1、sC 1019一1997前言荷包红鲤是长期人工选育而成的、性状稳定的一个地方品种，为我国所特有。为保护和保存荷包红鲤种质的优良性状，防止变异和退化，特制定本标准。本标准的附录A和附录B是标准的附录。本标准从1997年9月1日起实施。本标准由农业部渔业局提出。本标准由全国水产标准化技术委员会淡水养殖分技术委员会归口。本标准起草单位:江西省赘源县荷包红鲤研究所。本标准主要起草人:张德蜀、刘英喜。中华人民共和国水产行业标准荷包红鲤SC 1019一1997Red purse-carp1范围本标准规定了荷包红鲤(Cyprinus carpio Linnaeus)主要生物学性状、生化指标、染色体和核型，以
2、及检测方法。适用于荷包红鲤鉴定。2名称与分类2.1学名荷包红鲤(yprinus carpio linnaeus),2.2分类位置属鲤形目(Cypriniformes),鲤科(Cyprinidae),鲤亚科(Cyprininae),鲤属(Cyprinus),鲤亚属(Cyprinus Linnaeus),鲤种(Cyprinuscarpio Linnaeus).3主要生物学性状3.1外部特征3.1.1形态头小，尾短，背高，体宽，背部隆起，腹部肥大，形似荷包。体背、体侧全红色，无斑点，腹部白色，外形见图1。可数性状背鳍条数:不分支鳍条数3，分支鳍条数1618,臀鳍条数:不分支鳍条数3，分支鳍条数5,M
3、A :36六37,第一鳃弓鳃耙数:外侧21-22，内侧27-28,口须:2对。可量性状月.门八J月马尸222么22.3.月.月.魂.J月.月.有月.3.33333.3可量性状变动值见表1,中华人民共和国农业部1997一03一18批准1997一09一01实施sc 1019一1997图1体长/体高2. 00-2. 30体长/头长2.60-2. 97体长/体宽3.15-3.50荷包红鲤外形表1f*a/1#t1. 54- 1. 70体长/尾柄长9. 13-10.40体长/尾柄高5. 30-5.77尾柄长/尾柄高0.42-0. 653.2内部特征I2门缥分两室。前室大，后室小，前室长度为后室长度的1.
4、29.3. 30倍。3.2.2肋骨15-16对。3.2.3下咽齿为3行。齿式为113/311.3.2.4脊椎骨总数为颅后椎骨、腹椎骨、尾椎骨数之和，即:3536=4+16-17)+15,3.2.5腹膜乳白色。3.2.6肠成鱼肠长与体长比为2.53.51 1,3. 3生长与繁殖3.3.1生长239sc 1019一1997体重的增长随年龄的增加而增长，体长增长逐渐减缓，体高、体宽增长相应加快。不同年龄组的鱼体长和体重的实测值见表2表2年龄，龄123456体长，mm167216205255235-346247375305382362 395体重，9252-780615-1 3501 185-1 82
5、51 2852 6551 650-2 8752 765-3 3701)年龄，主要依据鳞片上的年轮数(再生鳞除外)3.3.2繁殖3.3.2.1性成熟年龄:雌鱼为2+龄，雄鱼为1+龄。3.3.2.2性腺一年成熟一次，分批产出。3.3-2.3繁殖水温:18-26C.3.3-2.4怀卵量:不同年龄个体怀卵量见表3,表3年龄龄m长n1体9重绝对怀卵量粒相对怀卵量粒/922402551 043-1 350210 540270 790180-2453250-3051 2751 715260 218383 41419327642653351 3052 250321 570-557 7602143405315-
6、3502 050-2 675435 760-784 420191-3224生化指标4.1血清同工酶(LDH)4.1.1血清LDH电泳图谱见图2,4.1.2血清LDH各区带扫描图见图3,尝0-I:-一.111-图2血清LDH同工酶电泳图谱240图3血清LDH同工酶酶带扫描图sC 1019一19974.1.3血清LDH同工酶各区带百分含量见表30表3区带 I.UH,.LDHiLDH,LDH,LDH,含量2. 73.14. 04.533.45染色体数和核型5.1体细胞染色体2倍数2n=100,5.2核型中部着丝粒染色体(m组)12对，亚中部着丝粒染色体(sm组)16对，亚端部着丝粒染色体(st组)2
7、2对，染色体臂数(NF)78(见图4)e甘艺减:蕊蕊百蕊跳名x7，。二几.舀.班石诬石舀.ad舀几.丹a1.丫尹.!气A二a内a舀汽比口.八公公.自.00 Aft *a二nb.的.人2.，气B).00几nO“匕自二c止.-.自.口匀心.“臼介。rllse.esleees咬V图4染色体组型6检测方法6.1血液分析6.1.1血清制备尾动脉抽血，离心取血清，置于一15冰箱中保存待用。6.1.2血清LDH同工酶分离和百分含量测定6.1.2.1电泳分离:用马铃薯淀粉凝胶电泳分离，可见5条谱带。LDH马铃薯淀粉凝胶电泳方法见附录A(标准的附录)。6.1.2.2扫描测定:使用扫描光密度仪对电泳图谱进行扫描，
