1、ICS 65.202.30 B 41 DB51 备案号：30920-2011 四川省地方标准 DB51/T 13172011 蜜蜂白垩病诊断规程 2011 - 06 - 27 发布 2011 - 07 - 01 实施四川省质量技术监督局 发布DB51/T 13172011 I 目 次 前 言 . II 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 术语和定义 1 4 诊断人员 2 5 发病规律 2 6 现场检测 2 7 实验室检测 2 8 结果判定 3 DB51/T 13172011 II 前 言 本标准由四川省畜牧食品局提出并归口。 本标准由四川省质量技术监督局批准。 本标准由四川省蜂业管理站、
2、四川省蜂产品质量检验中心起草。 本标准主要起草人：王顺海、邹志坚、赵平、李念周、罗勤、唐友海。 DB51/T 13172011 1 蜜蜂白垩病诊断规程 1 范围 本标准规定了蜜蜂白垩病的发病规律、现场检测、实验室检测等方面的内容。 本标准适用于蜜蜂白垩病的诊断、检疫。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法 DB51/T 657-2007 蜜蜂检疫技术规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标
3、准。 3.1 工蜂 worker bee 由受精卵发育而成的生殖器官发育不完全的雌性蜂，具有二倍染色体，是蜂群的主体，担负着蜂群内外的主要工作。 3.2 雄蜂 drone bee 由未受精卵发育而成，具单倍染色体，头近圆形，身体粗壮。主要是寻求与处女王交配，只有在蜂群需要时才出现。 3.3 巢脾 comb 由 12 日-18 日龄的工蜂分泌蜡鳞筑造成蜂巢排列而成，是蜜蜂繁衍生息、储藏食粮的场所。每片培育蜜蜂卵、幼虫、蛹的巢脾称为子脾；储存蜂蜜、花粉的巢脾称为蜜脾、粉脾。 3.4 封盖巢房 capped cell 封了盖的巢脾。封盖子一般位于巢脾的中下部，呈黄褐色，形状规则，轮廓清晰；封盖蜜一般
4、位于巢脾的上部，色浅，轮廓不清晰，具波浪纹。 DB51/T 13172011 2 3.5 蜜蜂白垩病 bee chalkbroo d disease 又名“石灰质病”，是蜜蜂球囊菌寄生而引起的蜜蜂幼虫死亡的传染性真菌病。一般 4 日龄的蜜蜂幼虫，特别是雄蜂幼虫易感染。 4 诊断人员 4.1 诊断人员 符合DB51/T657-2007 蜜蜂检疫技术规范中对检疫人员的要求。 5 发病规律 5.1 发病条件 多流行于初夏、秋季节，特别是阴雨潮湿，温度变化频繁的气候条件下易产生。 5.2 病原来源 被病原污染的饲料、患病的幼虫尸体或被病原污染的巢脾是病害传播的主要来源。 5.3 典型症状 主要是蜜蜂老
5、熟幼虫或封盖幼虫易感染死亡，尤以雄蜂幼虫易被感染死亡。幼虫死后，初呈苍白色，渐变成灰色至黑色。虫尸干枯后，变成一块似白垩状的质地较为坚硬的块状物，表面覆盖白色的菌丝与深墨绿近黑色孢囊。 6 现场检测 6.1 箱外检查 蜂箱外巢门近旁有被工蜂拖出的幼虫干尸，质硬，有的干尸呈苍白色，表面有一层绒毛膜，劈开幼虫干尸可见内心为浅棕色；有的干尸为部分或全部黑色，表面有一层黑色颗粒状物质。 6.2 开箱检查 在已封盖的子脾上有呈星点式分布的被工蜂咬开的巢房，巢房内有向一侧帖壁的幼虫干尸，形态完整，质地柔软，无光泽，无臭味，干尸有的为白色，有的为部分或全部黑色。 7 实验室检测 7.1 设备、材料和试剂 7
6、.1.1 设备 低倍光学显微镜、恒温培养箱、超净工作台。 7.1.2 材料 DB51/T 13172011 3 无菌培养皿、载玻片、试管（10ml）、无菌镊子、接种针。 7.1.3 试剂 实验室用水（符合GB/T6682-20 08中三级水的规格要求）、马铃薯酵母膏琼脂培养基、青霉素、链霉素、75%酒精。 7.2 抽样 7.2.1 抽样比例 当蜂群数量小于或等于10群时，均采样；在10群100 群时，以10群采样量为基础，每增加10群，采样量增加1群；在101群200群时，按总群数的15%采样；在201群以上时，按总群数的10%采样。采样时， 每群蜂取10只20只幼虫送实验室检查。 若现场诊断
7、有疑似感染蜜蜂球囊菌时，可以根据实际情况，增加采样的比例。 7.2.2 抽样方法 从每个蜂群中随机抽取子脾一张，按照5点式采样方法，分别从巢脾四角与中央各开启相邻的封盖幼虫房5个，观察是否有患病幼虫存在。采样时，若发现明显变色或死亡的幼虫则不受所圈定的部位限制，应尽量采集送实验室检查。 7.3 实验室检测 7.3.1 镜检法 取幼虫尸体样品于无菌培养皿中，刮取样品表层物于干净的载玻片上，加一滴无菌蒸馏水，制成水浸片，等5分钟后在低倍光学显微镜下观察。放大倍数为400 或600。有呈白色似棉花状的菌丝和椭圆形内含有孢子的孢囊，可初诊为白垩病。 7.3.2 分离培养 将马铃薯酵母膏琼脂培养基加热溶
8、化冷却至47时加入青霉素、链霉素各50万单位抑制杂菌生长，然后用接种针取病死幼虫体表物接种到培养基上，一般接种3个点4个点，置2729培养，72小时后进行观察，当真菌在培养基上产生孢囊后，用接种针取少许孢囊置载玻片上，做水浸片，在低倍光学显微镜下观察，可看到菌丝内有许多细胞核，圆形孢子囊内含有孢子球，球内含有孢子，孢子表面平滑。 8 结果判定 在现场检查时，若见到巢门前、箱底或巢脾上长有白色菌丝或黑白两色的幼虫尸体等临床症状时，可做出初步判断。 在分离培养时，菌落呈白色，较致密，中央凸起，在菌落中间位置或两菌落交接位置出现绿色的孢子囊。菌落老化时颜色变成浅棕色至棕色。菌丝多呈分支状，分支间距较大，菌丝体呈疏松的蛛网状。 一般通过现场检查、镜检和分离培养后，即可对蜜蜂白垩病进行确诊。 _
