1、A Numroderfrence ISO15522:1999 (F) NORME INTERNATIONALE ISO 15522 Premiredition 19990601 QualitdeleauDterminationdeleffet inhibiteurdesconstituantsdeleausurla croissancedesmicroorganismesdeboues actives WaterqualityDeterminationoftheinhibitoryeffectofwaterconstituents onthegrowthofactivatedsludgemic
2、roorganismsISO15522:1999(F) ISO1999 Droitsdereproductionrservs.Saufprescriptiondiffrente,aucunepartiedecettepublicationnepeuttrereproduiteniut ilisesousquelque formequecesoitetparaucunprocd,lectroniqueoumcanique,ycomprislaphotocopieetlesmicrofilms,sanslaccordcr itdelditeur. Organisationinternational
3、edenormalisation Casepostale56 CH1211Genve20 Suisse Internet isoiso.ch ImprimenSuisse ii Sommaire Page 1Domainedapplication 1 2Rfrencesnormatives .1 3Termesetdfinitions .2 4Principe. 2 5Environnementdessai 2 6Ractifs. 3 7Inoculum. 4 8Appareillage . 4 9Modeopratoire .5 10Expressiondesrsultats 6 11Int
4、erprtationdesrsultats 7 12Reproductibilit 8 13Rapportdessai . .8 AnnexeA (informative) Exemplesducontenudefiolesdessaietdefiolesdetmoin 9 AnnexeB (informative) Courbedecroissancetypeutilisantle3,5dichlorophnolcommeproduit exprimenter .10 AnnexeC (informative) Dterminationdeladilutionminimalesanseffe
5、tdeseauxrsiduaires11 Bibliographie.12ISO ISO15522:1999(F) iii Avantpropos LISO(Organisationinternationaledenormalisation)estunefdrationmondialedorganismesnationauxde normalisation(comitsmembresdelISO).LlaborationdesNormesinternationalesestengnralconfieaux comitstechniquesdelISO.Chaquecomitmembreintr
6、essparunetudealedroitdefairepartieducomit techniquecrceteffet.Lesorganisationsinternationales,gouvernementalesetnongouvernementales,en liaisonaveclISOparticipentgalementauxtravaux.LISOcollaboretroitementaveclaCommission lectrotechniqueinternationale(CEI)encequiconcernelanormalisationlectrotechnique.
7、 LesNormesinternationalessontrdigesconformmentauxrglesdonnesdanslesDirectivesISO/CEI,Partie3. LesprojetsdeNormesinternationalesadoptsparlescomitstechniquessontsoumisauxcomitsmembrespour vote.LeurpublicationcommeNormesinternationalesrequiertlapprobationde75 %aumoinsdescomits membresvotants. LaNormein
8、ternationaleISO15522atlaboreparlecomittechniqueISO/TC147, Qualitdeleau,sous comitSC5 ,Mthodesbiologiques . LesannexesA,BetCdelaprsenteNormeinternationalesontdonnesuniquementtitredinformation.ISO15522:1999(F) ISO iv Introduction Lesinformationsfourniesparlaprsentemthodepeuventtreutilespourvaluerleffe
9、tdunproduit exprimentersurdespopulationsbactriennesmixtesdanslessystmesdetraitementbiologiquearobiedes eauxrsiduairesainsiquepourchoisirlesconcentrationsinitialesappropriespourlesessaisdebiodgradabilit arobie. Ilconvientdeconsidrerlesrsultatsdecetessaiuniquementtitreindicatifdelatoxicitprobabledupro
10、duit exprimenter,danslamesureolesbouesactivesprovenantdesourcesdiffrentesoummeprovenantdela mmesourcemaisprlevesdesmomentsdiffrentspeuventavoirunecompositionetuneconcentration bactriennesdiffrentes.Demme,lesessaisenlaboratoirenepeuventrellementsimulerlesconditions environnementales.Parexemple,ilnest
