1、 ISO 2012 Textiles Dtermination de lactivit antifongique des produits textiles Partie 1: Mthode par luminescence Textiles Determination of antifungal activity of textile products Part 1: Luminescence method Numro de rfrence ISO 13629-1:2012(F) NORME INTERNATIONALE ISO 13629-1 Premire dition 2012-08-
2、15 ISO 13629-1:2012(F) ii ISO 2012 Tous droits rservs DOCUMENT PROTG PAR COPYRIGHT ISO 2012 Droits de reproduction rservs. Sauf prescription diffrente, aucune partie de cette publication ne peut tre reproduite ni utilise sous quelque forme que ce soit et par aucun procd, lectronique ou mcanique, y c
3、ompris la photocopie et les microfilms, sans laccord crit de lISO ladresse ci-aprs ou du comit membre de lISO dans le pays du demandeur. ISO copyright office Case postale 56 CH-1211 Geneva 20 Tel. + 41 22 749 01 11 Fax + 41 22 749 09 47 E-mail copyrightiso.org Web www.iso.org Publi en Suisse ISO 136
4、29-1:2012(F) ISO 2012 Tous droits rservs iii Sommaire Page Avant-propos .iv Introduction v 1 Domaine dapplication . 1 2 Rfrences normatives 1 3 T ermes et dfinitions 1 4 Principe 2 5 Mesures de scurit . 2 6 Champignons de rfrence 2 7 Appareillage 2 8 Ractifs et milieux de culture . 4 8.1 Gnralits 4
5、8.2 Eau pure . 4 8.3 Tensio-actif anionique 4 8.4 Ractifs luminescents, ractifs et solutions tampons 4 8.5 Milieu de culture 6 9 Conservation et utilisation du champignon . 7 9.1 Conservation du champignon 7 9.2 Utilisation du champignon 7 10 Suspension de spores . 7 10.1 Suspension de spores dans d
6、es milieux de culture 8 10.2 Collecte et dispersion de la suspension de spores partir dun milieu de culture 8 10.3 Filtration pour liminer les hyphes et les filaments de spore . 8 10.4 Utilisation de la sparation centrifuge et re-suspension pour liminer le liquide surnageant 9 10.5 Confirmation de l
7、a concentration de la suspension de spores 9 10.6 Ajustement de la suspension de spores pour les essais . 9 11 Prparation de la courbe dtalonnage de lATP 9 12 Mthode dessai .10 12.1 Prparation des prouvettes et inoculation .10 12.2 Incubation 12 13 Mesurage de lintensit de la luminescence 13 13.1 Mt
8、hode dabsorption 13 13.2 Mthode de transfert 14 14 Calcul 14 14.1 valuation de lefficacit de lessai 14 14.2 Calcul de la valeur dactivit antifongique .14 15 Rapport dessai 15 Annexe A (normative) Champignons utiliss dans la prsente partie de lISO 13629 16 Annexe B (informative) Efficacit antifongiqu
9、e 17 Bibliographie 18 ISO 13629-1:2012(F) Avant-propos LISO (Organisation internationale de normalisation) est une fdration mondiale dorganismes nationaux de normalisation (comits membres de lISO). Llaboration des Normes internationales est en gnral confie aux comits techniques de lISO. Chaque comit
10、 membre intress par une tude a le droit de faire partie du comit technique cr cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec lISO participent galement aux travaux. LISO collabore troitement avec la Commission lectrotechnique internationale (CE
11、I) en ce qui concerne la normalisation lectrotechnique. Les Normes internationales sont rdiges conformment aux rgles donnes dans les Directives ISO/CEI, Partie 2. La tche principale des comits techniques est dlaborer les Normes internationales. Les projets de Normes internationales adopts par les co
12、mits techniques sont soumis aux comits membres pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert lapprobation de 75 % au moins des comits membres votants. Lattention est appele sur le fait que certains des lments du prsent document peuvent faire lobjet de droits de proprit intellectu
