1、电子显微镜技术及在病理诊断上的作用,小组成员 高玉梅 于 虹 郭 峰 刘 阳 张 杰 指导教师 吴 岩 教 授,2007级电子显微镜技术硕士研究生课程,电子显微镜技术及在病理诊断上的作用,一、电子显微镜技术 二、诊断病理学 三、电子显微镜技术在病理诊断上的作用 四、讨论,（一）概念,电子显微镜技术：也称电子显微技术 或电子显微术,概念,1、电子显微镜 ：是用电子束成像的显微镜，电子显微镜是一种高精密度的电子光学仪器，它具有较高分辨率本领和放大倍数，是观察和研究物质微观结构的重要工具。,发明背景：它是在发现电子束具有波动性质及利用磁场改变电子束行径，在上述理论的指导下发明出的。电子显微镜主要分为
2、两种类型：一种是观察样品内部超微结构的透射电子显微镜，另一种是揭示样品表面形貌的扫描电子显微镜。 电子显微镜特征：电镜与光镜的区别扫描电镜与透射电镜比较：（见下表）,扫描电镜和透射电镜比较,本图片来自中科科仪,本图片来自中科科仪,2、样品制备,透射电镜样品制备的常用方法：包括超薄切片、冷冻复型、负染色等。 扫描电镜样品制备：比透射电镜样品制备简单。除保存样品表面形貌结构外，只要求样品干燥并能导电，而不需包埋和切片。制备方法与透射电镜样品制备方法一样 。,电子显微镜技术及在病理诊断上的作用,一、电子显微镜技术 二、诊断病理学 三、电子显微镜技术在病理诊断上的作用 四、讨论,二诊断病理学概述,病理
3、学是研究疾病病因、发病机制、形态结构、功能、代谢变化的一门基础医学及其与临床医学之间的桥梁学科。 主要包括基础病理学、实验病理学及诊断病理学(以往称外科病理学或临床病理学) 。各级医院病理科所从事的工作主要是诊断病理学。 病理检查内容通常包括活体组织检查、手术切除标本检查、术中冰冻检查、细胞学检查、尸体解剖检查等。 病理检查的手段很多,如:HE 常规检查、特殊染色(组织化学) 、免疫组化、原位分子杂交、聚合酶链反应( PCR) 、电子显微镜检查、病理图像分析、流式细胞仪检查、细胞培养、传真病理学( telepathology) 等。,电子显微镜技术及在病理诊断上的作用,一、电子显微镜技术 二、
4、诊断病理学 三、电子显微镜技术在病理诊断上的作用 四、讨论,三电子显微镜技术在病理诊断上的作用,（一）电镜检查起决定性作用 （二）电镜检查起参考和修正作用 （三）电镜检查起验正作用,三电子显微镜技术在病理诊断上的作用,（一）电镜检查起决定性作用：电镜发现特异性超微结构信息做出最后病理诊断。例：男,39 岁,发现右侧颈部无痛肿物1 年余,花生米大,取肿物做活检。光镜:增大的淋巴结,结构紊乱,但仍残留滤泡与淋巴窦,窦腔及淋巴索充以大量胞质丰富的嗜伊红细胞,直径约20 m。核圆,卵圆或扭曲状。间有增生的淋巴细胞及嗜酸性粒细胞。电镜:大细胞排列疏松、无连接、胞质宽广,见有似网球拍或柄的双膜结构(Bir
5、beck 颗粒) ,证明光镜下嗜伊红大细胞为朗格汉斯细胞(图1) 。诊断为淋巴结朗格汉斯细胞组织细胞增生症。电镜诊断具有独特的确诊价值。,图1 朗格汉斯细胞组织细胞增生症:见双模构成的似网球拍状的Birbeck 颗粒。 EM 10 000 注：图片取自 张瑞祥,齐洁敏, 张洁茹等.235例疑难病理标本的电镜诊断价值 .临床与实验病理学杂志;2002 ;15（5）,（二）电镜检查起参考和修正作用：电镜获得的信息对光镜结果予以补充或修正,最终做出最后病理诊断。,例：男,因左颌下淋巴结肿大就诊。经淋巴结活检,病理诊断为淋巴组织增生。不久颌下淋巴结又肿大,再次淋巴结(颌下) 活检病理诊断为恶性淋巴瘤(
