GB 15193.11-2003 果蝇伴性隐性致死试验.pdf

1、ICS 07. 100 c 53 中华人民共和国国家标准GB 15193.11-2003 代替GB15193. 11 1994 果蝇伴性隐性致死试验Sex-linked recessive lethal test 2003-09-24发布中华人民共租国E生部中国国家标准化管理委员会2004-05-01实施发布77 GB 15193.11-2003 前古【H本标准全文强制。本标准代替GB15193. 11 1994果蝇伴性隐性致死实验。本标准与GB15193.11 1994相比主要修改如下在“范围”中增加了：食品生产、加工、保藏、运输和销售过程中所涉及的可能对健康造成危害的化学、生物和物理因素，

2、检验对象包括食品添加剂（含蓄养强化剂）、食品新资源及其成分、新资源食品、辐照食品、食品容器与包装材料、食品工具、设备、洗涤剂、消毒剂、农药残留、兽药残留、食品工业用微生物等g将“剂量及分组”改为与“操作步骤”并列的一章；在剂量及分组中，增加了“如果受试物毒性较小，受试物加入饲料的最大剂量可占饲料的5%。阳性对照物可用甲基磺酸乙醋、甲基磺酸甲醋、N亚硝基二甲胶”；在“操作步骤”中，增加了“受试物配制”。自本标准实施之日起，GB15193. 111994同时废止。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准起草单位z浙江医科大学、上海铁道医学院。本标准主要起草人z徐惟安、叶恩赐、祝慧娟、历曙光。

3、本标准于1994年首次发布，本次为第一次修订。78 GB 15193.11一2003果蝇伴性隐性致死试验1 范围本标准规定了果蝇伴性隐性致死试验的基本技术要求。本标准适用于评价食品生产、加工、保藏、运输和销售过程中所涉及的可能对健康造成危害的化学、生物和物理因素的遗传毒性，检验对象包括食品添加剂（含营养强化剂）、食品新资源及其成分、新资源食品、辐照食品、食品容器与包装材料、食品工具、设备、洗涤剂、消毒剂、农药残留、兽药残留、食品工业用微生物等。2 原理2. 1 隐性基因在伴性遗传中的交叉遗传性，即雄蝇的X染色体传给F，代雌蝇，又通过F，代传给F,代雄蝇。2.2 位于X染色体上的隐性基因能在半合

4、型情况下于雄蝇中表现出来。据此，利用眼色性状由X染色体上的基因决定，并与X染色体的遗传相关联的特征来作为观察在X染色体上基因突变的标记，故以野生型雄蝇（红色圆眼，正常蝇）染毒，与Basc(Muller5）雌蝇（淡杏色棒眼，在两个X染色体上各带一个倒位以防止F，代把处理过的父系X染色体和母系X染色体互换）交配，如雄蝇经受试物处理后，在X染色体上的基因发生隐性致死，则可通过上述两点遗传规则于F代的雄蝇中表现出来，并籍眼色性状为标记来判断试验的结果。即根据孟德尔分类反应产生四种不同表型的F，代，有隐性致死时在F，代中没有红色圆眼的雄蝇。3 仪器与试Jf!J3. 1 仪器与器材设备电热恒温干燥箱、生化

5、培养箱、立体解剖显微镜、放大镜、空调机、麻醉瓶、牛奶瓶、大小玻璃试管(3 cm 8 cm,2 cm 9 cm）、试管盘及架、白瓷板、海绵垫、毛笔、海绵塞。3. 2 试剂乙醋、75%乙醇、丙酣、吐温。3. 3培养基的制备大小试管和海绵塞洗净后于1202h干燥消毒后备用。3. 3. 1 l庆精26g、酵母粉4g，加水150ml., 3.3.2 玉米粉34g、酵母粉4g，加水150mL。3.3.3 步骤按3啕3.1煮沸溶解后再按3.3.2倒入i昆匀、煮沸，然后加丙酸2mL，搅匀，分装于试管内，备用。4 实验动物果蝇。雄蝇用3天4夭龄的野生型黑腹果蝇（Droso卢hilarnelan咱aster），雌

6、蝇用Basc(Muller5) 品系3天5天龄的处女蝇。5 剂量及分组按常规方法求出I.C,0或I.Dec值。然后按1/2 LC；，或l.Dw为大剂量，1I51.D，1/10l.D5，为小剂量，另设阴性（或溶剂）及阳性（2mmol/L MMS）对照组。如果受试物毒性较小，受试物加入饲料的最大GB 15193.11-2003 剂量可占饲料的5%。阳性对照物可用甲基磺酸乙醋、甲基磺酸甲醋、N亚硝基二甲胶。6 操作步骤6. 1 受试物配制一般受试物应溶解在水中，如受试物不溶于水，可用食用油、医用淀粉、竣甲基纤维素等配成乳化液或悬浮液，然后再在给样前用水或生理盐水稀释。避免用二甲基亚枫作为介质。受试物

7、应于灌胃前新鲜配制，除非有资料表明以溶液（或悬浊液、乳浊液等）保存具有稳定性。6.2 处女蝇的收集开始羽化后，清除管内所有成蝇，然后在6h 12 h内收集的雌蝇即为处女蝇。将处女蝇放入新试管，一只管中不超过25只，以免过分拥挤。6. 3 接触受试物受试物接触方法常用溶液饲养。受试物溶解后用1%5%的震糖水稀释成不同浓度，试管内放入一团手纸，加入lml，受试液使纸充分湿透，放人经饥饿4h的雄蝇进行喂饲，新配制的培养基冷却到55时，倒人受试物，快速磁搅拌2min，接触受试物时间1天3天。6.4 交配程序及方法为检测受试物对哪一期生殖细胞最敏感，将雄蝇在接触受试物后按23 3天间隔（分别表示对精子、

8、精细胞和精母细胞的效应）与处女蝇交配。即每一试管以一只经处理过的雄蝇按上述程序顺次与Z只处女蝇交配，再以所产F，代按雌与雄（1 : 1或1: 2）进行F,L交配。12天14天后观察F,代，孵育温度为25。每一个实验组至少应有3000个样本数。7 数据处理根据受试染色体数（即F，代交配的雌蝇数减去不育数和废管数）与致死阳性管数求出致死率。致死管数致死率（%。）古古古丁E1000 以试验组与对照组的致死率按Kastenbaumand Bowman方法进行统计。8 结果判定对F，代结果的判断标准如下：8. 1 每一试管在多于20个仔代（雌及雄中没有红色圆眼的野生型雄蝇为阳性，属致死突变。如有2只以上的红色圆眼的野生型雄蝇者为阴性。8.2 每一试管如确少于20个仔代或只有一只野生型雄蝇的可疑管，需进行F，代的观察。8.3 不育z仅存雄、雌亲本而无仔蝇者。80