1、 Numro de rfrence ISO 11348-1:2007(F) ISO 2007NORME INTERNATIONALE ISO 11348-1 Deuxime dition 2007-12-01 Qualit de leau Dtermination de leffet inhibiteur dchantillons deau sur la luminescence de Vibrio fischeri (Essai de bactries luminescentes) Partie 1: Mthode utilisant des bactries frachement prpa
2、res Water quality Determination of the inhibitory effect of water samples on the light emission of Vibrio fischeri (Luminescent bacteria test) Part 1: Method using freshly prepared bacteria ISO 11348-1:2007(F) PDF Exonration de responsabilit Le prsent fichier PDF peut contenir des polices de caractr
3、es intgres. Conformment aux conditions de licence dAdobe, ce fichier peut tre imprim ou visualis, mais ne doit pas tre modifi moins que lordinateur employ cet effet ne bnficie dune licence autorisant lutilisation de ces polices et que celles-ci y soient installes. Lors du tlchargement de ce fichier,
4、 les parties concernes acceptent de fait la responsabilit de ne pas enfreindre les conditions de licence dAdobe. Le Secrtariat central de lISO dcline toute responsabilit en la matire. Adobe est une marque dpose dAdobe Systems Incorporated. Les dtails relatifs aux produits logiciels utiliss pour la c
5、ration du prsent fichier PDF sont disponibles dans la rubrique General Info du fichier; les paramtres de cration PDF ont t optimiss pour limpression. Toutes les mesures ont t prises pour garantir lexploitation de ce fichier par les comits membres de lISO. Dans le cas peu probable o surviendrait un p
6、roblme dutilisation, veuillez en informer le Secrtariat central ladresse donne ci-dessous. DOCUMENT PROTG PAR COPYRIGHT ISO 2007 Droits de reproduction rservs. Sauf prescription diffrente, aucune partie de cette publication ne peut tre reproduite ni utilise sous quelque forme que ce soit et par aucu
7、n procd, lectronique ou mcanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans laccord crit de lISO ladresse ci-aprs ou du comit membre de lISO dans le pays du demandeur. ISO copyright office Case postale 56 CH-1211 Geneva 20 Tel. + 41 22 749 01 11 Fax. + 41 22 749 09 47 E-mail copyrightiso.org W
8、eb www.iso.org Publi en Suisse ii ISO 2007 Tous droits rservsISO 11348-1:2007(F) ISO 2007 Tous droits rservs iii Sommaire Page Avant-propos. iv Introduction v 1 Domaine dapplication 1 2 Rfrences normatives 1 3 Principe 2 4 Interfrences . 2 5 Ractifs et matriaux 2 6 Appareillage 4 7 chantillonnage et
9、 prtraitement des chantillons 5 8 Culture des bactries luminescentes . 6 9 Mode opratoire 8 10 valuation 9 11 Expression des rsultats . 11 12 Critres de validit 13 13 Fidlit . 13 14 Rapport dessai . 13 Annexe A (informative) Mthode de correction de la couleur . 14 Annexe B (informative) Niveau de di
10、lution D Prparation des sries de dilutions. 17 Annexe C (informative) Donnes de fidlit 20 Annexe D (informative) Essai de bactries luminescentes sur des chantillons deau sale utilisant des bactries frachement cultives 21 Bibliographie 25 ISO 11348-1:2007(F) iv ISO 2007 Tous droits rservsAvant-propos
11、 LISO (Organisation internationale de normalisation) est une fdration mondiale dorganismes nationaux de normalisation (comits membres de lISO). Llaboration des Normes internationales est en gnral confie aux comits techniques de lISO. Chaque comit membre intress par une tude a le droit de faire parti
12、e du comit technique cr cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec lISO participent galement aux travaux. LISO collabore troitement avec la Commission lectrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation lectrotechnique
