1、 AFNOR 2002 Tous droitsrservsFA107551 ISSN 0335-3931NF U 47-032Juin 2002Indice de classement : U 47-032ICS : 11.200 ; 65.020.30Mthodes danalyse en sant animaleRecherche danticorps contre le virus de larthrite encphalite caprine viralepar la technique dimmunodiffusion en gloseE : Animal health analys
2、is methods Detection of antibodies against Caprine arthritis/encephalitis virus by the Agar Gel Immunodiffusion TestD : Analysenverfahren in der Veterinrmedizin Forschung von Antikrpern gegen Ziegen arthritis enzephalitis Virus durch die Methode der Immunodiffusion in Agar-AgarNorme franaise homolog
3、uepar dcision du Directeur Gnral dAFNOR le 5 mai 2002 pour prendre effetle 5 juin 2002.Correspondance la date de publication du prsent document, il nexiste pas de travaux europensou internationaux traitant du mme sujet.Analyse Le prsent document sinscrit dans un ensemble de normes de mthodes danalys
4、een sant animale. Il dcrit une technique de recherche dans le srum des anticorpsdirigs contre des protines du virus de larthrite encphalite caprine chez lescaprins. La technique utilise est une technique dimmunodiffusion en glose.Par rapport dautres techniques utilisables pour la mise en vidence des
5、 anti-corps dirigs contre le virus de larthrite encphalite caprine (Elisa, Westernblot,.), limmunodiffusion en glose est considre comme trs spcifiquemais peu sensible.Descripteurs Thsaurus International Technique : maladie des animaux, maladie infectieuse,caprin, dpistage, anticorps, srum, mthode da
6、nalyse, milieu de culture, modeopratoire. AFNOR 2002 AFNOR 2002 1er tirage 2002-06-Fdite et diffuse par lAssociation Franaise de Normalisation (AFNOR) 11, avenue Francis de Pressens 93571 Saint-Denis La Plaine Cedex Tl. : + 33 (0)1 41 62 80 00 Fax : + 33 (0)1 49 17 90 00 www.afnor.frModificationsCor
7、rectionsMthodes danalyse en sant animale AFNOR U47AMembres de la commission de normalisationPrsident : M TOMASecrtariat : MME DRUEZ-VERITE AFNORMME BADUEL MINISTERE DE LAGRICULTURE ET DE LA PECHE DIRECTION GNRALE DE LALIMENTATIONM BAROUX LDA 01-LABORATOIRE DPARTEMENTAL DANALYSESMME BEDIDI-MADANI LVD
8、 55-LABORATOIRE VTRINAIRE DPARTEMENTALMME BETZ COFRAC COMITE FRANAIS DACCREDITATIONM BIET SANDERS ALIMENTS SNCM BIND LABORATOIRE DE TOURAINEMME BLANCHARD LABORATOIRE AVIMARMME BONNET LDV 04-LABORATOIRE DPARTEMENTAL VTRINAIREM BUFFEREAU LDA 22-LABORATOIRE DEPARTEMENTAL DANALYSESMME BUGGIN-DAUBIE DELT
9、AVIT SICA SAM CARPINSCHI LDA 50-LABORATOIRE DPARTEMENTAL DANALYSESM CHABANET LDA 12-LABORATOIRE DPARTEMENTAL DANALYSESM CHEVAL IDAC-INSTITUT DEPARTEMENTAL DANALYSE ET CONSEIL NANTESM CUDENNEC LDV 02-LABORATOIRE DE DIAGNOSTIC VTRINAIREMME DESCARSIN AES LABORATOIREMME DRUEZ-VERITE AFNORM EUZEBY COLE N
10、ATIONALE VTRINAIRE LYONMME FEILLOU LDA 36-LABORATOIRE DPARTEMENTAL DANALYSESM FORTIER LD 14-LABORATOIRE DPARTEMENTAL FRANK DUNCOMBEM FRETTE OFIVAL OFFICE NATIONAL INTERPROFESSIONNEL DES VIANDES, DE LELEVAGE ET DE LAVICULTUREM GARIN-BASTUJI AFSSA AGENCE FRANCAISE DE SECURITE SANITAIRE DES ALIMENTS MA
11、ISONS-ALFORTMME GERSTER-HARLY LD 21-LABORATOIRE DPARTEMENTAL MME GIRAL LVD 13-LABORATOIRE VTRINAIRE DPARTEMENTALM GIRAUD LDA 62-LABORATOIRE DEPARTEMENTAL DANALYSESMME GREZEL COLE NATIONALE VTRINAIRE LYONMME GUERITTE CIAL SOM HUGUET BIOSUD ANALYSESMME JOUARON LD 16-LABORATOIRE DPARTEMENTALM KAZEK SIM
12、V SYNDICAT DE LINDUSTRIE DU MEDICAMENT VETERINAIRE ET REACTIFSM KLEIN LD 61-LABORATOIRE DPARTEMENTALMME KOBISCH AFSSA AGENCE FRANCAISE DE SECURITE SANITAIRE DES ALIMENTS PLOUFRAGANM LE DREAN LVD 35-LABORATOIRE VTRINAIRE DPARTEMENTALMME LE GUERN-FELLOUS BIO-RADMME LE POTIER AFSSA AGENCE FRANCAISE DE
13、SECURITE SANITAIRE DES ALIMENTS PLOUFRAGANM MAUCCI LIDAL GIEMME MENARD LVD 53-LABORATOIRE VETERINAIRE DEPARTEMENTALM MIELI LDA 22-LABORATOIRE DEPARTEMENTAL DANALYSESMME MOQUAY-TKACZUK LVD 31-LABORATOIRE VTRINAIRE DPARTEMENTALM MORVAN LDA 22-LABORATOIRE DEPARTEMENTAL DANALYSESM NUSSBAUM VETOQUINOL SA
14、M PARODI COLE NATIONALE VTRINAIRE DE MAISONS-ALFORT 3 NF U 47-032Ce document a t rdig dans le cadre du GT1 Immuno-srologie anim par M MIELI, sur la base dun docu-ment prpar par le groupe de travail immuno-srologie animale de la Commission Sectorielle dAccrditationSant, Protection et Qualit Animales
