1、A Numroderfrence ISO14797:1999 (F) NORME INTERNATIONALE ISO 14797 Firstdition 19990315 AlimentsdesanimauxDosage delafurazolidoneMthodepar chromatographieliquidehaute performance AnimalfeedingstuffsDeterminationoffurazolidonecontent MethodusinghighperformanceliquidchromatographyISO14797:1999(F) ISO19
2、99 Droitsdereproductionrservs.Saufprescriptiondiffrente,aucunepartiedecettepublicationnepeuttrereproduiteniut ilisesousquelque formequecesoitetparaucunprocd,lectroniqueoumcanique,ycomprislaphotocopieetlesmicrofilms,sanslaccordcr itdelditeur. Organisationinternationaledenormalisation Casepostale56 CH
3、1211Genve20 Suisse Internet isoiso.ch ImprimenSuisse ii Avantpropos LISO(Organisationinternationaledenormalisation)estunefdrationmondialedorganismesnationauxde normalisation(comitsmembresdelISO).LlaborationdesNormesinternationalesestengnralconfieaux comitstechniquesdelISO.Chaquecomitmembreintresspar
4、unetudealedroitdefairepartieducomit techniquecrceteffet.Lesorganisationsinternationales,gouvernementalesetnongouvernementales,en liaisonaveclISOparticipentgalementauxtravaux.LISOcollaboretroitementaveclaCommission lectrotechniqueinternationale(CEI)encequiconcernelanormalisationlectrotechnique. Lespr
5、ojetsdeNormesinternationalesadoptsparlescomitstechniquessontsoumisauxcomitsmembrespour vote.LeurpublicationcommeNormesinternationalesrequiertlapprobationde75 %aumoinsdescomits membresvotants. LaNormeinternationaleISO 14797atlaboreparlecomittechniqueISO/TC 34, Produitsagricoles alimentaires,souscomit
6、SC10, Alimentsdesanimaux . LesannexesA,BetCdelaprsenteNormeinternationalesontdonnesuniquementtitredinformation.NORMEINTERNATIONALE ISO ISO14797:1999(F) 1 AlimentsdesanimauxDosagedelafurazolidoneMthode parchromatographieliquidehauteperformance 1Domaine dapplication LaprsenteNormeinternationalespcifie
7、unemthodedechromatographieliquidehauteperformance(CLHP) pourladterminationdelateneurenfurazolidonedanslesprmixetdanslesalimentsdesanimaux. Lamthodeestapplicableauxalimentspouranimauxdontlateneurenfurazolidonevade25mg/kg5 000mg/kg, ainsiquauxprmixdontlateneurenfurazolidonepeutallerjusquunefractionmas
8、siquede20%auparavantcrit comme20%( m/m). NOTE1 Pourlesalimentsdesanimaux,lateneurenfurazolidoneestexprimeenmilligrammesparkilogramme,etpourles prmixcommefractionmassiqueenpourcent%( m/m). NOTE 2 Lafurazolidoneestunesubstancechimiothrapiquedelafamilledesnitrofuranes.Lesnitrofuranessont bactriostatiqu
9、esetbactricides,actifscontrelesmicroorganismesGrampositifsetGramngatifs,etcontrecertaines moisissuresetcertainsprotozoaires. 2Rfrence normative Lanormesuivantecontientdesdispositionsqui,parsuitedelarfrencequienestfaite,constituentdes dispositionsvalablespourlaprsenteNormeinternationale.Aumomentdelap
10、ublication,lditionindiquetaiten vigueur.ToutenormeestsujettervisionetlespartiesprenantesdesaccordsfondssurlaprsenteNorme internationalesontinvitesrechercherlapossibilitdappliquerlditionlaplusrcentedelanormeindiqueci aprs.LesmembresdelaCEIetdelISOpossdentleregistredesNormesinternationalesenvigueurun
