1、ICS 65160X 85备案号：34771-2012中华人民 共禾口Y口国烟草行业标准YCT 42320 11烟用香精和料液 苯甲酸、山梨酸和对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯、丁酯的测定高效液相色谱法Determination of benzoic acid，sorbic acid，methylparaben，ethylparaben，propylparaben and butylparaben in tobacco flavourings and casings-High performance liquid chromatographic method201112-26发布 2012-01-
2、15实施国家烟草专卖局 发布中华人民共和国烟草行业标准烟用香精和料液苯甲酸、山梨酸和对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯、丁酯的测定高效液相色谱法YCT 4232011中国标准出版社出版发行北京市朝阳区和平里西街甲2号(100013)北京市西城区三里河北街16号(100045)网址wwwspcnetcn总编室：(010)64275323发行中心：(010)51780235读者服务部：(010)68523946中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销开本8801230 1162012年5月第一版印张075字数17千字2012年5月第一次印刷书号：1550662 23515定价1600元如有印装差错
3、 由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话：(010)68510107前 言YCT 423201 1本标准按照GBT 112009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家烟草专卖局提出。本标准由全国烟草标准化技术委员会烟用材料分技术委员会(SACTC 144SC 8)归口。本标准起草单位：云南烟草科学研究院、云南省烟草质量监督检测站。本标准主要起草人：杨光宇、王岚、陈永宽、刘巍、李海燕、王淑华。1范围烟用香精和料液苯甲酸、山梨酸和对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯、丁酯的测定高效液相色谱法YCT 42320 11本标准规定了烟用香精
4、和料液中苯甲酸、山梨酸和对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯、丁酯的测定方法高效液相色谱法。本标准适用于烟用香精和料液中苯甲酸、山梨酸和对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯、丁酯的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法YCT14510烟用香精抽样3原理采用甲醇和乙酸一乙酸铵缓冲混合溶剂萃取烟用香精和料液中的苯甲酸、Il J梨酸和对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯、丁酯，经高效液相色谱仪分离，以紫外检测器测定，外标法定量。4试剂与材料4
5、1水，符合GBT 6682中一级水的要求。42甲醇，色谱纯。43冰乙酸，分析纯。44乙酸铵，分析纯。45苯甲酸(C7H。O：，CAS：65850)，纯度99。46山梨酸(C6H 802，CAS：110 44 1)，纯度99。47对羟基苯甲酸甲酯(C。H。O。，CAS：99763)，纯度99。48对羟基苯甲酸乙酯(C。HO，CAS：1 20 478)，纯度99。49对羟基苯甲酸丙酯(C，。H。：O。，CAS：94 13-3)，纯度99。410对羟基苯甲酸丁酯(C。H；O。，CAS：94 26 8)，纯度99。411乙酸乙酸铵缓冲溶液准确称取3855 g的乙酸铵(44)于烧杯中，加入3o mL的冰
6、乙酸(43)，用水溶解后转移至1 000 mI。容量瓶中定容至刻度，该缓冲溶液pH值约为50。412萃取溶剂甲醇(42)和乙酸一乙酸铵缓冲溶液(411)按体积比1：1混合。YCT 42320413标准溶液4131一级标准储备液分别称取100 mg(精确至01 mg)的苯甲酸(45)、山梨酸(46)、对羟基苯甲酸甲酯(47)、对羟基苯甲酸乙酯(48)、对羟基苯甲酸丙酯(49)和对羟基苯甲酸丁酯(410)，用甲醇(42)溶解，转移至100 mL容量瓶中，定容至刻度并摇匀；在28下密封保存，有效期为6个月。4132二级标准储备液准确移取25 mL一级标准储备液(4131)至25 mL容量瓶中，用萃取
7、溶剂(412)定容至刻度并摇匀；在28下密封保存，有效期1个月。4133标准工作溶液分别准确移取010 mI0 25 mL、050 mL、100 mL、250 ml6 00 mL二级标准储备液(4132)至lo mL容量瓶中，用萃取溶剂(412)定容到刻度，得到系列标准工作溶液，在28下密封保存，有效期1周。5仪器设备常用实验仪器及下述各项。51高效液相色谱，带有紫外检测器、柱温箱，具有梯度洗脱功能。52分析天平，感量01 mg。53高速匀浆机(转速能达到10 000 rmin)，往复机械振荡器(振荡频率能达到100次min，振幅能达到20 mm)，或超声波发生器(频率能达到80 kHz)。5
8、4离心机，转速能达到5 000 rrain。55水相滤膜，045 pm。6抽样按照YCT 14510的规定抽取样品。7分析步骤71样品处理称取1 g样品(精确到0000 1 g)于100 mL的锥形瓶中，准确加入50 mL萃取溶剂(412)，用高速匀浆机在10 000 rrain转速下匀浆25 rain(也可用80 kHz频率超声萃取20 rain，或用振幅为20 mm的往复式振荡器100次min频率振荡萃取40 min)，取1 mL提取液用水相滤膜(55)过滤(难过滤样品先在5 000 rrain条件下离心5 rain后取上清液过滤)，滤液待高效液相色谱仪分析。若待测试样溶液的浓度超出标准工
