1、ICS 65160X 87备案号：304402011 Y口中华人民共和国烟草行业标准YCT 3832010烟草及烟草制品 烟碱、降烟碱、新烟碱、麦斯明和假木贼碱的测定气相色谱一质谱联用法Tobacco and tobacco products-Determination of nicotine，nornicotine，anatabine，myosmine and anabasine-GC-MSD method2010-12-27发布 2011一0115实施国家烟草专卖局 发布中华人民共和国烟草行业标准烟草及烟草制品烟碱、降烟碱、新烟碱、麦斯明和假木贼碱的测定气相色谱一质谱联用法YCT 3832
2、010*中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码：100045网址wwwspcnetcn电话：68523946 68517548中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销*开本880X1230 116印张075宇数16千字2011年4月第一版2011年4月第一次印刷*书号；1550652-21826定价1600元如有印装差错 由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话：(010)68533533刖 昂YCT 3832010本标准按照GBT 112009标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写规则给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识
3、别这些专利的责任。本标准由国家烟草专卖局提出。本标准由全国烟草标准化技术委员会卷烟分技术委员会(SACTC 144SC 1)归口。本标准起草单位：中国烟草总公司郑州烟草研究院、国家烟草质量监督检验中心、河南中烟工业有限责任公司、江苏中烟工业有限责任公司。本标准主要起草人：蔡君兰、赵阁、殷延齐、周浩、边照阳、张晓兵、夏巧玲、王冰、胡斌、赵晓东、唐纲岭、丁超、谢复炜。1范围烟草及烟草制品烟碱、降烟碱、新烟碱、麦斯明和假木贼碱的测定气相色谱-质谱联用法YCT 3832010本标准规定了烟草及烟草制品中5种生物碱，包括烟碱(Nicotine)、降烟碱(Nornicotine)、麦斯明(Myosmine
4、)、假木贼碱(Anabasine)、新烟碱(Anatabine)J气相色谱一质谱联用测定方法。本标准适用于烟草及烟草制品中5种生物碱(烟碱、降烟碱、麦斯明、假木贼碱、新烟碱)的测定。本方法测定烟草及烟草制品中烟碱、降烟碱、麦斯明、假木贼碱、新烟碱的定量限分别为468 pgg、76 pgg、05肛gg、51弘gg、79 pgg，检出限分别为141弘gg、23zgg、02弘gg、15 99g、24 pgg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GBT 63792测
5、量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法YCT 31 烟草及烟草制品试样的制备和水分制定烘箱法3原理在碱性溶液条件下，采用001三乙胺一三氯甲烷溶液萃取试样中的生物碱，使用气相色谱一质谱联用，选择离子监测法进行测定，采用内标法进行定量。4试剂与材料除特别要求以外，均应使用分析纯级试剂，水应符合GBT 6682中一级水的规定。41三氯甲烷，色谱纯(或分析纯经重蒸)。42氢氧化钠溶液(5，质量分数)，称量5 g氢氧化钠，用95 g蒸馏水溶解。43无水硫酸钠，使用前应在550条件下干燥至少5 h。44三乙胺
6、，纯度应不低于98。45 2甲基喹啉，纯度应不低于98。46 2，4二联吡啶，纯度应不低于98。47烟碱，纯度应不低于99。48降烟碱，纯度应不低于98。49麦斯明，纯度应不低于98。YCT 3832010410假木贼碱，纯度应不低于98。411新烟碱，纯度应不低于98。412 001三乙胺一三氯甲烷溶液加入三氯甲烷(41)于1 000mL量筒中，定容至刻度，然后准确加入100tLI。三乙胺(44)于该量筒中，超声振荡混合均匀。413内标溶液4131 内标储备液的配制分别准确称取450 mg 2-甲基喹啉(45)，25 mg 2，4一二联吡啶(46)，精确至01 mg，置于250 mI一棕色容
7、量瓶中，加入001三乙胺一三氯甲烷溶液(412)稀释定容至刻度。该储备液在一20条件下避光保存，有效期为6个月。4132一级内标溶液的配制准确移取50 mL内标储备液(4131)于500 ml。棕色容量瓶中，加入001三乙胺一三氯甲烷溶液(412)定容至刻度。该溶液在一20条件下避光保存，有效期为6个月。414生物碱标准溶液4141生物碱储备液的配制41411烟碱储备液准确称取400 mg烟碱(47)，精确至01 mg，置于100 mI。棕色容量瓶中，用001三乙胺一三氯甲烷溶液(412)稀释定容至刻度。41412降烟碱储备液准确称取15 mg降烟碱(48)，精确至0，1 mg，置于100 m
