1、ICS 65.120 B 46 DB34 安徽省地方标准 DB 34/T 13592011 饲料中阿维霉素的测定-高效液相色谱法 Determination of avilamycin in feed -High efficiency liquid chromatography method 文稿版次选择2011 - 03 - 16 发布 2011 - 04 - 16 实施安徽省质量技术监督局 发布DB34/T 13592011 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由安徽省畜牧兽医局提出。 本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：安徽省
2、兽药饲料监察所(安徽省畜产品质量安全检测中心)。 本标准主要起草人：蔡一杰、明文庆、张莉、刘红云、吴蕾、丁作坤、陶小平、钱志平、吴昊。 DB34/T 13592011 1 饲料中阿维霉素的测定-高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了饲料中阿维霉素检验的高效液相色谱测定方法。 本标准适用于饲料中阿维霉素的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 3 试样制备 按 G
3、B/T 14699.1 抽取有代表性的饲料样品，用 四分法缩减取约 200 g，粉碎至过 0.45 mm 孔径的分析筛，混匀，装入磨口瓶中备用。 4 原理 饲料中的阿维霉素用乙腈-水(1:1)超声提取， 以乙腈 -0.2 磷酸二氢铵溶液( 用磷酸调节 pH 值至 3.0)(51:49)为流动相，高效液相色谱仪进行分析，外标法定量。 5 试剂和溶液 5.1 除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为符合 GB/T 6682 二级水的规定。 5.2 阿维霉素标准品：纯度 90。 5.3 标准储备液：准确称取阿维霉素对照品适量,用乙腈 -0.2 磷酸二氢铵溶液( 用磷酸调节 pH 值至 3.0)(5
4、1:49)的溶液配 制成 0.5 mg/mL 的标准储备液，储存 4 冰箱备用，有效期 7 天。 5.4 标准工作溶液：精密量取适量阿维菌素储备液，用乙腈 -0.2 磷酸二氢铵溶液( 用磷酸调节 pH值至 3.0) (51:49)稀释成 0.5、1.0、5.0、10.0、50.0、100.0 g/mL 的标准工作液，储存 4 冰箱备用，有效期 7 天。 5.5 乙腈：色谱纯 5.6 流动相：乙腈 -0.2 磷酸二氢铵溶液( 用磷酸调节 pH 值至 3.0)(51:49)。 5.7 磷酸二氢铵。 5.8 微孔滤膜：孔径 0.45 m，有机相。 6 仪器设备 DB34/T 13592011 2 6
5、.1 高效液相色谱仪（配紫外检测器）。 6.2 饲料粉碎机。 6.3 旋转蒸发仪。 6.4 分析天平，感量 0.0001 g，0.001 g。 6.5 超声波清洗机。 6.6 梨形瓶，50 mL。 7 测定步骤 7.1 试样提取 称取粉碎后的饲料样品 2 g（精确至 0.001 g），置于 200 mL 锥形瓶中，加入乙腈-水(1:1) 50 mL超声提取 30 min，过滤。滤液于 50 水浴中旋转减压蒸发至干，加 10 ml 流动相（5.6）溶解，过0.45 m 滤膜过滤后供高效液相色谱仪测定。 7.2 色谱条件 色谱柱：C 18 (4.6150 mm，5 m)或相当的色谱柱。 检测波长：
6、214 nm。 流动相：乙腈 -0.2 磷酸二氢铵溶液( 用磷酸调节 pH 值至3.0) (51:49)。 流速：1.0 mL/min。 7.3 上机测定 取标准工作液和样品试液分别注入液相色谱仪，记录谱图，按外标法以峰面积进行计算。 8 结果计算 按照下式计算试样中药物的含量： 1000mAs1000VCsAX= . (1) 式中： X 试样中药物的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； A 试样溶液对应的色谱峰面积响应值； As 标准溶液对应的色谱峰面积响应值； V 定容体积，单位为毫升（mL）； Cs 标准溶液的浓度，单位为微克每毫升（ g/mL）； m 试样质量，单位为克（g）。 平行测定结果用算术平均值表示，结果保留 3 位有效数字。 9 检测方法灵敏度、准确度、精密度 9.1 灵敏度 本方法的检测限为 0.5 mg/kg。 DB34/T 13592011 3 9.2 准确度 本方法添加浓度为 1.0 mg/kg 时，回收率为 80120。 9.3 精密度 本方法的批内变异系数 CV10，批间变异系数 CV15。 _