13、elle ou de droits analogues. LISO ne saurait tre tenue pour responsable de ne pas avoir identifi de tels droits de proprit et averti de leur existence. L ISO 13629-1 a t labore par le comit technique ISO/TC 38, Textiles. L ISO 13629 comprend les parties suivantes, prsentes sous le titre gnral Textil
14、es Dtermination de lactivit antifongique des produits textiles: Partie 1: Mthode par luminescence La partie suivante est en cours dlaboration: Partie 2: Mthode par dnombrement sur plaque de glose iv ISO 2012 Tous droits rservs ISO 13629-1:2012(F) Introduction Lutilisation de produits spcialiss dans
15、les textiles antimicrobiens se dveloppe danne en anne pour diverses applications. Ces produits contribuent certainement la prvention de la dtrioration des matriaux et lamlioration de lenvironnement et de la qualit de vie. Pour ces raisons, lISO/TC 38/GT 23 a labor lISO 20743 en 2007 et continue tudi
16、er une mthode dessai portant sur lactivit antifongique des produits textiles sous la forme dune srie de Normes internationales. La prsente partie de lISO 13629 adopte une mthode par luminescence de lATP (adnosine triphosphate) comme base pour la dtermination quantitative de lactivit antifongique. Le
17、s caractristiques de la mthode par luminescence sont les suivantes: marge derreur extrmement faible comparativement la mthode par dnombrement de colonies; limination du temps de culture pour la formation des colonies et, par consquent, obtention dun temps dessai plus court; simplification du droulem
18、ent de lessai. ISO 2012 Tous droits rservs v Textiles Dtermination de lactivit antifongique des produits textiles Partie 1: Mthode par luminescence 1 Domaine dapplication La prsente partie de lISO 13629 spcifie une mthode dessai pour la dtermination quantitative de lactivit antifongique en mesurant
19、lintensit de la luminescence produite par une raction enzymatique mthode de lATP (adnosine triphosphate). La prsente partie de lISO 13629 sapplique aux diffrents types de produits textiles, tels que les fibres, les fils, les toffes, les vtements, les couvertures et les draps, les tissus dameublement
20、 et divers autres types darticles. En fonction de lapplication prvue et de lenvironnement dans lequel le produit textile est utilis, lutilisateur peut choisir la mthode dvaluation qui convient le mieux parmi les suivantes, avant le dnombrement avec la mthode de lATP: a) la mthode dabsorption (mthode
21、 dvaluation dans laquelle la suspension de champignons dessai est inocule directement sur les prouvettes); b) la mthode de transfert (mthode dvaluation dans laquelle les champignons dessai sont placs sur une bote de glose avant dtre imprims sur les prouvettes). 2 Rfrences normatives Les documents de
22、 rfrence suivants sont indispensables pour lapplication du prsent document. Pour les rfrences dates, seule ldition cite sapplique. Pour les rfrences non dates, la dernire dition du document de rfrence sapplique (y compris les ventuels amendements). ISO 105-F02, Textiles Essais de solidit des teintur
23、es Partie F02: Spcifications pour les tissus tmoins en coton et en viscose 3 T ermes et dfinition s Pour les besoins du prsent document, les termes et dfinitions suivants sappliquent. 3.1 prouvette tmoin prouvette utilise pour confirmer la croissance du champignon dessai NOTE Lprouvette tmoin peut t
24、re issue des mmes produits textiles que ceux soumis essai mais sans traitement antifongique. Si une telle prouvette nest pas disponible, une prouvette 100 % coton sans azurant optique ou autre apprt, conforme aux exigences de lISO 105-F02, est utilise comme prouvette tmoin aprs 10 cycles de lavage d