8、l，棕色容量瓶中，用001三乙胺一三氯甲烷溶液(412)稀释定容至刻度。41413麦斯明储备液准确称取10mg麦斯明(49)，精确至0，1 mg，置于100ml。棕色容量瓶中，用o01三乙胺一三氯甲烷溶液(412)稀释定容至刻度。41414麦斯明、假木贼碱和新烟碱混标储备液准确称取15 mg假木贼碱(410)、10 mg新烟碱(411)，精确至01 mg，置于100 mI。棕色容量瓶中，加入约20 mL 001三乙胺一三氯甲烷溶液(412)，待标样完全溶解后，再准确加入40ml一麦斯明储备液(41413)，用001三乙胺三氯甲烷溶液(412)稀释定容至刻度。4142生物碱标准溶液的配制4142
9、1烟碱工作标准溶液分别移取400 pL、1 mI，、2 mL、4 mI。、10 mL的烟碱储备液(41411)于不同的50 ml。棕色容量瓶中，再准确加入5 mL内标储备液(4131)，用001三乙胺一三氯甲烷溶液(412)稀释定容至刻度，得到五个不同浓度的烟碱系列标准溶液。41422降烟碱工作标准溶液分别移取400 pI。1 mL、2 mI，、4 mL、10 mI。20 mL降烟碱储备液(41412)于不同的50 mL棕色容量瓶中，再准确加入5 ml，内标储备液(4131)，用001三乙胺一三氯甲烷溶液(41 2)稀释定容至刻度，得到六个不同浓度的降烟碱系列标准溶液。41423麦斯明、假木贼
10、碱和新烟碱的混和标样工作标准溶液分别移取400 pL、1 mI。、2 mL、4 mI。、10 mI。、20 mL的麦斯明、假木贼碱和新烟碱混标储备液(41414)于不同的50 mL棕色容量瓶中，再准确加入5 mL内标储备液(4131)，用001三乙胺三氯甲烷溶液(412)稀释定容至刻度，得到六个不同浓度的麦斯明、假木贼碱和新烟碱的混和标样系列标准溶液。4143生物碱标准溶液的存放生物碱标准溶液在一20条件下避光保存，有效期为6个月。5仪器设备常用试验仪器以及下述各项。51分析天平，感量01 mg。52气相色谱质谱联用仪。53超声波发生器。54离心机。55离心试管，50 mL。56一次性使用无菌
11、注射器，5 mL。6分析步骤61试样制备按YCT 31进行试样的制备并测定水分含量。62测定次数每个样品应平行测定两次。63样品处理YCT 3832010称取03 g试样，精确至0000 1 g，置于50 mL三角锥形瓶内，加入2 mL 5的氢氧化钠溶液(42)于锥形瓶中，轻摇锥形瓶，湿润试样，静置15 min。加入20 mL一级内标溶液(4132)，加盖密封后置于超声波发生器内(53)室温下超声萃取15 rain，然后将萃取液全部转移到离心试管(55)中，在离心机(54)上以5 000 rrain转速离心5 min，使试样和萃取剂分离。称取4 g无水硫酸钠(43)加到一次性使用无菌注射器(5
12、6)中，轻轻敲打注射器外壁，使无水硫酸钠装实，然后取2 mL下层溶液加人到注射器中，收集过滤液于2 mL色谱分析瓶中待进样分析。注：超声波发生器工作频率为40 kHz，如最大功率为700 W，采用其超声功率的40即可达到萃取完全。64气相色谱一质谱联用仪条件按制造商操作手册运行气相色谱一质谱联用仪。用性。色谱柱：推荐使用熔融石英毛细管柱，30 m0氧烷。以下分析条件可供参考，采用其他条件应验证其适25 mm025zm，固定相为(35苯基)甲基聚硅采用程序升温方式：初始温度100；初始时间3 rnin；以8rain速率升至260，保持10 min总运行时间33 min。载气：氦气；载气流速10
13、mI。rain：进样口温度250。烟碱与其他生物碱的检测分两次进样来完成。烟碱的检测：进样量1 pL，分流进样，分流比40：1。降烟碱、麦斯明、假木贼碱和新烟碱的检测：进样量2 pL，分流进样，分流比10：1。检测器：质谱检测器；溶剂延迟：8 rain；电离电压：70 ev；离子源温度：230；传输线温度：280质谱扫描方式：选择离子监测(SIM)，各化合物定量及定性离子参见附录A。典型烟草样品的气相色谱一质谱图参见附录B。3YCT 383201065标准曲线的制作采用气相色谱一质谱联用仪测定烟碱、降烟碱、麦斯明、假木贼碱和新烟碱的标准系列溶液(4142)，得到5种化合物和内标的积分峰面积，分
14、别用5种化合物的积分面积与内标峰面积的比值作为纵坐标，各化合物的浓度与内标浓度比值作为横坐标，建立5种化合物的标准曲线，R2应不小于099。烟碱的定量采用2甲基喹啉作为内标，标准曲线可不过原点；其他生物碱的定量采用2，4，一二联吡啶作为内标，标准曲线强制过原点。66样品分析按气相色谱一质谱联用仪条件(64)测定样品(63)，样品中烟碱与其他生物碱的检测分两次进样来完成。7结果的计算与表述用每克试样中含有的生物碱的质量数来表示以干基计的试样中生物碱含量x，按式(1)进行计算。 X一轰鹊式中：x每克试样的生物碱含量，烟碱的单位为毫克每克(mgg)，其他生物碱的单位为微克每克(19g)；c三乙胺一三