11、pastenucomptedeladaptationpluslongtermedesmicroorganismes auproduitexprimenteroudesproduitssusceptiblesdesadsorbersurlebiofilmoulaboueactiversultantdu traitementdeseauxrsiduaires,etengendrantuneconcentrationtoxiquesurunepriodepluslongue.NORMEINTERNATIONALE ISO ISO15522:1999(F) 1 QualitdeleauDtermina
12、tiondeleffetinhibiteurdes constituantsdeleausurlacroissancedesmicroorganismesde bouesactives AVERTISSEMENTLeseauxrsiduairespeuventcontenirdesorganismespotentiellementpathognes. Prendrelesprcautionsappropriespourlesmanipuler.Manipuleravecprcautionlesproduitstoxiques soumislessaietceuxdontonneconnatpa
13、slesproprits. 1Domaine dapplication LaprsenteNormeinternationalespcifieunemthodepourlvaluationdelatoxicitpotentielledunproduit exprimentersurlacroissancedesbactriesarobiesprsentesdanslaboueactive.Leffetinhibiteurestlimit auxmicroorganismescapablesdesedvelopperdanslemilieudessaiorganiquechoisi. Laprs
14、entemthodefournitdesinformationsrelativesauxeffetsinhibiteurssurlesmicroorganismespendantdes priodesdincubationde6haumaximum. Cettemthodeestapplicableleau,auxeauxrsiduairesetauxproduitschimiquessolublesdanslesconditions delessai.Lesproduitschimiquesvolatils,lesproduitscolorsetlesproduitsquiformentde
15、ssuspensionstroubles oudesdispersionsdoiventtremanipulsavecprcaution. NOTE1 Ilconvientdinterprteravecprcautionlesrsultatsobtenusavecdesproduitschimiquesvolatilscarilspeuvent conduiresousestimeruneffetinhibiteurenraisondesdifficultsmaintenirlaconcentrationinitialedanslesfiolesde ssai. NOTE2 Lesprodui
16、tscolorsetfaiblesolubilitdansleauquiformentdessuspensionstroublesoudesdispersions peuventdanslaplupartdescastreexprimentsenutilisantdestmoinsdecouleur/turbidit(9.4)pourlesessaisblanc. NOTE3 Leseffetsinhibiteursdesproduitsexprimentersurlesmicroorganismesdebouesactivesauxquelsleprsent essainestpasappl
17、icable,peuventtredterminsaumoyendunessaidinhibitionsurlabasedemesurages respiromtriques(voirlISO8192). 2Rfrences normatives Lesdocumentsnormatifssuivantscontiennentdesdispositionsqui,parsuitedelarfrencequiyestfaite, constituentdesdispositionsvalablespourlaprsenteNormeinternationale.Pourlesrfrencesda
18、tes,les amendementsultrieursoulesrvisionsdecespublicationsnesappliquentpas.Toutefois,lespartiesprenantes auxaccordsfondssurlaprsenteNormeinternationalesontinvitesrechercherlapossibilitdappliquerles ditionslesplusrcentesdesdocumentsnormatifsindiqusciaprs.Pourlesrfrencesnondates,ladernire ditiondudocu
19、mentnormatifenrfrencesapplique.LesmembresdelISOetdelaCEIpossdentleregistredes Normesinternationalesenvigueur. ISO566716, QualitdeleauchantillonnagePartie16:Lignesdirectricespourlesessaisbiologiquesdes chantillons. ISO8192, QualitdeleauEssaidinhibitiondelaconsommationdoxygnepardesbouesactives . ISO11
20、733, Qualitdeleauvaluationdelliminationetdelabiodgradabilitdescompossorganiquesen milieuaqueuxEssaidesimulationdesbouesactives .ISO15522:1999(F) ISO 2 3 Termesetdfinitions PourlesbesoinsdelaprsenteNormeinternationale,lestermesetdfinitionssuivantssappliquent. 3.1 croissance augmentationdunombredecell
21、ulesmicrobiennesaucoursdelapriodedessai,valueparmesuragedela biomasseduneculture NOTE Labiomassepeuttredterminepartoutemthodeapproprie,parexempleparlaturbiditdensitoptique(DO) ouabsorbanceaumoyendunspectrophotomtre530nmetexprimeenunitsdeturbiditrelative(DO 530 ). 3.2 courbedecroissance croissancemes