8、并测出各区带含量。6.2染色体检测6.2门标本制备从尾动脉抽血，离心取白细胞，在含小牛血清、植物凝聚素(PHA)的培养液里培养，秋水仙素处理空气中自然干燥制片，吉姆萨(Giemsa)液染色。Giemsa染色液的配制见附录B(标准的附录)。6.2.2计数sc 1019一1997在光镜下，选取染色体铺散良好、完整的中期分裂相计算染色体数目，确定2n数。6.2.3形态分类选择10个以上清晰的染色体中期分裂相，进行显微拍照，按放大照片剪贴配组，进行染色体组型分析，并按以下标准分类:臂比1.0-1.7为中部着丝粒染色体，m组;臂比1. 7-3.0为亚中部着丝粒染色体，sm组;臂比3.0-7.0为亚端部着
9、丝粒染色体，st组;臂比7.0-为端部着丝粒染色体，t组。mm组和sm组染色体臂数为2;st组和t组染色体臂数为1,sC 1019一1997附录A(标准的附录)LDH马铃薯淀粉凝胶电泳方法器材凝胶板膜框。用有机玻璃自行制备。框内尺寸170mmX130mmX10mm，框底均布4个直径为的圆孔。托胶玻璃板，外形尺寸170 mmX130 mmX3 mm，若干块。弓形金属丝锯。水平平板电泳仪。其他电泳常规用品。Al川15Al. 2Al. 3Al. 4Al. 5A2试剂A2. 1 EBT电泳缓冲液:0. 02二。1乙二胺四乙酸钠盐(EDTA),0. 5 mot硼酸，0. 9 mol三轻甲基氨基甲烷(tr
10、is),pH8. 6,使用时EBT需按下列比例稀释:阳极缓冲液用，作1:5稀释;阴极缓冲液用，作1:7稀释;制淀粉胶缓冲液用，作1:20稀释。A2.2电泳用的水解淀粉:取马铃薯淀粉100 g，加人200 ml水解液丙酮:浓盐酸(HCl)二200:习，混合摇匀，在37-38水浴中水解，每隔10 min摇匀一次。约1. 5 h后，立即加入1 mot醋酸钠50 mL摇匀，终止水解。布氏漏斗(一层滤纸)抽滤，用过量无离子水冲洗过滤6-7次，至滤液无氯离子为止(或pH与冲洗用无离子水一样)。最后用丙酮浸泡脱水，抽滤干，放置37下干燥，研细，过10。目筛，保存于干燥的广口瓶里备用。注:水解时间要根据不同厂
11、牌、批号产品的淀粉而定，最好先做小批试验。水解时间不够，制胶过程中，加温后凝胶液浓稠，气泡不易排出;若水解过度则呈稀液状。A2.3 LDH酶活性染色液:浓度为5 mg/mL氧化型辅酶1 2. 5 rat,浓度为1 mg/mL氯化硝基四氮哇蓝7.5 mL浓度为1 mg/mL吩啼二甲醋硫酸盐0. 5 mL1 mot乳酸钠2.5 mL0. 5 mot三经甲基氨基甲烷一盐酸缓冲液(pH7. 0) 3. 7 mL0. 1 mol氯化钠1. 3 mL加双蒸水到25 mL,A3试验步骤A3.1制备胶板:称取电泳淀粉24 g,置三角瓶内，加人200 mLEBT缓冲液(1:20稀释)，摇匀后，边加热边旋转，升温
12、至90后淀粉溶解呈透明粘稀液，并出现小气泡。立即抽气减压(约几分钟)，排出气泡，趁热倾人已备好的制胶板膜框内(框底预先垫好托胶玻璃板)，稍过量，冷凝后用金属丝锯平，使凝胶与膜框边缘水平。胶层厚约6-7 mm,凝胶板冬天在室温过夜，夏秋则在4冰箱中放Zh后备用。A3.2加样:用30 mm X 4 mm的薄金属片(或剃刀片)，在凝胶板负极一侧离胶板边缘10 mm处沿一直线插割加样缝4-8段，各段相距6-8 mm;再取4 mm X 12 mm的滤纸片对折，蘸上血清样品(约40川)，用镊子插入加样缝内，轻轻压平缝。sC 1019一1997A3.3电泳:将已加样的凝胶板，放在水平式电泳槽内，搭上3-5层
13、滤纸电桥，盖上槽盖或胶面复层蜡纸以免水分蒸发正极加入1:5稀释EBT缓冲液，负级加入1:7稀释EBT缓冲液，电压梯度为7一 10 V/cm,电流强度为2-2. 2 mA/cm，在4C冰箱里电泳6-8 hoA3.4染色电泳完毕后，取出胶板，通过框底圆孔顶出胶板，另垫人一块托胶玻璃板，用金属丝锯沿框边水平切去一层胶，同法切取中间胶层，放置LDH酶活性染色液中，37C温浴显色1h，或500C温箱里显色2 h,蒸馏水漂洗三次50%-75%乙醇中保存。附录B(标准的附录)吉姆萨(Giemsa)染色液配制B1 Giems。染色母液配制称量0. 5 g Giemsa粉，量取甘油33 mL，在研钵中先用少量甘油与Giemsa粉混合，研磨至无颗粒时再将剩余甘油加八，在56条件下保温2h后，加入33 mL甲醇，保存于棕色瓶内。B2 PH7. 2磷酸缓冲液配制0. 2 mot磷酸氢二钠(Na2HPO,)溶液72. 0 mL加上0. 2 mot磷酸二氢钠(NaH2PO,)溶液28. 0 ml -即成。B3 Giemsa工作染色液配制取100 m1.pH7. 2磷酸缓冲液，加人3 mLGiemsa染色母液即成。