15、氯甲烷萃取液中生物碱的浓度，烟碱的单位为毫克每毫升(mgmL)，其他生物碱的单位为微克每毫升(FgmL)；V萃取液的体积，单位为毫升(mL)；m试样质量，单位为克(g)W试样的水分含量，(质量分数)。结果以两次平行测定结果的平均值表示，烟碱精确至01 mgg，其他生物碱精确至ltgg。8回收率本方法的回收率试验研究结果参见附录C中的表C1。9重复性和再现性由7家实验室对8个样品进行了分析方法的共同试验，采用本方法测定生物碱含量时，得到了下述重复性值r和再现性值R。按GBT 63792执行本标准方法的重现性标准差和再现性标准差的测定。数据分析结果参见附录c中的表C2。10检验报告检验报告应说明采
16、用的方法和生物碱的测试结果(mgg或-gg)，还应该包括本标准未规定的或选择性的条件，以及可能对结果产生影响的其他条件。附录A(资料性附录)质谱检测器检测生物碱的保留时间及定量定性离子质谱检测器检测生物碱的保留时间及定量定性离子见表A1。表A1 质谱检测器检测生物碱的保留时间及定量定性离子YCT 3832010保留时间 定量离子 定性离子序号 化合物名称l 2一甲基喹啉 lO48 143 1282 烟碱 1066 84 1333 降烟碱 1259 119 1474 麦斯明 1290 146 1185 假木贼碱 1348 84 1056 新烟碱 1432 160 547 2，4。二联吡啶 149
17、0 156 1295YCT 3832010附录B(资料性附录)色谱图示例按本标准规定的方法对样品进行分析，得到的气相色谱一质谱图见图B1和图B2。Abundance360 000340 000320 000300 000280 000260 000240 000220 020001蛐000160 000140 000120C00100 00080 00060 00040 00020 000说明：12一甲基喹啉(IS)2烟碱。Abundance120 000100 090 080 00070 00050 00030 00010 000且飞丑盈丑Fl 1L ! 爻 入 说明：1降烟碱2麦斯明；3假
18、木贼碱；4新烟碱；52，4。二联吡啶(IS)。圈B2典型烟草样品4种生物碱的气相色谱一质谱圈YCT 3832010附录C(资料性附录)回收率、重复性和再现性研究结果本方法的回收率试验研究结果见表C1，本方法的重复性和再现性试验研究结果见表C2。表c1 本方法的回收率试验研究结果 以“表示生物碱 烟碱 降烟碱 麦斯明 假术贼碱 勒烟碱低浓度 1061 902 888 918 872中浓度 104，3 939 965 971 91o高浓度 loo6 1016 995 1018 95 2平均回收率 1036 952 949 969 911表C2 本方法的重复性和再现性试验研究结果 单位为微克每克烤烟
19、 烤烟 自肋烟 自肋烟 香料烟 香料烟 烤烟型 混合型生物碱指标1# 2# l# 2抖 1# 2# 卷烟烟丝 卷烟烟丝平均值 231 158 64，1 515 55 164 21_5 201重复性标准差S。 o7 o5 15 16 o2 o4 o9 o8烟碱 重复性值r 2o l 4 4 2 45 O6 I1 Z5 23再现性标准差S。 11 o6 22 23 o4 O9 11 o9再现性值R 31 17 62 65 11 25 31 25平均值 3 2 6 7 l 3 3 3重复性标准差S， 583 515 9 136 5 366 261 510 879 2 070降烟碱 重复性值r 33
20、21 180 13l 14 18 30 55再现性标准差s。 93 61 509 370 39 51 86 156再现性值R 47 38 583 380 z4 29 48 217平均值 134 108 1 648 1 075 67 82 137 615重复性准差s， 9 9 178 15l 10 】9 17 48麦斯明 重复性值r 1 1 7 lO l 1 1 3再现性标准差s。 1 Z 19 28 l 3 3 7再现性值R l l 19 15 1 2 2 4平均值 4 3 54 43 4 6 4 11重复性标准差S： 102 86 334 265 18 41 131 139假木重复性值r 5
21、 3 11 11 l 2 7 6贼碱再现性标准差S。 13 9 32 31 3 4 18 16再现性值R 7 7 27 20 2 4 13 9YCT 3832010表C2(续) 单位为微克每克烤烟 烤烟 白肋烟 白肋烟 香料烟 香料烟 烤烟型 混合型生物碱指标l# 2# l# 2# 1# 2# 卷烟烟丝 卷烟烟丝平均值 20 21 76 56 5 11 36 27重复性标准差s， 2 082 2 023 8 062 5 Z90 199 676 2 004 2 110新烟碱 重复性值r 88 50 151 200 8 19 97 109再现性标准差S。 248 142 428 565 22 54 275 307再现性值R 140 161 700 435 12 60 184 224注：烟碱的单位为毫克每克。YcT 383-,2610。爝草及耀单制品娼哦降啦l跌新悃瓣麦斯明和假术脯蝴版权专有侵权必究*书号：1550662 21826定价： 16 00元BZ002 1 07232Ii IIIIIIIIIIl Ul II IH I IIIooNlmIJu净帅om拒mmj“i|洲洲哪