9、作曲线范围，则对样品前处理适当调整(酌情减少样品称样量或稀释样品)，然后重新测定。72色谱条件721 苯甲酸和山梨酸测定的色谱条件以下分析条件可供参考，采用其他条件应验证其适用性。推荐色谱柱：250 ram(长度)46 ram(内径)，固定相C。填料粒度5 pm；流动相A：乙酸一乙酸铵缓冲溶液(411)；2YCT 42320”流动相B：甲醇(42)；柱温：30；流速：12 m1rain；进样体积：20 pI。；流动相洗脱程序见表1；紫外检测器检测波长：苯甲酸检测波长为226 nm，山梨酸检测波长为258 nm检测器采集时间25 min。表1 苯甲酸和山梨酸测定流动相洗脱程序时间 流动相A 流动
10、相Brain 0 75 2525 75 2526 O 10031 0 10032 75 2540 75 25722对羟基苯甲酸酯测定色谱条件以下分析条件可供参考，采用其他条件应验证其适用性。推荐色谱柱；250 ram(长度)46 ram(内径)，固定相c。填料粒度5 bcm流动相A：乙酸一乙酸铵缓冲溶液(411)；流动相B：甲醇(42)；柱温：30；流速：12 mLmin；进样体积：20”L；流动相洗脱程序见表2；紫外检测器检测波长为257 nm；检测器采集时间46 min。表2对羟基苯甲酸酯类测定流动相洗脱程序时间 流动相A 流动相Bmin O 50 5046 50 5047 0 10052
11、 O 10053 50 5060 50 50YCT 423201173标准工作曲线制作731 苯甲酸和山梨酸标准工作曲线按照色谱条件(721)测定标准工作溶液(41 33)，以苯甲酸和山梨酸的浓度与响应峰面积绘制标准工作曲线，工作曲线线性相关系数R20999。标准工作溶液色谱图参见附录A中图A1。732对羟基苯甲酸酯标准工作曲线按照色谱条件(722)测定标准工作溶液(4133)，以对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯和丁酯的浓度与响应峰面积绘制标准工作曲线，工作曲线线性相关系数R20999。标准工作溶液色谱图参见附录A中图A2。每20次进样后加人一个中等浓度的标准工作溶液进行测定，如果测得值与原值的相
12、对偏差超过5，则应重新进行标准工作曲线的制作。74样品测定按照样品处理条件(71)处理试样按色谱条件(721)测定苯甲酸和山梨酸，按色谱条件(722)测定对羟基苯甲酸酯，每个样品平行测试两次；苯lp酸和梨酸典_F9样品色谱图参见附录A中图A3，对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯、T酯型样品色谱图参见附录A中图A4。8结果的计算与表述样品中的苯甲酸、山梨酸和对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯、T酯含量按式(1)进行计算：x一生型 (1)Z式中：x试样中待测成分含量，单位为毫克每千克(mgkg)；c由标准工作曲线得到的待测成分浓度，单位为毫克每升(mgl。)；V一试样萃取液体积，单位为毫升(mL)；m试样的质
13、量，单位为克(g)。取两次平行测定结果的算术平均值作为测定结果，精确至001 ragkg。两次平行测定结果之间的相对平均偏差应不大于10。9回收率、检出限和定量限本方法的回收率、检出限、定量限结果见表3。表3 方法的回收率、检出限和定量限结果回收率 检出限 定量限化合物 mgkg ragkg苯甲酸 93297 8 6 00 20 0山梨酸 942982 325 ll 0表3(续)YCT 42320 11同收率 检出限 定量限化合物 nigkg ragkg对羟基苯甲酸甲酯 95397 4 1 80 6 00对羟基苯甲酸乙酯 96498 2 225 7 50对羟基苯甲酸丙酯 95 8978 3 1
14、0 10 5对羟基苯甲酸丁酯 953985 550 18510试验报试验报参测在1孔1nYCT 42320 11A1 标准工作溶液色谱图附录A(资料性附录)色谱图示例苯甲酸和山梨酸标准工作溶液色谱图如图A1所示。mAU1210864202mAU121086420DADI A，Siq222616 Ref=offDADl B，Sig-258，16 Ref=off说明：l苯甲酸；2山梨酸。图A1标准工作溶液色谱图对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯、丁酯标准工作溶液色谱图如图A2所示。YCT 423201 1说明：l对羟基苯甲酸甲醋；2对羟基苯甲酸乙酯；3对羟基苯甲酸丙酯；4对羟基苯甲酸丁酯。图A2对羟基苯
15、甲酸甲酯、乙酯、丙酯、丁酯标准工作溶液色谱图A2典型样品色谱图苯甲酸和山梨酸测定典型样品色谱图如图A3所示。DADl ASIo=22616 Ref=offDADI B，8ig-258，16 Rcf=off驯、k，、L八说明：1一一苯甲酸2山梨酸图A3苯甲酸和山梨酸测定典型样品色谱图YCT 42320 1对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯、丁酯测定典型样品色谱图如图A4所示。DADl A。Sig=257，10 Ref=off”虬刖 。且J一 。一一 八 、，、说明：1_对羟基苯甲酸甲酯o2对羟基苯甲酸乙酯o3 对羟基苯甲酸丙酯；4 对羟基苯甲酸_r酯。图A4对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯、丁酯测定典型样品色谱图70 T 423-Z011 1烟用香情和芦髓苯甲酸：f梨酸和列羟基苯甲醴甲醋乙酯丙酯lIII I II II IIIIIBZ0021 07242lII IIIIIIIIIll III Ull II II III版权专有侵权必究*书号：1550662-23515定价： 1600元一一oN竹N寸一一净
