1、ICS 65.120 B 46 DB34 安徽省地方标准 DB 34/T 13582011 饲料中黄霉素的测定高效液相色谱法 Determination of flavomycin in feed High efficiency liquid chromatographymethod文稿版次选择2011 - 03 - 16 发布 2011 - 04 - 16 实施安徽省质量技术监督局 发布DB34/T 13582011 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由安徽省畜牧兽医局提出。 本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：安徽省兽药饲料监
2、察所(安徽省畜产品质量安全检测中心)。 本标准主要起草人：明文庆、刘红云、张莉、蔡一杰、吴蕾、丁作坤、陶小平、钱志平、吴昊。 DB34/T 13582011 1 饲料中黄霉素的测定高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了饲料中黄霉素检验的高效液相色谱法测定方法。 本标准适用于饲料中黄霉素的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 3 试样制备 按 GB/T 1469
3、9.1 抽取有代表性的饲料样品，用 四分法缩减取约 200 g，粉碎至过 0.45 mm 孔径的分析筛，混匀，装入磨口瓶中备用。 4 原理 饲料中黄霉素经 50的甲醇提取后，用 pH 6 .0 磷酸盐缓冲液稀释至所 需浓度，反相色谱柱进行分离，紫外检测器检测，外标法定量。 5 试剂和溶液 5.1 除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为符合 GB/T 6682 二级水的规定。 5.2 黄霉素对照品：纯度 100。 5.3 黄霉素储备液：精密称取黄霉素对照品适量，用甲醇配制成 1 mg/mL，作为标准储备溶（贮存 4 冰箱保存 10 天）。 5.4 黄霉素标准工作液：量取适量黄霉素储备液，用
4、pH 6.0 磷酸盐缓冲液稀释成浓度为 0.05、0.10、0.25、0.50、1.00、2.50 g/mL 的系列标准工作液（4 保存 7 天）。 5.5 甲醇：色谱纯。 5.6 乙腈：色谱纯。 5.7 甲酸铵。 5.8 磷酸。 5.9 pH 6.0 磷酸盐缓冲液：称取磷酸氢二钾 2 g 与磷酸二氢钾 8 g，加水使溶解成 1000 mL，即得。 6 仪器设备 DB34/T 13582011 2 6.1 高效液相色谱仪(配紫外检测器)。 6.2 饲料粉碎机。 6.3 分析天平，感量 0.0001 g，0.001 g。 7 测定步骤 7.1 试样提取 称取粉碎后的饲料样品 5 g（精确至 0.
5、001 g），加入 50.0 mL 50甲醇溶液提取后，过滤，滤液用磷酸盐缓冲液 pH 6.0 稀释至所需的适当浓度，经 0. 45 m 滤膜过滤后供高效液相色谱仪分析。 7.2 色谱条件 色谱柱：C 18 柱(4.6150 mm，5 m)或性能相当的色谱柱。 流速：0.7 mL/min。 检测波长：258 nm。 进样量：20 L。 流动相：乙腈: 0.2甲酸铵水溶液=45:55 （用 10磷酸调节至 pH 4.9） 7.3 上机测定 取标准工作液和样品试液分别注入液相色谱仪，记录谱图，按外标法以峰面积进行计算。 8 结果计算 按照下式计算试样中药物的含量： n1000mAs1000VCsA
6、X = (1) 式中： X 试样中药物的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； A 应的色谱峰面积响应值； As 标准溶液对应的色谱峰面积响应值； V 定容体积，单位为毫升（mL）； Cs 标准溶液的浓度，单位为微克每毫升（ g/mL）； m 试样质量，单位为克（g）； n 稀释倍数。 平行测定结果用算术平均值表示，结果保留 3 位有效数字。 9 检测方法灵敏度、准确度、精密度 9.1 灵敏度 本方法的检测限为 0.5 mg/kg。 9.2 准确度 本方法添加浓度 1.0 mg/kg，回收率 为 80120。 DB34/T 13582011 3 9.3 精密度 本方法的批内变异系数 CV10，批间变异系数 CV15。 DB34/T 13582011 4 A A 附 录 A （资料性附录） 黄霉素标准溶液色谱图 图A.1 黄霉素标准溶液色谱图 _