15、du COFRAC.MLLE PELLETIER LD 40-LABORATOIRE DPARTEMENTALM PICAULT AFSSA AGENCE FRANCAISE DE SECURITE SANITAIRE DES ALIMENTS PLOUFRAGANMME POILANE LASAMME POLIAK LD 72-LABORATOIRE DPARTEMENTALM POURQUIER SIMV SYNDICAT DE LINDUSTRIE DU MEDICAMENT VETERINAIRE ET REACTIFSM POUTREL INRA INSTITUT NATIONAL
16、DE LA RECHERCHE AGRONOMIQUE TOURSMME RAULT FNGDSB FEDERATION NATIONALE DES GROUPEMENTS DE DEFENSE SANITAIRE DU BETAILM REYNAUD LAVB 63-LABORATOIRE ANALYSES VTRINAIRE faire refroidir la glose en plaant le contenant dans un bain-marie 56 C 2 C (6.4) (afin dviter une tropforte vaporation au moment o la
17、 glose est coule dans les botes de Ptri) ; verser 20 ml de glose dans une bote de Ptri (6.1) maintenue parfaitement horizontale ; aprs solidification, creuser sept puits laide de lemporte pice (6.3). Pour une bote de 85 mm de diamtreutile on peut creuser quatre fois sept puits ; enlever par aspirati
18、on les petits cylindres de glose ainsi dcoups ; les botes ainsi prpares doivent tre utilises de prfrence dans les 24 h. Leur conservation se fait dansune enceinte thermostate, glose positionne en haut.NF U 47-032 8 9.1.2 Remplissage des puitsLes puits tant numrotes selon la Figure 1, les remplir san
19、s dbordement avec le volume ncessaire de la faonsuivante :100 l de srum tester dans les puits 1-3-5 ;100 l de srum de contrle positif (5.3.2) dans les puits 2-4-6 ;100 l dantigne (5.3.1) dans la cupule centrale.9.1.3 Incubation des botes de PtriPlacer les botes en atmosphre humide temprature ambiant
20、e 48 h 72 h lobscurit. 9.2 Validation et lectureLes botes sont lues laide dun appareil de lecture (6.5).Une ligne de prcipitation nette doit apparatre entre le srum de contrle positif et lantigne. Les lignes de pr-cipitation obtenues entre les srums tester et lantigne sont observes par rapport leur
21、attachement avec laligne obtenue entre le srum de contrle positif et lantigne. Un srum tester est positif sil y a prsence dun arc de prcipitation avec lantigne et si celui-ci concideavec celui form par le srum de contrle positif (figure 2, srums 1, 3 et 5). Un srum tester fournit une rponse ngative
22、lors dabsence de ligne de prcipitation (figure 3, srums 9et 11). Un srum tester fournit une rponse ngative sil y a prsence de ligne(s) de prcipitation croisant la lignede prcipitation obtenue entre le srum de contrle positif et lantigne. Il sagit de ligne(s) non spcifique(s)(figure 3, srum 7).Figure
23、 2 Lecture des rsultats Figure 3 Lecture des rsultatsLgendePuits 2, 4, 6, 8, 10, 12 Srums de contrle positif1 et 3 Srums positifs5 Srum positif faible7 Srum ngatif avec une ligne de prcipitation non spcifique9 Srum ngatif avec halo11 Srum ngatifAg Antigne 9 NF U 47-0329.3 InterprtationPar rapport da
24、utres techniques utilisables pour la mise en vidence des anticorps dirigs contre le virusde larthrite encphalite caprine (Elisa, Western blot,.), limmunodiffusion en glose est considrecomme trs spcifique mais peu sensible.9.3.1 Expression des rsultatsLes rsultats sont exprims de manire qualitative :
25、 ngatif, positif.9.3.2 InterprtationLinterprtation tient compte des rsultats de lecture et de validation.10 Conditions de conservation et dlimination des chantillonsLe laboratoire doit mettre en place des dispositions qui assurent la conservation des chantillons jusqu leur li-mination.Les chantillon
26、s reus au laboratoire sont conservs une temprature de 5 C 3 C aprs lobtention delexsudat srique. Il est recommand que les prlvements sanguins soient centrifugs et conservs, si possiblesans caillot. Pour des conservations longues, il est recommand de congeler les srums sans caillot, unetemprature 16
27、C.Linactivation et llimination physique des chantillons sont ralises selon la rglementation en vigueur.11 Restitution des rsultatsPour les clients du laboratoire, les rsultats sont restitus de manire qualitative : ngatif, positif .12 FidlitLemploi dun matriau de rfrence positif-limite ou, dfaut, sim
28、plement positif (sous-talon dtaloninternational ou autre dfaut), permet de sassurer de la reproductibilit de la mthode. La proprit annoncede ce matriau de rfrence doit effectivement tre retrouve.13 Rapport danalyseLe rapport danalyse doit tre conforme aux exigences de la NF EN ISO/CEI 17025.NF U 47-032 10 BibliographieOIE Manual of standards for diagnostic tests and vaccines, fourth edition 2000 (Office International desEpizooties 12, rue de Prony 75017 PARIS FRANCE), 497 502.