11、momentdonn. ISO6498:1998, AlimentsdesanimauxPrparationdeschantillonspouressai. 3Principe Extractiondelafurazolidonedunchantillonlaidedunmlangedactonitrileetdemthanol.Humidification pralabledesalimentspouranimauxdansdeleau.Purificationdelextraitdalimentspouranimauxsurunecolonne doxydedaluminiumcourte
12、puisdilutiondansdeleau.Dilutiondelextraitdeprmixavecunmlangedeau, dactonitrileetdemthanol.Analysedelextraitfinalparchromatographiepolaritdephasesinverseavec dtectionUV365nm(voirrfrences 1 3). 4Ractifs Saufindicationdiffrente,utiliseruniquementdesractifsdequalitanalytiquereconnue. 4.1 Eau,dminraliseo
13、udionise,dunersistivitaumoinsgale10M W cmoudeleaudunepuretau moinsquivalente.ISO14797:1999(F) ISO 2 4.2 Solvantdextraction: mlangedactonitrileetdemthanol(1:1parvolume). Mlangerdesvolumesgauxdactonitrileetdemthanol.Bienmlangeretlaisserlemlangeatteindrela tempratureambianteavantdelutiliser. 4.3 Solvan
14、tpourdilution: mlangedesolvantdextraction(4.2)etdeau(4.1)(35:65parvolume). Mlanger350mldesolvantdextraction(4.2)et650mldeau(4.1). 4.4 Acideactique (CH 3 CO 2 H),fractionvolumiquede10%10%( V/V ). Diluer10mldacideactiqueglacial100mlavecdeleau(4.1). 4.5 Solutiontampondactatedesodium , c(CH 3 CO 2 Na)=0
15、,01mol/l,pH=6,0. Peser0,82gdactatedesodiumdansunefiolejaugede1000ml.Dissoudredans700mldeau.AjusterlepH 6,0laidedacideactique(4.4).Complterauvolumeavecdeleauetmlanger. 4.6 PhasemobilepourCLHP . Runir800mldelasolutiontampondactatedesodium(4.5)et200mldactonitrilepuismlanger.Filtrerlluant surunfiltredep
16、orositgale0,22menutilisantun systmedefiltrationdesolvant(5.2),puisdgazerpendant 10mindanslebainultrasons(5.3)avantlemploi. 4.7 talondefurazolidone:N(5nitro2furfurylidne)3amino2oxazolidone);numroCAS67458selonle catalogueChemicalAbstracts. AVERTISSEMENTLafurazolidonetanttrssensiblelalumire,lesopration
17、sdoiventtremenes labridelalumiredujouretdetoutesourcelumineuseartificielleblanche.viterdinhalerlafurazolidone etlessolutionsencontenantetdesyexposer.Ilsagiteneffetdunesubstancetoxique.Travaillersous unehottepourmanipulerlessolvantsetlessolutions.Porterdeslunettesdescuritetdesvtementsde protection. 4
18、.8 Solutionmredefurazolidone (environ250 m g/ml). Peser25mg 1mgdefurazolidone(4.7)0,1mgprsdansunefiolejaugede100ml.Dissoudredanslesolvant dextraction(4.2),etcomplterlamarqueaveccemmesolvantetmlanger.Calculerlaconcentrationentenant comptedelapuretdumatriau.Prparerunenouvellesolutiontouslesmois.Conser
19、verlabridelalumire entre0Cet8C. 4.9 Solutionsdetravaildefurazolidone (environ5g/mlet12,5g/ml). Pipetterrespectivement2,0mlet5,0mldelasolutionmredefurazolidone(4.8)dansdeuxfiolesjaugesde 100ml.Ajouter65mldeau,complterlamarqueaveclesolvantdextraction(4.2)etmlanger.Prparerde nouvellessolutionspourchaqu
20、esriedchantillons. 4.10 Oxydedaluminiumneutre ,activit1. NOTE 0%1%deauestncessairepourunedsactivationtotale. 5Appareillage Matrielcourantdelaboratoireet,enparticulier,cequisuit. 5.1pHmtre . 5.2Systmedefiltrationdesolvant ,appareillagetoutenverrepouvantrecevoirdesfiltresduneporositde 0,22m.ISO ISO147