6、免疫母细胞型) 。电镜:瘤细胞大、多边形或不规则形,核质比大,核膜弯曲,不规则或奇特的内陷,核常染色质丰富,网栏状大核仁。少许胞质突,胞质内核糖体丰富,其他细胞器稀少。质膜间见发育不良的桥粒样连接(图2) 。最后病理诊断为颌下淋巴结转移癌。随后临床发现鼻咽癌原发灶。此例电镜有确诊价值。,图2 转移癌:瘤细胞大、长圆形,胞核大、梭形,核膜不平滑,显著增大的核质比质膜间有桥粒样连接,胞质含少许欠发达的细胞器,网栏状大核仁,两团染色质间颗粒。EM 10 000,注：图片取自 张瑞祥,齐洁敏, 张洁茹等.235例疑难病理标本的电镜诊断价值 .临床与实验病理学杂志;2002 ;15（5）,（三）电镜检查
7、起验正作用：超微结构信息进一步证实、丰富了光镜的组织学诊断,例：男,30 岁,肝穿活检。光镜诊断:慢迁肝。虽未见典型碎屑样坏死,但不除外活动性变化。电镜见肝细胞大,疏松,细胞周围间隙加大,有微绒毛化,滑面内质网增生,内含管状体,肝窦内充塞胶原纤维。有的区域见部分肝细胞胞质有胞溶,周围有淋巴细胞浸润。最后电镜诊断:慢性迁延性乙型病毒性肝炎有轻微活动(图3) 。电镜有确诊价值。,图3 慢性迁延性乙型病毒性肝炎:滑面内质网增生,腔内含量多的乙肝表面抗原管状体。EM 8 000,注：图片取自 张瑞祥,齐洁敏, 张洁茹等.235例疑难病理标本的电镜诊断价值 .临床与实验病理学杂志;2002 ;15（5）
8、,电子显微镜技术及在病理诊断上的作用,一、电子显微镜技术 二、诊断病理学 三、电子显微镜技术在病理诊断上的作用 四、讨论,四、讨论,国内外对电镜诊断的价值,在肿瘤应用方面报道较多,Gyorkey 等65 %。 文献中电镜诊断价值的比率高低不同。 主要原因是病例的选择不太相同,使用标准、统计的方法也不同 还有检查者的光镜诊断水平或侧重点不同等因素也有关,应用电镜做最后病理诊断工作,有以下几点注意：,(1) 由于电镜费用较高,制作程序繁杂,应有选择地送电镜检查。有的临床医师,认为电镜是优于光镜的先进技术而盲目送检,如胃镜取胃黏膜活检无选择的送电镜检查,造成资源、人力和财力的浪费。(2) 电镜标本要
9、求尽可能活体取材,立即投入预冷的固定液中固定,以利完好地保存细胞的超微结构。 (3) 涉及病原学诊断,特别是怀疑病毒、支原体、衣原体等微生物感染的标本应充分使用电镜。 (4) 作为辅助手段应用电镜时应做到:,在光镜观察基础上有的放矢地做电镜观察 半薄切片选区定位要求准确 超微结构观察仍应依次行组织学和细胞学观察,根据需要采取不同的放大倍率观察 树立电镜观察是为获得组织细胞的超微结构病理信息的观念,而不是代替光镜诊断。,因此,如同战争中使用常规武器与战略武器的关系,在病理诊断过程中能用光镜者不用电镜,只在必要时辅以电镜、免疫组化检查。当然,应用电镜深入研究细胞细微结构在疾病发生和发展中的变化,许多工作有待开展。,THANK YOU,