25、e 10 min une temprature de 60 C sans dtergents ni azurants et un double rinage de 5 min conformment lISO 6330. 3.2 agent antifongique agent servant empcher ou attnuer la croissance de champignons ou rduire leur nombre 3.3 traitement antifongique traitement servant empcher ou attnuer la croissance de
26、 champignons ou rduire leur nombre NORME INTERNATIONALE ISO 13629-1:2012(F) ISO 2012 Tous droits rservs 1 ISO 13629-1:2012(F) 3.4 suspension de spores liquide contenant des spores fongiques uniformment rparties dans de leau strilise contenant un tensio- actif anionique (8.3) 3.5 ATP adnosine triphos
27、phate, nuclotide multifonctionnel prsent dans les champignons vivants 3.6 activit antifongique activit servant empcher ou attnuer la croissance de champignons, exprime sous forme de diffrence de la valeur de croissance en logarithme de lATP entre lprouvette tmoin et lprouvette dessai 3.7 mthode par
28、luminescence mthode dans laquelle la quantit dATP contenue dans les cellules fongiques est mesure en moles dATP 4 Principe Une prouvette dessai et une prouvette tmoin sont inocules avec une suspension de spores dun champignon de rfrence et incubes 25 C pendant 42 h. Dans la prsente partie de lISO 13
29、629, la croissance fongique ou lactivit antifongique sont dtermines de manire quantitative, par comparaison avec le rsultat obtenu avec une prouvette tmoin, en mesurant lintensit de la luminescence de lATP intracellulaire. 5 Mesures de scurit Les mthodes dessai spcifies ici ncessitent lutilisation d
30、e champignons. Cet essai doit tre ralis exclusivement par un personnel ayant reu une formation et ayant de lexprience dans les techniques microbiologiques. Toutes les rglementations, rgles et recommandations concernant les mesures de scurit prendre dans le pays concern doivent tre consultes et suivi
31、es. 6 Champignons de rfrence Les champignons utiliser doivent tre choisis dans le Tableau A.1. Des types de champignons quivalents obtenus auprs dautres agences de la Fdration mondiale des collections de cultures (World Federation for Culture Collections WFCC) peuvent tre utiliss sous rserve dun acc
32、ord entre les parties intresses. Le numro de conservation et la provenance de la souche du champignon utilis doivent tre mentionns dans le rapport dessai. 7 Appareillage Matriel de laboratoire courant et, en particulier, ce qui suit. 7.1 Gaze, pour les essais biochimiques ou laine de verre (spcifica
33、tion FR). 7.2 Botes de Petri, dun diamtre intrieur denviron 90 mm et de 55 mm 60 mm. 7.3 Strilisateur sec, pouvant maintenir la temprature entre 160 C et 180 C. 2 ISO 2012 Tous droits rservs ISO 13629-1:2012(F) 7.4 Autoclave, pouvant maintenir la temprature (121 2) C (quivalent 103 kPa). 7.5 Poste d
34、e scurit microbiologique, pour les essais biochimiques ou offrant des performances quivalentes. 7.6 Anse densemencement en platine, de 2 mm 4 mm de diamtre. 7.7 Fil densemencement en platine en forme de L. 7.8 Incubateur, pouvant maintenir la temprature cible dans une plage comprise entre 20 C et 37
35、 C avec une tolrance de 2 C. 7.9 Flacon, bouchon vis de 30 ml en verre, avec un joint en polyttrafluorothylne ou en silicone et un bouchon en polypropylne. 7.10 Baguette de verre, dun diamtre compris entre 5 mm et 18 mm et dune masse comprise entre 1 g et 50 g. 7.11 Entonnoir en verre. 7.12 Pipettes
36、, dune capacit de 0,05 ml, 0,1 ml, 0,2 ml, 1 ml, 5 ml et 10 ml avec une tolrance de 5,0 %. 7.13 Pipette Pasteur, pour les essais microbiologiques. 7.14 Fiole conique, dune capacit comprise entre 100 ml et 500 ml. 7.15 Pinces. 7.16 Tube essai en plastique, spcialement conu pour le luminomtre. 7.17 Ag