21、97:1999(F) 3 5.3Bainultrasons . 5.4Agitateur rotatif ,permettantunerotationhorizontaleetayantunefrquencederotationcompriseentre 250min 1 et300min 1 . 5.5Filtreenmicrofibresdeverre ,dundiamtregal15cm. 5.6Lainedeverre . 5.7 Colonnedeverrepourchromatographie,de30 cmdelongueuretde10 mmdediamtreintrieur,
22、 rtrcissantuneextrmitetraccordeuntamponenlainedeverre(5.6). 5.8Systme de filtration ,quipdefiltresenpolyvinylidnedifluorure(PVDF)ouenpolyttrafluorthylne (PTFE)duneporositde0,45m. 5.9AppareilCLHP . 5.9.1Pompe ,sanspulsations,capabledemaintenirundbitcomprisentre0,1ml/minet2,0ml/min. 5.9.2Boucledinject
23、ion ,adaptedesinjectionsde20l50l. 5.9.3DtecteurUV ,capabledemesuragessurunelongueurdondede365nm. Sidisponible,undtecteurbarrettedediodespeuttreutilispourconfirmation. 5.9.4Enregistreur . 5.9.5Colonne de garde: silicegreffeC 18 ,granulomtriecompriseentre37met100m,longueur20mm, diamtreintrieur3,9mm,ou
24、touteautrecolonnedeprotectiondequalitquivalente. 5.9.6Colonne analytique: silicegreffeC 18 ,tailledeparticules5 m,longueur200 mm,diamtreinterne 3,0 mm,outoutecolonneanalytiquedequalitquivalente. Pourlafurazolidone,unfacteurdecapacit( K)daumoins1,0doittreobtenu. NOTE Lefacteurdecapacitestdfinicomme:
25、=- K t t R 0 1 o K estlefacteurdecapacit; t R estletempsdertentiondelafurazolidone,enminutes; t 0 estletempsdertentiondupicdelafurazolidonenonretenue,enminutes. 5.10Seringuejetable ,de5mldecapacit. 6chantillonnage LchantillonnagenefaitpaspartiedelamthodespcifiedanslaprsenteNormeinternationale.Unemth
26、ode dchantillonnagerecommandeestdonnedanslISO64974. Ilestimportantquelelaboratoirereoiveunchantillonrellementreprsentatif,nonendommagoumodifilors dutransportetdelentreposage.ISO14797:1999(F) ISO 4 7 Prparationdelchantillonpouressai PrparerlchantillonpouressaiconformmentlISO6498. Broyerlchantillondel
27、aboratoire(habituellement500g)defaonquilpassetraversuntamismaillesde1mm. Mlangersoigneusement. 8Mode opratoire 8.1Gnralits Paralllementlanalysedelchantillonpouressai(oudunesriedchantillonspouressai),analyserun chantillonblanc,unchantillonblancdop,et,sipossible,unchantillonderfrence. NOTE Leschantill
28、onsblancsontdesmlangeshomognesdalimentscomparablesayantuneteneurenfurazolidone infrieure10 mg/kg.Leschantillonsblancsdopssontdeschantillonsdalimentsblancdanslesquelsdela furazolidoneatajoute.Leschantillonsblancetleschantillonsderfrencepeuventtreconservspendant1ansils sontentrepossunetempraturecompri
29、seentre0Cet8C. Ilyalieudeprocderunenouvelleanalyselorsqueletauxdercuprationestinfrieur94%ousuprieur 106%. 8.2 Prparationdunchantillondop Ilconvientquelateneurenfurazolidonedelchantillondopsoitpratiquementgalelateneurprvueen furazolidonedelchantillon.Pourunchantillondopdontlateneurenfurazolidoneestga
30、le250mg/kg,suivre laprocduresuivante. Pipetter5,0mldelasolutionmre(4.8)dansunefioleconiquede250ml.vaporersousfluxdazotejusqu obtentiondunvolumegal0,5mlenvironetajouter5gdalimenttmoin.Mlangersoigneusementetlaisser reposerpendant10minaumoinsavantdeprocderlextraction(8.3). 8.3Extraction 8.3.1 Alimentsa