13、. Les Normes internationales sont rdiges conformment aux rgles donnes dans les Directives ISO/CEI, Partie 2. La tche principale des comits techniques est dlaborer les Normes internationales. Les projets de Normes internationales adopts par les comits techniques sont soumis aux comits membres pour vo
14、te. Leur publication comme Normes internationales requiert lapprobation de 75 % au moins des comits membres votants. Lattention est appele sur le fait que certains des lments du prsent document peuvent faire lobjet de droits de proprit intellectuelle ou de droits analogues. LISO ne saurait tre tenue
15、 pour responsable de ne pas avoir identifi de tels droits de proprit et averti de leur existence. LISO 11348-1 a t labore par le comit technique ISO/TC 147, Qualit de leau, sous-comit SC 5, Mthodes biologiques. Cette deuxime dition annule et remplace la premire dition (ISO 11348-1:1998), qui a fait
16、lobjet dune rvision technique. LISO 11348 comprend les parties suivantes, prsentes sous le titre gnral Qualit de leau Dtermination de leffet inhibiteur dchantillons deau sur la luminescence de Vibrio fischeri (Essai de bactries luminescentes): Partie 1: Mthode utilisant des bactries frachement prpar
17、es Partie 2: Mthode utilisant des bactries dshydrates Partie 3: Mthode utilisant des bactries lyophilises ISO 11348-1:2007(F) ISO 2007 Tous droits rservs v Introduction Les mesurages spcifis dans lISO 11348 peuvent tre raliss au moyen de bactries frachement prpares, de mme quavec des prparations bac
18、triennes lyophilises ou dshydrates. Les travaux de normalisation mens par le DIN Normenausschuss Wasserwesen et lISO/TC 147/SC 5/WG 1 ont montr que, dans certains cas particuliers, ces diffrentes techniques pouvaient donner des rsultats diffrents, notamment en prsence de mtaux lourds. Une telle vari
19、t dans la sensibilit rsulte des diffrences de composition des milieux utiliss pour la prparation de bactries lyophilises ou dshydrates. Ces milieux protecteurs influent sur la biodisponibilit des produits toxiques et/ou sur lmission de lumire des bactries luminescentes. Cela signifie que lorigine et
20、 le type de prparation doivent tre pris en considration lors de linterprtation des rsultats. Cette prise en compte peut se rvler parfois difficile, du fait que les bactries lyophilises et dshydrates peuvent tre obtenues auprs de fournisseurs diffrents. Il peut donc en rsulter une mconnaissance des d
21、tails de la composition, qui, par consquent, ne peut pas tre interprte par lutilisateur. Pour cette raison, la prsente partie de lISO 11348 comprend, en complment des mesurages de toxicit laide de bactries dshydrates (ISO 11348-2) et de bactries lyophilises (ISO 11348-3), la description dun mode opr
22、atoire utilisant des bactries frachement prpares dont les performances peuvent tre interprtes par lutilisateur dans les moindres dtails. Les laboratoires responsables des rsultats ont lopportunit de slectionner la technique la mieux adapte, en se fondant sur des jugements dexperts et des information
23、s relatives aux chantillons deau soumis essai. NORME INTERNATIONALE ISO 11348-1:2007(F) ISO 2007 Tous droits rservs 1 Qualit de leau Dtermination de leffet inhibiteur dchantillons deau sur la luminescence de Vibrio fischeri (Essai de bactries luminescentes) Partie 1: Mthode utilisant des bactries fr
24、achement prpares AVERTISSEMENT Il convient que lutilisateur de la prsente partie de lISO 11348 connaisse bien les pratiques courantes de laboratoire. La prsente norme na pas pour but de traiter tous les problmes de scurit qui sont, le cas chant, lis son utilisation. Il est de la responsabilit de lut
