1、 ICS DB51备案号：28169-2010 四川省地方标准DB51/T 10792010饲料中呕吐毒素的测定 高效液相色谱法 Determination of deoxynivalenol in feeds High performance liquid chromatography 2010-06-01 发布 2010-07-01 实施四川省质量技术监督局发布DB51/T 1079-2010 I 目 次 前言 II 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 原理 1 4 试剂和溶液 1 5 仪器与设备 1 6 试样制备 . . 2 7 分析步骤 . . 2 8 结果计算 . . 2 9
2、精密度 2 附录 A（资料 性附录） 3 DB51/T 1079-2010 II 前 言 本标准的附录A 为资料性附录。 本标准由四川省畜牧食品局提出并归口。 本标准由四川省质量技术监督局批准。 本标准由四川省饲料工作总站负责起草。 本标准起草人：柏凡、张静、李云、冯娅、魏敏、赵立军。DB51/T 1079-2010 1 饲料中呕吐毒素的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了测饲料中呕吐毒素的含量的高效液相色谱法(HPLC) 。 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料及饲料原料的测定。 本标准中检出限为0.3 mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引
3、用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T14699.1 饲料 采样 GB/T20195 动物饲料 试样的制备 3 原理 试样经纯水提取，离心、过滤后，取滤液经过免疫亲和柱净化，浓缩，用高效液相色谱仪-紫外检测器检测，外标法计算呕吐毒素含量。 4 试剂和溶液 除特殊说明外，所有试剂均为分析纯，色谱用水符合GB/T6682 一级用水的规定。 4.1 乙腈：色谱纯。 4.2 甲醇：色谱纯。 4.3 聚乙二醇 8000（PEG8000 ）。 4.4 呕吐毒素标准品：含量大于 98%
4、 4.4.1 标准贮备液：精密称取 10 mg 呕吐毒素标准品，用乙腈溶解、定容至 100 mL，此贮备液浓度为100 g/mL，置于冰箱中 28 保存，有效期 6 个月。 4.4.2 标准工作溶液：分别准确移取呕吐毒素贮备液，用流动相配制成标准工作溶液：0.3 g/mL 、1.0 g/mL，2.0 g/mL，5.0 g/mL，10.0 g/mL。置于冰箱中 2 8保存，有效期 1 个月。 注意： 注1:凡接触呕吐毒素的容器，需浸入4%次氯酸钠（NaOCl ）溶液，放置半天后清洗备用。 注2:为了安全，分析人员操作时须带上医用乳胶手套，在通风橱内操作。 4.5 呕吐毒素免疫亲和柱。 5 仪器
5、与设备 5.1 分析天平：感量 0.1 mg。 5.2 振荡器。 5.3 离心机：转速为 5000 r/min 以上。 5.4 超纯水处理器。 5.5 涡旋混合器。 5.6 高效液相色谱仪：配备紫外检测器。 5.7 氮吹仪。 5.8 0.45 m 滤膜。 DB51/T 1079-2010 2 6 试样制备 按 GB/T14699.1规定采集试样后，按GB/T20195 规定，选取具有代表性的实验室样品1 kg ，四分法缩减分取200 g左右，粉碎过1 mm 孔筛，混匀装入磨口瓶中备用。 7 分析步骤 7.1 试样溶液的制备 7.1.1 提取 称取 25 g 试样 (精确至 0.01g)于锥形瓶
6、中，加入 5 g 聚乙二醇 8000（4.3），100 mL 水，振荡提取30 min，离心，取上清液过滤，滤液待净化（浓度较高时滤液应用水稀释后待净化，以免小柱超载）。 7.1.2 净化 将免疫亲和柱中缓冲液排出，用1 mL 水过柱，准确吸取2.0 mL 提取液以1 滴/ 秒的速度通过免疫亲和柱，用5 mL 水淋洗，抽干柱子，用2 mL 甲醇（4.2）洗脱。洗脱液6 0氮气吹干，准确加入流动相（7.2.3 ）500 L，涡旋30 s ，过 0.45 m滤膜，上机测定。 7.2 色谱条件 7.2.1 色谱柱：C18柱，柱长 250 mm，内径 4.6 mm，粒度 5 m；或性能相当的色谱柱。
7、7.2.2 柱温：30。 7.2.3 流动相：乙腈+ 水12+88（体积比）。 7.2.4 流速：1.0 mL/min 。 7.2.5 检测器：紫外检测器（或二极管阵列检测器），检测波长 220 nm。 7.2.6 进样量：40 L。 7.3 测定 按上述色谱条件，分别将标准溶液和试样溶液上级测定，按照保留时间进行定性，单点或多点校正外标法定量。 8 结果计算 试样中呕吐毒素的含量 X，以质量分数毫克每千克(mg/kg) 表示，单点校正按式(1) 计算： nmAsVCsAX = (1) 式中： V上机定容体积，单位为毫升(mL) ； As呕吐毒素标准溶液对应的色谱峰面积； A试样溶液对应的色谱峰面积； Cs呕吐毒素标准溶液的浓度，单位为微克每毫升( g/mL)； m试样质量，单位为克(g) ； n稀释倍数。 结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。 9 精密度 在重复性试验条件下两次平行测定结果的相对偏差不大于10% 。 DB51/T 1079-2010 3 附 录 A （资料性附录） 呕吐毒素标准图谱 图A.1 呕吐毒素标准色谱图 _
