1、ICS 67.120 B 45 DB34 安徽省地方标准 DB 34/T 13692011 鸡肉组织中氯羟吡啶的残留测定 -气相色谱质谱法 Determination clopidol residue in chicken tissue - Gas chromatography mass spectrometry method 2011 - 03 - 16 发布 2011 - 04 - 16 实施安徽省质量技术监督局 发布DB34/T 13692011 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由安徽省畜牧兽医局提出。 本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。
2、 本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所(安徽省畜产品质量安全检测中心)。 本标准主要起草人：吴蕾、张莉、刘红云、明文庆、蔡一杰、丁作坤、陶小平、钱志平、吴昊。 DB34/T 13692011 1 鸡肉组织中氯羟吡啶的残留测定气相色谱质谱法 1 范围 本标准规定了用气相色谱质谱法测定鸡肉组织中氯羟吡啶残留测定方法。 本标准适用于鸡肉组织中氯羟吡啶的残留测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 试样制
3、备 取有代表性鸡肉样品切成小块，制成糜状后， 装入洁净容器中、密封、并标明标记，于 -18 以下冷冻保存。 4 原理 试样中残留的氯羟吡啶用乙腈提取，经碱性氧化铝柱层析柱净化分离，再用N,O-双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）+1三甲基氯硅烷（TMCS）衍生化，气相色谱 -质谱分析进行定性和定量分析。 5 试剂和溶液 5.1 除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为符合 GB/T 6682 二级水的规定。 5.2 氯羟吡啶对照品：含氯羟吡啶 98.0。 5.3 标准储备液：精密称定氯羟吡啶对照品适量，用甲醇配制成 100g/mL 标准储备液，4 冰箱中保存，有效期 6 个月。 5.4 标准
4、工作液：精密量取适量氯羟吡啶储备液，用甲醇稀释为 10、20、50、100、200、500 ng/mL的标准工作液，4 冰箱中保存，备用，有效期 7 天。 5.5 乙腈：色谱纯。 5.6 甲醇：色谱纯。 5.7 甲苯。 5.8 异丙醇。 5.9 硫酸钠：使用前需在马弗炉内 550 条件下煅烧 4 h，于干燥器中冷却，过 100目筛后备用。 5.10 碱性氧化铝：（碱性氧化铝层析柱的制备：采用具塞的玻璃柱(300 mm 15 mm)，下端带 G3 砂芯板；先于柱中加适量乙腈，再加入约 1 cm 高的硫酸钠，中间填充 4 cm 高的碱性氧化铝层，然后在柱上端填充 1 cm 高的硫酸钠）。 DB34
5、/T 13692011 2 5.11 衍生化试剂： N,O 一双三甲基硅基三氟乙酰胺-三甲基氯硅烷，体积比为 99:1。 6 仪器设备 6.1 气相色谱质谱仪。 6.2 旋转蒸发仪。 6.3 氮吹仪。 6.4 冷冻离心机。 6.5 振荡器。 6.6 涡旋混合器。 6.7 分析天平：感量 0.0001 g，0.001 g。 6.8 鸡心瓶：50 mL。 6.9 离心管：50 mL。 6.10 超纯水器。 7 测定步骤 7.1 试样提取 称取搅碎的鸡肉糜 5 g(精确到 0.001 g)置于 50 mL 聚丙烯离心管中，加入 l0 mL 乙腈，均质 l min，振荡 30 min。在 4 条件下以
6、 6000 r /min 离心 10 min，倾出上清液，沉淀物用 10 mL 乙 腈再提取 1 次。合并上清液，加入 5 mL 异丙醇，于旋转蒸发仪上 50 水浴蒸至近干，用 5 mL 乙腈溶解。 7.2 试样净化 用 15 mL 乙腈活化碱性氧化铝层析柱后加入 7. 1 项下样品液，待其自然流干后用 10 mL 乙腈洗脱，收集洗脱液。 7.3 衍生化 用氮气吹干 7.2 项下的洗脱液，加入 100 L 甲苯溶解残渣，再加入 100 L 衍生剂，密封后于80 衍生 60 min。冷却后加 800 L 甲苯，混匀，上机分析。同时分别取 5.3 项下标准工作液系列各 1 ml 用氮气吹干，加入甲
7、苯和衍生剂各 100 L，按试样同法操作。 7.4 气相条件 色谱柱：DB-5MS柱，柱长 30 m，内径 0.25 mm，膜厚 0.25 m 或性能相当的色谱柱。 进样口温度：220。 升温程序：起始柱温 100(保持 1 min)，以 30 /min 的速率升至 200，再以 5/min 的速率升至 205(保持 1 min)，然后以 25/m in 的速率升至 280(保持 3 min)。 载气：氦气纯度 99.999。 流量：0.8 mLmin。 进样方式：不分流进样。 进样体积：1.0 L。 7.5 质谱条件 DB34/T 13692011 3 样品离子源：EI源。 传输线温度：28
8、0。 四极杆温度: 170。 离子源温度: 230。 选择离子收集模式，收集 212，214，248 和 263 m/z 的 4 个碎片离子。 8 定性定量方法 定性方法：样品待测物质与标准品衍生物保留时间的相对标准偏差不大于 0.5。特征离子基峰丰度与标准品相差不大于 20。 定量方法：以 212，214，248 和 263 峰面积之和进行校正定量。 9 结果计算和表述 X=1000V2MAs1000V3V1CsA(1) 式中： X 组织中氯羟吡啶的残留量（g/kg）； A 样品溶液中氯羟吡啶的峰面积； As 标准工作液中氯羟吡啶的峰面积； Cs 标准工作液中氯羟吡啶的浓度(ng/mL)；
9、V1 溶解残留物的乙腈体积(mL)； V2 过碱性氧化铝层析柱乙腈溶液体积(mL )； V3 溶解残留物的甲苯体积(mL) ； M 组织样品质量(g)。 测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留 3 位有效数字。 10 检测方法灵敏度、准确度、精密度 10.1 灵敏度 本方法在鸡肉组织中的检出限为 0.5 g /kg。 10.2 准确度 本方法在添加浓度为 1.0g /kg 时，回收率为 70120。 10.3 精密度 本方法的批内变异系数 CV15，批间变异系数 CV20。 DB34/T 13692011 4 A A 附 录 A （资料性附录） 氯羟吡啶标准品衍生物的选择性离子质谱图 图A.1 氯羟吡啶的气相质谱监测的离子图 _