25、ilisateur de mettre en place des pratiques dhygine et de scurit adquates et de sassurer de la conformit avec toutes les dispositions rglementaires nationales. IMPORTANT Il est indispensable que les essais mens selon la prsente partie de lISO 11348 le soient par du personnel qualifi. 1 Domaine dappli
26、cation LISO 11348 dcrit trois mthodes de dtermination de linhibition de la luminescence mise par la bactrie marine Vibrio fischeri (NRRL B-11177). La prsente partie de lISO 11348 spcifie une mthode utilisant des bactries frachement prpares. Cette mthode est applicable: aux eaux uses; aux extraits aq
27、ueux et aux lixiviats; aux eaux douces (eaux de surface ou souterraines); leau de mer ou aux eaux saumtres; aux luats de sdiments (eau douce, eau saumtre et eau de mer); aux eaux interstitielles; aux substances individuelles dilues dans leau. 2 Rfrences normatives Les documents de rfrence suivants s
28、ont indispensables pour lapplication du prsent document. Pour les rfrences dates, seule ldition cite sapplique. Pour les rfrences non dates, la dernire dition du document de rfrence sapplique (y compris les ventuels amendements). ISO 5667-16, Qualit de leau chantillonnage Partie 16: Lignes directric
29、es pour les essais biologiques des chantillons ISO 11348-1:2007(F) 2 ISO 2007 Tous droits rservsISO 5814, Qualit de leau Dosage de loxygne dissous Mthode lectrochimique la sonde ISO 7027, Qualit de leau Dtermination de la turbidit 3 Principe Linhibition de la luminescence produite par des cultures d
30、e Vibrio fischeri est dtermine au moyen dun essai par lots. Celui-ci est mis en uvre par mlange de volumes spcifis de lchantillon soumis essai, ou de lchantillon dilu, et de bactries luminescentes mises en suspension dans une cuvette. Le critre suivi est la luminescence, mesure aprs un temps de cont
31、act de 15 min ou de 30 min, et ventuellement de 5 min, prenant en compte un facteur de correction (f kt ) qui reprsente une mesure des changements dintensit des tmoins pendant le temps dexposition. Leffet inhibiteur de lchantillon deau peut tre dtermin sous la forme des valeurs de dilution minimale
32、sans effet (DMSE) (voir Annexe B) ou des valeurs de CE 20et/ou de CE 50 , au moyen dune srie de dilutions (CE est la concentration effective). 4 Interfrences Des substances insolubles, faiblement solubles ou volatiles, ou des substances qui ragissent avec leau de dilution ou avec la suspension, ou q
33、ui saltrent au cours de la priode dessai, sont susceptibles dinfluer sur les rsultats ou de nuire la reproductibilit des rsultats dessai. Les pertes de luminescence, provoques par labsorption ou la diffusion de lumire, peuvent se produire en prsence deaux fortement colores ou turbides. Cette interfr
34、ence peut tre compense en soumettant lchantillon un traitement contre la turbidit (7.2) ou, par exemple, en utilisant une cuvette de correction de labsorption double compartiment (voir Annexe A). La bioluminescence 6ncessitant de loxygne, les chantillons forte demande en oxygne (et/ou possdant une f
35、aible concentration en oxygne) peuvent provoquer un dficit en oxygne et tre inhibiteurs. La prsence de substances nutritives biodgradabilit rapide dans lchantillon peut provoquer une rduction de la bioluminescence1indpendante de la pollution. Les chantillons dont le pH se trouve en dehors de la plag
36、e de pH = 6,0 pH = 8,5 affectent la luminescence des bactries6, 7 . Un ajustement de lchantillon est ncessaire si leffet toxique du pH est indsirable. tant donn que lorganisme dessai Vibrio fischeri est une bactrie marine, les essais sur des chantillons deau sale suivant le mode opratoire normalis o