22、uredelabiomasse,tracesurungraphiqueenfonctiondelapriodedincubation 3.3 tauxdecroissancespcifique m doublementdelabiomasse( x)parunitdetemps( t) m=1/ xd x/dt NOTE Letauxdecroissancespcifiqueestgnralementexprimenheuresrciproques(h 1 ). 3.4 inhibitiondecroissance diffrencedecroissancelafindelapriodedin
23、cubationenprsencedumilieuorganiquedessaietduproduit exprimenterparrapportcelleobservedansunmlangesimilairenecontenantpasleproduitexprimenter NOTE Linhibitiondecroissanceestexprimeenpourcentage. 3.5 courbedinhibition inhibitiondecroissance,enpourcentage,enfonctiondulogarithmedelaconcentrationduprodui
24、texprimenter 3.6 concentrationefficace valeurCE concentrationduproduitexprimenterdduiteparcalculouinterpolationdelacourbedinhibitionproduisantune inhibitiondecroissancede50%(CE 50 ),20%(CE 20 )ou80%(CE 80 )parrapportcelledunmlangesimilaire sansleproduitexprimenter 4Principe Desfiolescontenantlemilie
25、uorganiquedessaietleproduitexprimentersontinoculespardesmicro organismesdebouesactivescultivspendantunenuitetincubes(22 2)Csurunagitateur.Laduretotale delessaiestgnralementde6h,incluantuntempsdexpositiondenviron4,5h.Labiomassedecescultureset destmoinssansproduitexprimenterestdtermineaumoyendunemthod
26、eapproprie.Ilestrecommand deffectuerlemesuragedelaturbiditaumoyendunspectrophotomtreunelongueurdondede530nmet dexprimerlesrsultatsenunitsrelatives(DO 530 ).Linhibitiondecroissanceenpourcentagelafindelincubation estcalculeparcomparaisonaveclestmoinsetestparexempletracesurunecourbesemilogarithmiqueen
27、fonctiondelaconcentrationdeproduitexprimenterpourendduirelesvaleursdeCE.Lasensibilitdesmicro organismesdebouesactivespeuttrevrifieavecuncomposderfrence(voir6.7). 5Environnement dessai Lincubationdoitavoirlieulabridelalumireousousunclairagediffusdansuneenceintemaintenue (22 2)Cetexemptedevapeurstoxiq
28、uespourlesmicroorganismes.ISO ISO15522:1999(F) 3 6Ractifs Nutiliserquedesractifsdequalitanalytiquereconnue. 6.1Eaudistilleoudminralise. 6.2Milieuorganiquedessai 6.2.1Composition 6.2.1.1SolutionA Dihydrognophosphatedepotassiumanhydre(KH 2 PO 4 ) 8,5g Hydrognophosphatededipotassiumanhydre(K 2 HPO 4 )
29、21,75g Hydrognophosphatededisodiumdihydrat(Na 2 HPO 4 ,2H 2 O) 33,4g Chloruredammonium(NH 4 Cl) 0,5g Eau(6.1),enquantitsuffisantepourobtenir 1000ml Afindevrifiercettesolutiontampon,ilestrecommanddemesurerlepHquidoittredenviron7,4;sicelanest paslecas,prparerunenouvellesolution. 6.2.1.2SolutionB Disso
30、udre22,5gdesulfatedemagnsiumheptahydrat(MgSO 4 ,7H 2 O)dans1000mldeau(6.1). 6.2.1.3SolutionC Dissoudre36,4gdechloruredecalciumdihydrat(CaCl 2 ,2H 2 O)dans1000mldeau(6.1). 6.2.1.4SolutionD Dissoudre0,25gdechloruredefer(III)hexahydrat(FeCl 3 ,6H 2 O)dans1000mldeau(6.1).Prparercette solutionjusteavante
31、mploi. NOTE Ilnestpasncessairedeprparercettesolutionjusteavantlutilisationsilonyajouteunegouttedacide chlorhydriqueconcentr(HCl). 6.2.1.5SolutionE Ilestrecommanddajouterleslmentstracesuivantspouramliorerlacroissancearobie: Acideborique,H 3 BO 3 50mg Chloruredecobalthexahydrat,CoCl 2 ,6H 2 O5 0 m g S