31、yantuneteneurenfurazolidoneallantde25mg/kg2500mg/kg Peser5,0gdelchantillonpouressaiprpar0,05gprsdansunefioleconiquede250ml.Ajouter15,0ml deau,mlangeretlaisserreposerpendant5min.Ajouter35,0mldesolvantdextraction(4.2),boucheretagiter vigoureusementpendant30minsurlagitateurrotatif(5.4).Filtrerlasolutio
32、nsurunfiltreenmicrofibresdeverre (5.5)etutiliserlefiltratpouruneanalysechromatographiquesurcolonneconformment8.4. 8.3.2 Alimentsayantuneteneurenfurazolidoneallantde2500mg/kg5000mg/kg Peser5,0gdelchantillonpouressaiprpar0,1mgprsdansunefioleconiquede250ml.Ajouter30,0ml deau,mlangeretlaisserreposerpend
33、ant5min.Ajouter70,0mldesolvantdextraction(4.2),boucheretagiter vigoureusementpendant30minsurlagitateurrotatif(5.4).Filtrerlasolutionsurunfiltreenmicrofibresdeverre (5.5)etutiliserlefiltratpouruneanalysechromatographiquesurcolonneconformment8.4. 8.3.3 Prmixayantunefractionmassiquedefurazolidoneallant
34、de0,5%7% 0,5%( m/m)7%( m/m) Peser1,0gdelchantillonpouressaiprpar0,01gprsdansunefioleconiquede250ml.Ajouter100,0mlde solvantdextraction(4.2),boucheretagitervigoureusementpendant30minsurlagitateurrotatif(5.4).Filtrerla solutionsurunfiltreenmicrofibresdeverre(5.5). Diluerlefiltratavecdusolvantpourdilut
35、ion(4.3),defaonquelasolutionfinaleobtenueaituneteneuren furazolidonecompriseentre5g/ml10g/ml.Lefacteurdedilutionest f.ISO ISO14797:1999(F) 5 Mlangersoigneusementetfiltrerlasolutionsurlesystmedefiltration(5.8).Ut iliserlefiltratpouruneanalyse HPLCconformment8.5. NOTE Lefacteurdedilutionrequis( f )peu
36、ttreestimenutilisantlquationsuivante: f mw V e exp r = r o f e estlefacteurdedilutionrequisestimdelextraitdchantillon; m estlamassedelaprisedessai,engrammes; w exp estlateneurprvueenfurazolidonedelchantillon,enmilligrammesparkilogramme; r r estlateneurrequiseenfurazolidonedelasolutionfinale,enmicrog
37、rammesparmillilitre; V estlevolumetotaldesolvantdextraction,enmillilitres,ajoutlaprisedessai(voiraussilanoteen8.5.2). 8.3.4 Prmixayantunefractionmassiquedefurazolidoneallantde7%10% 7%( m/m)10%( m/m) Peser1,0gdelchantillonpouressaiprpar0,01gprsdansunefioleconiquede500ml.Ajouter200,0mlde solvantdextra
38、ction(4.2),boucheretagitervigoureusementpendant30minsurlagitateurrotatif(5.4).Filtrerla solutionsurunfiltreenmicrofibresdeverre(5.5). Diluerlefiltratavecdusolvantpourdilution(4.3),defaonquelasolutionfinaleobtenueaieuneteneuren furazolidonecompriseentre5g/ml10g/ml.Lefacteurdedilutionest f. Mlangersoi
39、gneusementetfiltrerlasolutionsurlesystmedefiltration(5.8).Ut iliserlefiltratpouruneanalyse CLHPconformment8.5. NOTE Voirlanoteen8.3.3pourlecalculdufacteurdedilution. 8.3.5 Prmixayantunefractionmassiquedefurazolidoneallantde10%20% 10%( m/m)20%( m/m) Peser0,5gdelchantillonpouressaiprpar5mgprsdansunefi
40、oleconiquede500ml.Ajouter200,0mlde solvantdextraction(4.2),boucheretagitervigoureusementpendant30minsurlagitateurrotatif(5.4).Filtrerla solutionsurunfiltreenmicrofibresdeverre(5.5). Diluerlefiltratavecdusolvantpourdilution(4.3),defaonquelasolutionfinaleobtenueaieuneteneuren furazolidonecompriseentre5g/ml10g/ml.Lefacteurdedilutionest f. Mlangersoigneusementetfiltrerlasolutionsurlesystmedefiltration(5.8).Ut iliserlefiltratpouruneanalyse CLHPconformment8.5. NOTE Voirla