37、nt souvent pour rsultat une stimulation de la bioluminescence, susceptible de masquer des effets inhibiteurs (voir Annexe D). Les concentrations en sel de lchantillon initial suprieures 30 g/l de NaCl, ou les teneurs en composs autres produisant une osmolarit quivalente peuvent conduire, en associat
38、ion avec ladjonction de sel requis pour lessai, des effets hyperosmotiques. Pour viter ces effets, il convient que la concentration en sel rsultante dans les chantillons soumis essai nexcde pas losmolarit dune solution de chlorure de sodium 35 g/l. 5 Ractifs et matriaux Utiliser des substances chimi
39、ques de qualit analytique reconnue. Utiliser de leau distille ou prsentant une puret quivalente. ISO 11348-1:2007(F) ISO 2007 Tous droits rservs 3 5.1 Bactries pour essai. Utiliser une souche de bactries luminescentes appartenant lespce Vibrio fischeri NRRL B-11177. Les souches de bactries peuvent p
40、rovenir de ractifs lyophiliss ou dshydrats disponibles dans le commerce ou de collections de souches comme la Deutsche Sammlung fr Mikrorganismen und Zellkulturen GmbH, Mascheroder Weg 10, D-38124 Braunschweig, Allemagne, ou la NRRL, ARS Culture collection NCAUR, 1815 N. University Street, Peoria, I
41、llinois, 61604, tats-Unis. Les suspensions bactriennes utilises pour les mesurages de la toxicit doivent tre frachement prpares partir de cultures. 5.2 Solution de chlorure de sodium, utilise comme diluant. Dissoudre 20 g de chlorure de sodium (NaCl) dans de leau et complter 1 l avec de leau. 5.3 So
42、lution dhydroxyde de sodium, c(NaOH) = 1 mol/l, par exemple. 5.4 Acide chlorhydrique, c(HCl) = 1 mol/l, par exemple. Il peut tre ncessaire, pour lajustement du pH, dutiliser des acides ou des bases de concentrations suprieures ou infrieures. 5.5 Solution destine aux bactries frachement prpares. 8,0
43、g D( +)-Glucose monohydrat (C 6 H 12 O 6 ,H 2 O) 20,0 g Chlorure de sodium (NaCl) 2,035 g Chlorure de magnsium hexahydrat (MgCl 2 ,6H 2 O) 0,30 g Chlorure de potassium (KCl) 11,9 g N-(2-Hydroxythyl)piprazine-N-(2-acide thanesulfonique) (HEPES) Dissoudre dans de leau, agiter pendant environ 30 min et
44、 ajuster le pH 7,0 0,2 avec la solution dhydroxyde de sodium (5.3) ou dacide chlorhydrique (5.4). Complter 1 l avec de leau. Cette solution peut tre conserve sous forme daliquotes de 18 C 20 C. 5.6 Substances de rfrence. Prparer les solutions mres des substances de rfrence suivantes en utilisant la
45、solution de chlorure de sodium (5.2) sparment comme diluant, sans ajustement du pH: 219,8 mg/l Sulfate de zinc heptahydrat (ZnSO 4 ,7H 2 O) 9 mg/l 3,5-Dichlorophnol (C 6 H 4 OCl 2 ) (puret W 99,9 %) 22,6 mg/l Dichromate de potassium (K 2 Cr 2 O 7 ) Ces concentrations reprsentent environ le double de
46、s valeurs de CE 50attendues pour les substances de rfrence respectives dans la prsente partie de lISO 11348. Les volumes ncessaires dpendent de la configuration des essais. NOTE Il est possible dutiliser des prparations chimiques du commerce ayant des concentrations dfinies en ZnSO 4et en K 2 Cr 2 O
47、 7(Titrisol) pour prparer les solutions mres des substances de rfrence. ISO 11348-1:2007(F) 4 ISO 2007 Tous droits rservs5.7 Milieu de culture liquide destin aux prcultures et aux cultures principales. 30 g Chlorure de sodium (NaCl) 6,10 g Dihydrognophosphate de sodium monohydrat (NaH 2 PO 4 ,H 2 O) 2,75 g Hydrognophosphate de dipotassium trihydrat (K 2 HPO 4 ,3H 2 O) 0,204 g Sulfate de magnsium heptahydrat (MgSO 4