37、itateur pour tubes essai. 7.18 Sparateur centrifuge, ayant une acclration centrifuge denviron 2 000g. 7.19 Tube centrifuger, utilis dans un sparateur centrifuge. 7.20 Hmatimtre, permettant de raliser des mesures entre 1 10 6 /ml et 3 10 6 /ml. 7.21 Microscope, dun grossissement 200. 7.22 Nettoyeur u
38、ltrasons, compact, pour les outils dexprimentation, ayant une frquence denviron 30 kHz 50 kHz. 7.23 Luminomtre, mesurant une longueur donde comprise entre 300 nm et 650 nm, et permettant de raliser des mesures de lATP entre 1 10 8mol/l et 1 10 5mol/l, dans les conditions dessai dfinies en 8.4 et lAr
39、ticle 11. 7.24 pH-mtre, dune prcision de 0,1 25 C. 7.25 Rfrigrateur, pouvant maintenir la temprature entre 2 C et 10 C. ISO 2012 Tous droits rservs 3 ISO 13629-1:2012(F) 7.26 Deux conglateurs, lun tant rglable une temprature infrieure 80 C et lautre une temprature infrieure 20 C. Les tubes essai, fl
40、acons, fioles, pipettes et pinces, doivent tre soigneusement lavs dans un dtergent alcalin ou neutre, rincs, schs et traits par strilisation sec ou par strilisation la vapeur sous haute pression avant utilisation. 8 Ractifs et milieux de culture 8.1 Gnralits Les ractifs utiliss lors des essais doive
41、nt tre de qualit analytique et/ou adapts pour les essais microbiologiques. Il est recommand dutiliser des produits dshydrats disponibles dans le commerce pour la prparation des milieux de culture, en respectant scrupuleusement les instructions du fabricant. 8.2 Eau pure Eau de qualit analytique pour
42、 la prparation des milieux microbiologiques et des ractifs, frachement distille et/ou passe sur rsine changeuse dions et/ou ultra-filtre et/ou filtre par osmose inverse (OI). Elle doit tre exempte de substances toxiques ou inhibitrices pour les champignons. 8.3 Tensio-actif anionique Sulfosuccinate
43、de dioctyle et de sodium pour prparer la suspension de spores. 8.4 Ractifs luminescents, ractifs et solutions tampons 8.4.1 Gnralits Utiliser des ractifs et des solutions tampons prpars comme indiqu en 8.4.2 8.4.8. Des produits prpars du commerce peuvent tre utiliss aprs une validation approprie. 8.
44、4.2 Solution talon mre dATP (1 10 -3mol/l) appele talon ATP ci-aprs Adnosine-5 triphosphate disodique trihydrat (C 10 H 14 O 13 P 3 Na 2 , 3H 2 O) 60,5 mg Eau pure (8.2) 100 ml (volume final) Placer la solution prpare dans un rcipient hermtiquement ferm et congeler une temprature de -20 C ou infrieu
45、re pour une conservation pendant 6 mois au maximum. NOTE Il nest pas recommand de recongeler et/ou de rutiliser une solution ayant t dcongele. 8.4.3 Solution tampon pour ractif luminescent ATP N-Tris(hydroxymthyl)mthyl glycine 1 117 mg Sel disodique de lacide thylnediaminettraactique dihydrat 183 mg
46、 Actate de magnsium ttrahydrat 808 mg DL-dithiothreitol 6,7 mg Dextrine 25 000 mg 4 ISO 2012 Tous droits rservs ISO 13629-1:2012(F) Sucrose 925 mg Eau pure 250 ml (volume final) pH 7,5 0,2 8.4.4 Ractif luminescent ATP Les ractifs luminescents ATP doivent permettre un luminomtre (7.23) de mesurer lAT
47、P entre 1 10 -8mol/l et 1 10 -5mol/l, dans les conditions dessai dfinies en 8.4 et lArticle 11. Lucifrase 0,7 mg D-lucifrine 12,6 mg Albumine de srum bovin 56 mg Solution tampon (voir 8.4.3) 30 ml Aprs dissolution complte, laisser reposer temprature ambiante pendant 15 min avant utilisation. Utiliser dans les 3 h qui suivent la prparation. 8.4.5 Ractif dextraction de lATP Les ractifs dextraction de
