1、ICS 65.120 B 46 DB34 安徽省地方标准 DB 34/T 13632011 饲料中喹烯酮的测定-高效液相色谱法 Determination of Quinocetone in feed High performance liquid chromatography 文稿版次选择2011 - 03 - 16 发布 2011 - 04 - 16 实施安徽省质量技术监督局 发布DB34/T 13632011 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由安徽省畜牧兽医局提出。 本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所
2、(安徽省畜产品质量安全检测中心)。 本标准主要起草人：刘发全、丁在亮、许世富、刘红云、明文庆、张莉、蔡东东。 DB34/T 13632011 1 饲料中喹烯酮的测定-高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了饲料中喹烯酮检验的制样和高效液相色谱（HPLC）测定方法。 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和预混合饲料中喹烯酮的定量检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 3
3、试样制备 按 GB/T 14699.1 采样，选取有代表性的饲料样品至少 500，四分法缩减至 100，磨碎，全部通过 0.42 mm 分析筛，混匀，装入密闭容器中，避光低温保存备用。 4 原理 试样中的喹烯酮先用甲醇溶液提取，固相萃取小柱净化，用高效液相色谱仪测定，以外标法进行定量分析。 5 试剂和材料 5.1 除特殊说明外，本标准所用试剂均为分析纯，水为符合 GB/T 6682 规定的二级水。 5.2 喹烯酮标准品：纯度 98.0。 5.3 乙腈，色谱纯。 5.4 甲醇，色谱纯。 5.5 磷酸。 5.6 提取液：甲醇:水=80:20。 5.7 淋洗液 1：0.02 mol/L 盐酸：移取
4、1.67 mL 盐酸用水定容至 1000 mL。 5.8 淋洗液 2：0.1 mol/L 盐酸：移取 8.33 mL 盐酸用水定容至 1000 mL。 5.9 洗脱液：甲醇:水=40:60。 5.10 固相萃取柱：中性氧化铝，150 mg/6mL。 5.11 喹烯酮标准贮备液：500 g/mL。准确称取 100 mg 喹烯酮标准品(精确至0.00002 g)于 200 mL棕色容量瓶中，用洗脱液（5.8）常温超声溶解，定容至刻度并摇匀，配制成标准贮备液，贮于 4 冰箱中，有效期 90 天。 DB34/T 13632011 2 5.12 喹烯酮标准工作溶液：分别吸取（5.10）中标准贮备液 0、
5、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0 mL于 100 mL 棕色容量瓶中，用洗脱液（5.8）溶液定容，配制成 0、2. 50、5.00、10.0、20.0、50.0、100 g/mL 标准工作溶液。 5.13 流动相：乙腈：甲醇：水=25:20:55，每 1000 ml 混合液中加 2 mL 磷酸。 5.14 滤膜：0.45 m 有机滤膜。 6 仪器和设备 6.1 高效液相色谱仪，配置二极管阵列检测器或紫外检测器。 6.2 分析天平：感量 0.0002 g。 6.3 真空泵(0.1 Mpa)。 6.4 恒温水浴锅。 6.5 旋转蒸发仪。 6.6 离心机：5000 r/min。 6
6、.7 超声波清洗机。 6.8 饲料粉碎机 7 测定步骤 7.1 条件 测定过程应在避光操作及使用棕色容器。 7.2 提取 准确称取适量试样(配合饲料 5 g，浓缩饲料 2 g，复合预混 合饲料 1 g，精确至 0.0002 g 于离心管中，加入甲醇水溶液（5.8）50 mL，超声提取 30 分钟后，4000 r/min 离心 10 min，上清液过滤备用。 7.3 净化 分别用 3 mL 甲醇和水对SPE（5.9）小柱进行活化，取提取液（7.2）3 ml 过小柱，控制过柱速度不超过 1.0 mL/min，分用 3 mL 淋洗液 1（ 5.6）、淋洗液 2（5.7）淋洗小柱，吹干，用 3 ml
7、甲醇：水溶液（5.8）洗脱，收集洗脱液过 0.45 m 滤膜(5.13)，上机测定。 7.4 色谱条件 色谱柱：C 18 (4.6250 mm，5 m)，或者相当色谱柱； 检测波长：260 nm； 流速：1.0 mL/min； 进样体积：10 L。 7.5 上机测定 取标准工作液和样品试液分别注入液相色谱仪，记录谱图，按外标法以峰面积进行计算。 8 结果计算与表述 DB34/T 13632011 3 按照下式计算试样中喹烯酮的含量： 1000mAs1000VCsAX= (1) 式中： X 试样中喹烯酮的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； A 试样溶液对应的色谱峰面积响应值； As 标准溶液对应的色谱峰面积响应值； V 定容体积，单位为毫升（mL）； Cs 标准溶液的浓度，单位为微克每毫升（ g/mL）； m 试样质量，单位为克（g）。 平行测定结果用算术平均值表示，结果保留三位有效数字。 9 检测方法灵敏度、准确度、精密度 9.1 灵敏度 本方法饲料中喹烯酮检测限为 2 mg/kg。 9.2 准确度 本方法在添加浓度为 4 mg/kg 的回收率为 80120。 9.3 精密度 本方法的批内变异系数 CV10，批间变异系数 CV15。 DB34/T 13632011 4 A A 附 录 A （资料性附录） 喹烯酮标准品高效液相色谱图 图A.1 喹烯酮标准品高效液相色谱图 _