32、ulfatedemangansemonohydrat,MnSO 4 ,H 2 O1 5 m g Molybdatededisodiumdihydrat,Na 2 MoO 4 ,2H 2 O1 5 m g Chloruredenickelhexahydrat,NiCl 2 ,6H 2 O1 0 m g Sulfatedezincheptahydrat,ZnSO 4 ,7H 2 O5 0 m g Dissoudrelesractifsdans1000mldeau(6.1). 6.2.1.6SolutionF (substratorganique) Dissoudre80gdextraitsecde
33、bouillondeculture(mlangedextraitdeviandedebufetdepeptonedisponible danslecommerce)et60gdactatedesodiumdans1000mldeau(6.1)ouutiliserlesconstituantsorganiquesde leffluentsynthtiquespcifidanslISO11733.ISO15522:1999(F) ISO 4 6.2.2Prparation Pour1000mldemilieudessai,ajouterenviron800mldeau(6.1): 10mldeso
34、lutionA; 1mldechacunedessolutionsBE(lasolutionEestoptionnellemaisrecommande); 25mldesolutionF. Complter1000mlavecdeleau(6.1). 6.3Solutiondazoturedesodium (enoption) Dissoudre100gdazoturedesodium(NaN 3 )dans1000mldeau(6.1),pourservirdeconservateur. 6.4Solutiondhydroxydedesodium Dissoudre40gdhydroxyde
35、desodium(NaOH)dans1000mldeau(6.1)pourajustementdupH. 6.5Solutiondacidesulfurique Dissoudre98gdacidesulfurique(H 2 SO 4 )dans1000mldeau(6.1)pourajustementdupH. 6.6Solutionduproduitexprimenter Utiliserdeschantillonsdeauetdeauxrsiduairesdirectementou,sincessaire,dilusdemanireapproprie. Dissoudreunequan
36、titapproprieduproduitexprimentersolubledansleau,parexemple1000mgdans 1000mldeau(6.1)commesolutionmre.DterminerlepHdelasolutionmreetdeseauxrsiduaireset,si ncessaire,lajuster7,0 0,2aveclasolution6.4ou6.5.NepasajusterlepHsileffetacideoualcalindoittre dtermin.Pourcequiconcernelaprparation,sereporterauss
37、ilISO566716.Deschantillonsprsentantune turbiditsignificativepeuventaffecterladterminationdelaturbidit.Danscecas,utiliserlISO8192. 6.7Solutionmredelasubstancederfrence Dissoudre1000mgde3,5dichlorophnoldans1000mldeau(6.1)et,sincessaire,ajusterlepH7,0 0,2 aveclasolution6.4ou6.5. 7Inoculum Prleverlaboue
38、activedanslebassindarationduneusinedetraitementdeseauxrsiduaires,etplus gnralementdeauxusesdorigineprincipalementdomestique.Sidventuelseffetsinhibiteursnesontpas dterminerdemaniregnralemaispouruneinstallationdfinie,utiliserlabouedecetteinstallation.Laisserles flocsdebouesedcanterpendantenviron15min,
39、ouplussincessaire,etutiliserlesurnageantpourlinoculation. Utiliserlesurnageantfraisou,sincessaire,leconserverpendant24hauplusenviron4C. 8Appareillage Sassurerquetoutelaverrerieatsoigneusementnettoyeetquelleestnotammentexemptedematires organiquesoutoxiques.Utiliserunquipementcourantdelaboratoireetles
40、appareillagessuivants. 8.1 Fiolesdessai,telsquedesfiolesErlenmeyerde1000mlet100ml,muniesdeprfrenceduneseule chicaneetfermes,parexemple,aumoyendebouchonsdouate. 8.2 Dispositifdagitation pourfiolesErlenmeyer,fonctionnantunevitessedenviron150r/min. 8.3 Enceintemaintenuetempratureconstante ou incubateur
41、(22 2)C.ISO ISO15522:1999(F) 5 8.4 Spectrophotomtreultravioletoulumirevisibleetdescuvesadaptes, detrajetoptiquede1cmou 4cmdeprfrence,outoutautreinstrumentpermettantdedterminerlabiomasse. 8.5 pHmtre. 9Mode opratoire 9.1Type dessai Ilestadmisderaliserdiffrentstypesdexprimentation(voirlannexeA).Pourcequiconcerne,parexemple,un produite
