5按每kg鳌用本品0. 4 g-0.6 g制成药饵，一！J一次，连续投喂3 d-5 do诺氟沙星、盐酸小劈碱预混剂100 g:诺氟沙星9g+盐酸小劈碱2g按每kg鳖用本品0.6g制成药饵，一日一次，连续投喂3 de盐酸多西环素100: 10 (1000万单位）按每kg鳖用本品0. 2 g制成药饵，一！一次，连续投喂
15、3 d-5 do7.2.4水体消毒常用水体消毒剂及使用方法见表30表3名称规格用法用量备注聚维酮碘溶液1 0 %全池泼洒本溶液0.45 mL/m3 -0.75 mL/m3隔日一次，连用2次3次。水体缺氧时禁用；勿用金属容器盛装；勿与强碱类物质和重金属物质混用。苯扎溴铵溶液5全池泼洒本溶液2 mL/m，一3 mL/m3，每隔2d-3d一次，连用2次3次。勿用金属容器盛装；禁与阴离子表面活性剂、碘化物和过氧化物等混用；用后注意增氧。二氧化氯生石灰二氧化氯1 0 %按0.3 g/m3-0. 5 g/m3将二氧化氯制成溶液，全池泼洒，隔日一次，连用2次；7d后，全池泼洒生石灰50 g/m3一次。先将10倍药量的水称量于水桶中，再将二氧化氯粉剂缓缓倒入水中，搅拌均匀，静置10分钟，待溶液变成深黄色，再加水稀释2 000倍后全池泼洒，禁止先在水桶中放药，后倒水溶解；勿用金属容器盛装海因类8 %按0. 4 g/m3一。. 5 g/m3将二浪海因或浪氯海因用1 000倍以I：的水稀释制成溶液，全池均匀泼洒，每日一次，连用2次。缺软水体禁用；透明度大于30 cm时，剂量酌减；休药期500度一1eDB 13/ T 1127-20097.2.5综合治疗采用7.2. 1或7.2.2, 7.2.3进行治疗的同时，可根据条件选用7.2.4的任一方法进行水体消毒。
